农杆菌介导转化小麦幼胚获得抗除草剂再生植株

采用农杆菌介导法转化小麦品种G54授粉10 d后的幼胚,经5‰和2‰ PPT筛选获得83株正常再生植株.PCR及Southern杂交检测证明其中8株再生苗为转bar基因植株,这些植株对除草剂Basta的抗性明显提高.实验结果还证明,高糖浓度的培养基对愈伤组织诱导、植株再生及生根都有显著的促进作用;在感染液和共培养基中添加乙酰丁香酮有利于转化株的筛选.     

农杆菌介导的小麦遗传转化几个影响因素的研究

采用携带gus和（或）bar基因双元表达载体（p3301,pBTAaB)的3个根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens)菌株（AGL-1,EHA105和LBA4404）对普通小麦（Triticum aestivumL.)冬性栽培品种农大170和农大146的幼胚及幼胚愈伤组织进行了遗传转化,结果表明,菌液浓度OD6001.0和侵染时间1h对外植体的生存和转化最为有利;侵染前对外植体进行高渗处理较明显地提高了抗性愈伤获得率;乙酰丁香酮（AS）对小麦转化的作用随菌株和外植体的不同而异;菌株/质粒组合,受体基因型及外植体的类型,年龄和生理状态对转化效率有很大的影响,条件优化后,得到大量具有PPT抗性的愈伤和一些抗性植株,抗性愈伤的GUS染色阳性率在50%-60%之间,所检测的抗性苗呈GUS阳性,对6株抗性苗的PCR和Southern检测初步证明,外源基因已经整合到其中3株的基因组中。     

农杆菌介导的玉米遗传转化研究进展

本文就农杆菌介导的玉米遗传转化的技术要点及原理等进行了综述,并对各种影响农杆菌率玉米效率的关键因子包括农杆菌的菌株与载体、标记基因、受体材料的基因型、来源和发育状态以及组织培养的条件等进行了讨论。     

农杆菌介导的植物基因转化研究进展

农杆菌介导的植物基因转佛当今植物基因转化的主要方法之一,因而深受关注,本文从农力介导的基因转化机理,植物对农杆菌侵染的反应,转基因植物的遗传表达,以及农杆菌对单子叶植物的转化等方面论述了该领域的最新研究进展,并提出了进一步研究的方向。     

农杆菌介导棉花大规模高效转化体系的研究

对农杆菌介导法转化棉花技术体系进行了综合改进,突破基因型的限制,使多品种或基因型(10个以上)的我国主栽棉花品种(系)转化成功,其中中棉所24号发展成为快速模式化转化品种(转化周期5～7个月,转化率8．1％),CCRI27、CCRI36等多个品种转化体系基本成熟。不同转化体系的愈伤组织诱导率为10％～40％,愈伤组织胚性愈伤诱导率达到10％～40％,转化率总体平均达到1．8％,并对大批量再生苗的鉴定予以程序化。实现棉花转基因规模化,达到年产转基因棉花植株2000～4000株以上的水平。     

农杆菌介导籼稻优良恢复系bar基因的遗传转化研究

应用农杆菌介导转化体系,成功地将含有CaMv35s启动子启动的bar基因导入籼稻幼胚来源的愈伤组织,获得籼稻优良恢复系T461、R402和752三个品种（系）共47个抗除草剂Basta的转基因株系,Southem分析结果表明,转基因植株基因组中检测到bar基因的整合,转基因植株自交后代Basta除草剂抗性鉴定表现出分离,且大多数为1-2个整合位点的孟德尔方式遗传。结果表明,根癌农杆菌介导法可以有效且可靠地转化籼稻。     

根癌农杆菌介导的油菜基因转化研究进展

对根癌农杆菌介导的油菜基因转化研究中的几个关键因素及进展作了综述,并对目前存在的问题进行了分析。     

农杆菌介导单子叶植物基因转化研究进展

农杆菌介导基因转化系统是双子叶植物基因转化的普通而有效的手段,其优点倍受重视,近年来又广泛用于曾被认为不在农杆菌宿主范围之内的单子叶植物的基因转化研究,并在很多重要粮食作物上获得成功,例如水稻、玉米、大麦、小麦等。本文就农杆菌转化的优点,转化机理以及对单子叶植物转化的研究进展作一概述。     

根癌农杆菌介导的小麦转基因植株再生

根癌农杆菌菌株Ａｇｌ Ⅰ的Ｔｉ质粒ｐ＾ＵＮＮ－２带有Ｕｂｉ１启动子驱动的ｎｐｔⅡ基因。７种基因型小麦幼胚或胚性愈伤组织用于农杆菌介导的转化实验。经过不同家度巴龙霉素的筛选,３种基因型小麦产生抗性愈伤组织并再生植株。再生植株经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定为转基因植株,转化频率为３．７％－５．９％。小麦基因型及转化材料的起始生理状态的影响Ｔ－ＤＮＡ转移的重要因素。     

可育的抗除草剂溴苯腈转基因小麦

报道了采用微粒轰击（Ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ ｂｏｍ ｂａｒｄｍ ｅｎｔ） 幼胚将除草剂抗性基因导入小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．）的转化研究。实验共使用了１３ 个小麦品种, 从开花后１４～１８ ｄ 的籽粒中剥取幼胚, 植物表达质粒含有ＣａＭＶ ３５Ｓ启动子控制的除草剂溴苯腈抗性基因ｂｘｎ 以及筛选标记基因ＮＴＰⅡ。采用高压放电基因枪,用质粒ＤＮＡ 包被的钨粒轰击预培养３ ｄ 的幼胚。在含有卡那霉素类似物ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ Ｇ４１８ｓｕｌｐｈａｔｅ 的ＭＳ培养基上, 经过多步骤筛选和分化, 从８００ 多个幼胚中获得了１６ 株转化苗。除草剂抗性鉴定和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交分析证明, 其中４ 株为转基因植物,具有溴苯腈抗性, 并且自交可育。转化工作从分离幼胚到转化苗鉴定完毕, 最短时间为６ 个月, 因此, 该方法是一项快速有效的基因导入技术     

金鱼草基因转化和转基因植株再生

本实验采用根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４（ｐ３５ＳＧＵＳＩＮＴ与金鱼草下胚轴切段共培养,将ＧＵＳ基因导入金鱼草细胞,通过不定芽发生途径获得抗Ｇ４１８再生植株．经ＤＮＡ／ＤＮＡ斑点杂交及ＧＵＳ活性原位组织检测初步证实外源基因ＧＵＳ已整合进金鱼草基因组并得到表达．     

通过基因枪轰击转化获得转基因小麦植株的研究

利用ＪＱ－７００型高速基因枪将ｐＤＭ３０２质粒ＤＮＡ上的ｂａｒ基因即ＰＡＴ酶基因导入了冬小麦品种“农大１４６”的幼胚中。经过在含有的选择培养基上筛选,得到了９块具有ｐｐｔ抗性的愈伤组织。ＰＣＲ电泳检测与ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ发要交结果显示,外源ｂａｒ基因已转化进了由其中４块愈伤组织再生出的转基因的小麦植株中。     

根癌农杆菌对甘蓝型油菜的转化及转基因植株的再生

用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ）共培养法把外源基因导入甘蓝型油菜（Ｂｒａｓｓｉ－ｃａ ｎａｐｕｓＬ．）主要栽培品种“云北２ 号”,获得转基因植株。所用外植体为带有１—２ ｍ ｍ 子叶柄的完整子叶,根癌农杆菌为Ａ２０８ＳＥ（ｐＴｉＴ３７－ＳＥ, ｐＲＯＡ９３）。Ｔｉ质粒ｐＲＯＡ９３ 带有ＮＰＴⅡ及ＧＵＳ嵌合基因。共培养２ 天后转到附加２５ ｍ ｇ／Ｌ卡那霉素的分化培养基（ＭＳ＋ ４．５ ｍ ｇ／ＬＢＡＰ）上。ＡｇＮＯ３ 和羧苄青霉素促进芽的分化,头孢霉素则有抑制作用。最高转化频率为２７％ 。把分化出的茎芽切下,插入含有２５ ｍ ｇ／Ｌ卡那霉素的生根培养基中。羧苄青霉素不利于根的形成。把完整抗性植株移入盛土壤的盆中,生长状况良好。测定β－葡糖苷酸酶活性,８４％ 明显高于对照。以ＮＰＴⅡ基因作探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析,证实外源基因已插入到植物细胞基因组中     

高必需氨基酸转基因马铃薯的研究

８０年代以来,马铃薯遗传转化系统日趋成熟,转基因工程植株已被广泛应用于基础科学研究［１］。作为食物蛋白和能量主要来源的马铃薯,提高其蛋白质含量及质量的遗传工程研究正受到人们的普遍关注［２］。Ｙａｎｇ等［２］将旨在改善氨基酸平衡的ＣＡＴ－ＨＥＡＡＥ（氯酶素乙酰转移酶－高含量人体必需氨基酸）融合基因导入马铃薯,获得了Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的证据,但尚缺少氨基酸分析的资料。玉米醇溶蛋白（ｚｅｉｎ）［３］是一个富含甲硫氨酸的贮存蛋白,它和人工合成的ＨＥ…     

表达黄瓜花叶病毒外壳蛋白的转基因番茄抗黄瓜花叶病毒侵染

通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导将黄瓜花叶病毒外壳蛋白(CMV CP)的cDNA成功地引入番茄(Lycopersicon esculentum)植株中,并得到转基因植株。用强致病力CMV株系接种后,表达CMV外壳蛋白的转基因植株表现出对CMV侵染的抗性。转基因植株RI代的抗性基因以接近3:1比例分离。对R_1代接种CMV后,表达CMV CP的植株病症减轻,发病率、病情指数及病毒积累量明显低于对照。病症出现推迟1个多月。     

麦类品种对麦双尾蚜的耐害性及产量损失率

在新疆伊犁就36个麦类品种对麦双尾蚜Diuraphis noxia (Mordvilko) 耐害性和产量损失的研究结果表明,其中11个品种受害后千粒重下降10%以下,为耐害性较强的品种,它们是一粒小麦、墨玉稻穗、爱因亢、小偃95、Mg8349、短芒黑边红、伊春4号、小黑麦12、浮纳尔、毛大头和T1008。综合考虑不同品种的自然受害率和受害后千粒重的下降,各品种的总体产量损失率在0～10.56%。产量损失率在2%以下的有14个品种,即一粒小麦、爱因亢、Mg8349、Mg8786、浮纳尔、短芒黑边红、T1008、墨玉稻穗、小黑麦12、广引74、Mg4521、黄库尔班、Mg8816和小偃95。     

转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因抗虫甘蓝植株的获得

利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入甘蓝(Brassica oleracea var.capitata L.)栽培品种“京丰”和“迎春”,并分别获得了转基因再生植株。对NPTⅡ的ELISA检测表明,标记基因NPTⅡ已在再生植株中得到有效表达。对转化植株进行Southern blot分子杂交实验进一步证明CpTI基因已整合到甘蓝的基因组。实验室内的叶片离体饲虫及盆栽饲虫试验表明,转基因甘蓝对菜青虫具有一定抗性。实验中还观察到,采用愈伤组织分化途径可以获得较高的转化频率,但嵌合体较多;而直接分芽的途径转化率低,但嵌合体较少。     

抗旱性不同的冬小麦幼苗对渗透胁迫的生理反应

抗旱性不同的冬小麦幼苗在渗透胁迫下叶片相对透性、Pro 含量和在总游离氨基酸中的Pro 比例均增加,但品种间变化幅度有明显差别.在严重胁迫下,抗旱性弱的品种济南13.烟农15和鲁麦5号的叶片相对透性增加大于抗旱性强的品种昌乐5号、秦麦3号和山农587;而Pro 含量和在总游离氨基酸中Pro 比例的增加小于抗旱性强的品种.叶片Pro 累积与RWC 呈显著负相关.     

太谷核不育小麦可育花药内游离脯氨酸的来源、利用及与不育花药败育的关系

太谷核不育小麦营养体内的游离脯氨酸能迅速地运入并积累于花药中,花药有将谷氨酸转化成脯氨酸的能力。脯氨酸向花药内以主动运输为主,能被DNP所抑制,与旗叶的功能密切相关。在发育阶段Ⅰ(小孢子释放前后),脯氨酸已不能由营养体运入不育花药,运输的障碍在花丝或花药中,不育花药缺乏游离脯氨酸可能是主要原因。发育阶段Ⅰ的可育花药内,脯氨酸是合成蛋白质或其他大分子物质的原料。因而,脯氨酸的缺乏可能是加速不育花药小孢子败育和小孢子释放后急剧解体的重要原因。