纺织精练中碱性果胶酶稳定性的改进研究

从碱性果胶酶在纺织清洁生产中的应用条件出发,在60℃和pH 9.1左右,系统研究了不同稳定剂对提高碱性果胶酶的稳定性的影响。由此,得到了对酶稳定性作用较突出的添加剂以及复合稳定剂,较佳配方为乙酸钠6%(m/v)、MgCl2.2H2O 2%(m/v)。结果表明,添加稳定剂后的碱性果胶酶在棉织物精练中的应用特性得到了提高,达到了棉织物精练的需要。     

碱性成纤维细胞生长因子制剂稳定性的研究

本研究通过MTT法检测bFGF的活性,研究了不同温度下四种制剂中bFGF的稳定性。结果得到,bFGF在2．0mol／L NaCl,0．05mol／L PB溶液(pH7.2)中,-20℃下贮藏6个月活性没有明显的下降;bFGF水剂贮藏在4℃下,bFGF活性随贮藏时间延长逐步下降,单位活性bFGF用量由0.4ng／mL下降为0．9ng／mL,室温下bFGF的活性丧失快于4℃下贮藏,3个月后bFGF单位活性用量由0．4ng／mL下降为1．0ng／mL。而乳霜剂和胶束剂中的bFGF在两种温度下贮藏一个月后,均检测不到对细胞生长的刺激作用。说明低温有利于制剂中bFGF的稳定,乳霜剂和胶束剂中的bFGF稳定性不好。     

添加保护剂促进碱性果胶酶的工业保藏稳定性

保藏稳定性对于商品酶具有重要的实际意义。通过对碱性果胶酶的保护剂进行研究,最终筛选得到最优复合保护剂配方为：Tween201mL／L,六偏磷酸钠1．5g／L,明胶5g／L,甘油5％（口～）,CaCl22g／L;热稳定性提高18倍。此外在常温保藏时,在酶液中添加0．3‰山梨酸钾和0．3‰苯甲酸钠,能有效提高保藏效果,减少酶液染茵、混浊和发臭,最终常温保藏90d后酶活保留率为84．5％,达到工业化保藏的要求。     

碱性磷酸酶在壳聚糖上的固定化作用

本文报道以蟹、虾废壳为原料提取壳聚糖,用戊二醛作交联剂,将碱性磷酸酶固定于壳聚糖上。同时探讨了一定量湿壳聚糖载体与交联剂浓度,给酶量及产率等关系的最适固定化酶条件,并对固定化酶的热稳定性、操作稳定性、米氏常数、最适pH、最适温度等理化性质进行了探讨。     

包衣微丸型碱性蛋白酶的制备

开发了一种包衣微丸型碱性蛋白酶的制备工艺,结果表明:30 L发酵中罐发酵50 h比酶活可达4.26×104 U/mL,发酵液经絮凝处理、板框压滤、膜浓缩后可制成酶活达300 000 U/mL的酶浓缩液.经流化后制得含酶颗粒,再包裹薄层后,得包衣微丸型碱性蛋白酶.对制备的包衣微丸型碱性蛋白酶的稳定性、去污效果等指标进行了评估.制备的包衣微丸型碱性蛋白酶产品在严苛条件下的稳定性与国外产品( Savinase 8.0T、PuraFast 2000HS)相当,产品暴露在37℃、75％湿度下8周后仍可保持74％的酶活力,产品的去污效果优于国外产品.制备的包衣微丸型碱性蛋白酶颗粒大小均匀,流动性和分散性好,对外界高温、高湿等不良环境具有很强的抵抗能力,适于工业化生产.     

戊二醛交联法制备固定化酶的改进研究

本文对以交联聚丙烯酰胺为载体的戊二醛交联法制备固定化酶进行了两点改进t (1)将戊二醛进行醛基保护,避免发生交联反应; (2)将载体的酰胺基经酰肼化反应,使其转化成较活泼的酰肼基。然后将含有活泼酰肼基的载体用保护了醛基的戌二醛进行载体,活化反应,再偶联脲酶、L－门冬酰胺酶,可缩短反应时间、提高偶联酶量及酶活性。     

bFGF活性稳定性的研究

目的：研究bEGF的生物活性稳定性。方法：通过在不同稳定剂中,改变bEGF与肝素钠结合的比例,经MTT法检测bEGF生物活性。结果：以甘露酵、甘油和人血白蛋白作物稳定剂时,bEGF与肝素钠的最佳结合比例为3：1,以海藻糖作稳定剂时,bEGF与肝素钠的最佳结合比例为1：1,以右旋糖苷作稳定剂时,bEGF与肝素钠的最佳结合比例为2：1。以右旋糖苷作稳定剂最好,在甘露酵、甘油和人血白蛋白稳定剂较好,以海藻糖作稳定剂稍差。结论：配方中有肝素钠存在可明显提高bEGF的生物活性。     

低浓度戊二醛对红细胞膜力学特性的影响

采用显微动态图像分析技术无扰、实时、在位地研究了低于0．005％浓度的戊二醛对年轻、老龄红细胞膜变形能力的作用．实验结果表明随着戊二醛浓度的增加,年轻、老龄红细胞膜的弯曲弹性模量明显变大,而老龄红细胞增加幅度更大;且随着戊二醛固定时间的延长,年轻、老龄红细胞膜变形能力的差距越来越大．说明作为免疫分析中常用固定剂的戊二醛对年轻、老龄红细胞细胞骨架的影响差异较大。研究结果可为适当选取在免疫分析测定中,以及以年轻红细胞作为药物载体时需采用的戊二醛浓度提供依据。     

酸性和碱性酶稳定性机制及其识别

了解酸性和碱性酶稳定性机制并对其进行识别具有重要理论和实践意义。通过分析105条酸性酶和111条碱性酶序列的氨基酸组成, 结果表明: 酸性酶中Trp、Tyr、Thr和Ser的含量明显高于平均值, 而Glu、Lys、Met和Arg的含量则明显低于平均值; 碱性酶中Trp、Ala和Cys的含量略高于平均值, 而Lys、Arg和Glu的含量则略低于平均值; 酸性和碱性酶中Ala、Glu、Leu、Asn、Arg、Ser和Thr的含量存在较大差异。在此基础上, 发展了一种加权氨基酸组成的方法对两种酶进行识别, 其自一致性检验的识别精度可达86.1%, 5倍交叉验证的精度为83.3%。建立了一种基于序列识别酸性和碱性酶的新方法。     

戊二醛复合消毒剂对猪病病毒杀灭效果的研究

目的　研究戊二醛复合消毒剂对猪病病毒的杀灭效果。方法　将猪细小病毒 (porcinepavrovirusvirus ,PPV)、猪繁殖呼吸综合征病毒 (porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)和猪伪狂犬病病毒(porcinepseudorabiesvirus,PRV)分别与不同浓度的戊二醛复合消毒剂作用后 ,接种于长满细胞单层的细胞培养板中 ,根据细胞是否产生病变情况 ,确定消毒剂杀灭病毒的最佳浓度 ;同时 ,还将不同浓度的消毒剂与猪瘟病毒 (hogchloeravirus,HCV)作用后 ,对兔进行静脉注射 ,根据兔的体温变化情况 ,判断消毒剂杀灭病毒的最佳浓度。结果　1%浓度的消毒剂 ,可在 2 0min之内有效杀灭PPV、PRRSV和PRV ;0 5 %浓度的消毒剂 ,可在 10min之内有效杀灭HCV。结论　戊二醛复合消毒剂具有高效杀灭病毒的作用 ,适用于养殖场、医疗卫生行业及传染病流行地区的消毒灭菌 ;采用细胞感染法检测和评价消毒剂对病毒的杀灭效果是一种可行的体外试验方法     

戊二醛浓度对免疫电镜胶体金标记密度影响的定量分析

经４％多聚甲醛＋０或０．５％戊二醛固定（１小时）大豆子叶细胞,大部分细胞器和蛋白体发生较大程度的变形,甚至解体,随着固定剂中戊二醛浓度升高对１．５、２．５％。细胞超微结构保存效果提高,蛋白体内反映７Ｓ蛋白质存在的胶体金颗粒密度分别为１９．７％和１１．４个／μｍ＾２。     

蝮蛇毒碱性磷酯酶A2基因的克隆

从蝮蛇毒腺中抽提总ＲＮＡ。利用人工合成寡核苷酸引物作逆转录,以ｃＤＮＡ为模板进行体外扩增,获得磷脂酶Ａ２基因。克隆至ｐＢＳ－ｋｓ载体中。通过对３个碱性ＰＬＡ２基因单克隆分别作ＤＮＡ作全序列分析,推ｐｒｏ－ＢＰＬＡ２由１３８个氨基酸残琪构成,已测定的部分氨基酸序列比较,基本相符。     

戊二醛浓度对免疫电镜胶体金标记密度影响的定量分析

 经4％多聚甲醛+0或0.5％戊二醛固定(1小时)大豆子叶细胞,大部分细胞器和蛋白体发生较大程度的变形,甚至解体。随着固定剂中戊二醛浓度升高至1.5、2.5％,细胞超微结构保存效果提高,蛋白体内反映7S蛋白质存在的胶体金颗粒密度分别为19.7和11.4个／µm2。     

嗜碱性短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究III．酶的性质及应用

本文对嗜碱性短小芽孢杆菌(Alkaliphilic Bacillus pumilus)B45菌株产生的碱性蛋白酶性质进行了研究。该酶对酪蛋白水解的最适pH为10．0—10．5,在PH7-l0之间稳定,最适反应温度为45℃,稳定性较好。最适底物浓度为1％。四硬酸钠、氯化钙对酶有激活作用,三聚磷酸钠及碳酸钠在常温下对酶话力无影响,而在40℃时对活力略有抑制,加入0．2g／LCaCl2可以保护酶的活性。B 45蛋白酶对血、奶污布的去污效果明显,其去污力比一般洗衣粉高10-13倍。     

戊二醛处理对胶原蛋白结构的影响

用全内反射红外光谱研究了戊二醛处理前后胶原蛋白和富含胶原蛋白的乳鼠皮的酰胺Ｉ带。结果表明：经戊二醛处理后,胶原蛋白和乳鼠皮的红外谱酰胺Ｉ带中位于１６６０、１６４３、１６３３ｃｍ－１左右的三个主要谱分量中较高波数分量的面积百分比下降,而位于中间和低波数侧的分量面积百分比上升。这一变化与胶原蛋白热变性后这三个谱分量的变化趋势［１］相似,提示戊二醛处理削弱了胶原蛋白三股螺旋间的氢键,加大了螺旋间的间隔。螺旋间空隙的加大,为胶原蛋白的钙化提供了可能的位点。     

嗜碱性芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究II.诱变株选育及产酶条件

嗜碱性的短小芽孢杆菌R115(Alkaliphilic Bacillus pumilus)经0．4mg／ml亚硝基胍和0.4μg／ml利福平处理,获得一株具有高产稳产碱性蛋白酶的变异株(B45),产酶活力由2803μ／ml提高到6000u／ml(28℃测定),该诱变株的最适产酶条件为起始pH10．5-11．0,温度30—35℃,培养时间52—54b。0．4-0．6％K2HPO4．可增加酶的产量。