稗草致病菌——尖角突脐孢菌菌株RAPD指纹图谱的分析

以我国主要稻区的稗草植株上分离的17株尖角突脐孢菌菌株为试验材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,并运用优化的RAPD分析体系对其进行了分子标记遗传差异研究。从25个随机引物中筛选出20个扩增效果好的引物,对全部试验材料进行了RAPD扩增,共得到239条有效带,其中多态性带229条（占95.8%）。依据扩增结果建立了17株尖角突脐孢菌基因型的DNA指纹图谱并对其进行了有效区分。根据RAPD分析结果计算了菌株间的遗传距离,分析了它们的遗传差异并进行了聚类分析,结果表明,RAPD分子标记技术是能够用于杂草致病菌资源的鉴定的,并可以进一步应用于特定性状的基因标记研究。     

利用RAPD技术对拟青霉属菌株进行分类鉴定

用9个引物对来自安徽和浙江的16株12种拟青霉（Paecilomyces Bainier)进行RAPD分析。获得的平均相似性系数表明,种间的相似系数在21%-46%之间,RAPD指纹图谱在拟青霉属不同种间具明显的种的特异性,可区别所有形态近似的种类,是鉴定菌种的有效途径,RAPD结果也暗示分离自灰僵蚕的RCEF197可能是一新种,对比RAPD聚类树状图和基于ITS构建的分子系统发育图,表明该聚类树状图不适于分析种间亲缘关系。     

烟草黑胫病菌株亲缘关系的RAPD分析

从２２０个ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡｓ）随机引物中所选出的多态扩增性强的２１个引物对来源不同的３３个烟草黑胫病菌株进行全基因组ＤＮＡ遗传多样性分析和指纹构建。选用引物对受试菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,共产生２４３条ＤＮＡ标记图带,其中１９１条为多态性图带,多态检测率为７８．６％。利用ＵＰＧＭＡ（Ｕｎｗｅｉｇｔｈｔｅｄ Ｐａｉｒ－ｇｒｏｕｐ Ｍｅｔｈ     

皮肤癣菌表型及分子生物学鉴定

皮肤癣菌（Dermatophytes）是浅部真菌病的主要致病菌种,是一群浅在寄生性真菌,侵犯皮肤、毛发和指（趾）甲,寄生或腐生于表皮角质、毛发和甲板的角蛋白组织中。在生物分类学上,皮肤癣菌的有性时代属于子囊菌亚门,其无性阶段属于半知菌亚门、丝孢菌纲、丝孢菌目、丛梗孢科,根据大分生孢子的特征可将皮肤癣菌的3个属加以区分。     

1株用于甜瓜采后病害生物防治的假单胞菌株的分离及鉴定

甜瓜以营养丰富口味独特而深受世人青睐。同时,其采后病害高效、"绿色"防治药剂的缺乏也成为多年来困扰甜瓜生产的难题。本文采用直接生物测定的方法,从健康的甜瓜表面分离到1株有生防潜能的菌株X4。该菌株对引起甜瓜主要采后病害的粉红单端胞菌(Trichothecium roseum)、镰刀菌(Fusarium spp.)和链格孢菌(Alternaria alternata)的防治效果分别达到了90.6%、84.4%和67.4%;定殖实验显示,接菌4 d后该菌在瓜内数量可上升并稳定至1.1×10~6CFU/ml;通过16S rDNA测定、形态特征观察及生理生化测定结果表明该菌为Pseudomonas fluorescens biovarⅢ。     

马拉色菌表型及分子生物学鉴定的研究进展

马拉色菌作为一种嗜脂性的条件致病菌引起人的感染逐渐增多,其与多种疾病的相关性也日益受到临床上的关注。现就其形态学、生理生化学及分子生物学的鉴定方法、研究现状作一综述。     

国产羊肚菌菌株的RAPD鉴别

对国内各地收集和采集分离到的 15个羊肚菌菌株和 1个子实体对照进行了RAPD分析 ,实验筛选的 6个引物对宽圆羊肚菌 (MorchellarobustaBond .)子实体及其分离菌株的DNA指纹完全相同 ,引物OPD - 0 8扩增的RAPD谱带能够将 15个供试羊肚菌菌株完全区别开来 ;聚类分析结果显示 :其中一菌株与别的菌株相似系数极低 ,可能为一杂菌菌株 ;其余菌株在相似系数 0 75 44时 ,可分为 6个大的类群 ,说明供试菌株间存在较大的遗传差异。     

油松菌根促生细菌——荧光假单胞菌的分离与鉴定

为了探讨菌根促生细菌荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)与菌根真菌的互作关系,本实验从油松菌根上分离得到36株在紫外灯下产荧光的细菌菌株,以荧光假单胞菌9702作为标准菌株,对分离菌株进行显微观察、生物学鉴定和16S rDNA序列分析,结果确定HDY-8、HDY-9、HDY-20、HDY-35共 4株菌株为荧光假单胞菌,并分别命名为P.fluorescens HDY-8、P.fluorescens HDY-9、P.fluorescens HDY-20、P.fluorescens HDY-35.用这4株细菌菌株分别与外生菌根真菌(ECMF)粘盖牛肝菌(Suillus bovinus)、褐环粘盖牛肝菌(Suillus luteus)和褐黄牛肝菌(Boletus luridus)进行纯培养互作研究.结果表明,只有P.fluorescens HDY-20对3种外生菌根真菌有不同程度的促生作用,并对S.luteus促进效果最好,S.bovinus次之,B.luridus最差;P.fluorescens HDY-20促进S.bovinus、S.luteus和B.luridus菌丝生长的最佳浓度分别为2.4×109 cfu/mL、0.8×109～2.4×109 cfu/mL和0.8×109 cfu/mL,与对照相比S.bovinus和S.luteus的生物量达到极显著差异(P<0.01),B.luridus的达到显著差异(P<0.05),且分别比对照增加6.5%、9.1%和4.3%.     

术后复数菌感染及菌株鉴定

颅脑术后复数菌感染较为罕见 ,2 0 0 3年 4月从一患儿脑脊液、切口分泌物中同时分离出粪肠球菌、表皮葡萄球菌、新型隐球菌 ,现报道如下。1　材料与方法1.1　病例简介　患者 ,男 ,13岁 ,山区农民 ,水族。因发热、头痛、抽搐入院。家属诉 :患儿两月前在当地医院行“侧脑室小脑延髓池分流术”,术后常感头痛 ,近 2天突然头痛加剧 ,嗜睡、神志恍惚 ,阵发性四肢抽搐 (持续 3～ 5min不等 ) ,枕部术口液体溢出 ,间断出现寒战、盗汗、体温波动在 3 8～ 40℃之间 ,查体 :脉搏 13 5次 / min,外周血象 :WBC2 1.5× 10 9/ L、N 90、L 0 .10 ,Hb91g/ …     

鹅膏菌属真菌RAPD分析及亲缘关系的研究

本文对采自湖南莽山的２６种鹅膏菌属（Ａｍａｎｉｔａ）真菌进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析,４０个随机引物中筛选出扩增效果较好的６个引物,每个引物能产生１～１０条ＤＮＡ条带,获得的ＲＡＰＤ谱带清晰并呈现多态性ＯＰＧ１５、ＯＰＨ０４两个引物扩增的ＲＡＰＤ谱带能将２６种鹅膏菌完全区分开来,通过６个引物的ＲＡＰＤ分析获得的平均相似性系数表明种与种之间的相关系数在２０－６０％之间,平均链锁聚类分析     

用RAPD分子标记鉴别黑木耳菌种的研究

运用RAPD技术,选用20个寡核苷酸引物对我所供应的8个黑木耳生产菌株进行了分子鉴别。结果表明:在选用的20个随机引物中,有10个引物能对8个供试黑木耳菌株扩增出清晰、稳定的DNA谱带。用NTSYS软件进行聚类分析,在相似水平为0．70阈值时,可将供试的8个黑木耳菌株归为3个组群。     

RAPD分子标记在酱油生产菌系统发育分析中的应用

以米曲霉沪酿3.042(AS3.951)、酱油曲霉AS3.495为参照,对从商品酱油曲精中分离到的8株酱油生产菌进行RAPD分析。实验筛选到6个扩增产物谱带多、特征好、覆盖面广的引物:Primer1、Primer5、Primer6、Primer7、Primer8、Primer9,重复实验证明其RAPD-PCR扩增图谱具有较好的稳定性,扩增产物谱带一般4~8条,各实验菌株主带1~4条,次带丰富。根据RAPD-PCR扩增图谱构建的系统进化树较好地吻合了传统的形态分类学,证实了RAPD分子标记在酱油生产菌系统发育分析中应用的可行性。     

散斑壳属部分种内及近似种间的RAPD分析

从100个随机引物中选取重复性好、条带清晰的随机引物分别对针叶树和阔叶树上的34个散斑壳(Lophodermiumspp.)菌株进行RAPD-PCR扩增反应,RAPD分析结果与表型性状表现出良好的一致性,从而表明RAPD技术可以较好的应用于散斑壳属种内及近似种间亲缘关系的分析。通过RAPD分析结果与表型性状的比较和分析,明确了部分表型性状在散斑壳属近似种区分方面的重要性。     

幽门螺杆菌随机扩增多态性DNA指纹图谱分析

应用随机扩增多态性DNA指纹法(RandomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)对来自29例消化性溃疡和19例单纯性胃炎病人的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)菌株基因组DNA进行PCR反应,建立Hp的DNA指纹图谱,运用统计分析软件(Statisticanalysissoftware,SAS)对HpDNA指纹图的相似性以及与疾病的相关性进行分析。结果显示,这些菌株按HpDNA指纹图可分为两大类,两种来源的菌株在两大类中的比例有明显差异(P<0.05)。提示可能存在与疾病相关的特异基因型。     

应用RAPD技术鉴定地霉的实验研究

目的探讨RAPD技术在快速鉴定地霉中应用。方法用E.Z.N.A.yeastDNAkit提取地霉菌基因组DNA,采用随机引物AP3(5'-TCGTAGCCAA-3')、ATG(5'-ATGGATCGGC-3')、RP2(5'-AAGGATCAGA-3')、OPA-10(5'-GTGATCGCAG-3')对临床上致病性白地霉、林生地霉皮损株和血液株的基因组DNA进行扩增,对各病原菌的DNA指纹的特征进行分析。结果成功提取了地霉的基因组DNA,其纯度和浓度均能满足PCR反应的要求。利用4种引物对基因组DNA进行扩增,不同种真菌的DNA显示不同的DNA带型,分离自不同感染部位的同种不同株真菌的DNA显示的主要DNA带型基本一致。结论采用E.Z.N.A.yeastDNAkit提取的地霉基因组DNA可以用于PCR反应。RAPD法鉴定地霉菌简单、快速、特异,可用于临床诊断。     

被子植物生散斑壳属若干种内和种间亲缘关系RAPD分析

采用9个重复性好的随机引物对被子植物上的28个散斑壳属(Lophoderm iumChevall.)菌株进行RAPD-PCR扩增,通过RAPD分析结果结合表型性状的比较和分析,确定了子囊果埋生位置,子座、子囊、子囊孢子、侧丝等形态学特征以及寄主种类差异在该类菌物种水平分类上的重要性,另外产地不同等对种内遗传多样性产生一定影响。进一步明确了被子植物生散斑壳属一些种内和种间的亲缘关系。     

RAPD技术在微生物生物多样鉴定中的应用

RAPD（随机放大多态性DNA）是1种新的DNA分子标记技术。与RFLp、AFLP及ARDRA相比,RAPD具有可在一次试验中同时观察到大量的DNA多态性片段,方法更具简单、敏感、花费少等优点。阐述了RAPD的原理方法,及目前在微生物分类鉴定研究中的应用,并分析了RAPD技术在共生固氮放线菌Frankia分类鉴定及系统发育研究中的应用前景。     

RAPD标记在紫菜遗传多样性检测和种质鉴定中的应用

用ＲＡＰＤ技术对４类紫菜（Ｐｏｒｐｈｙｒａ ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ,Ｐ．ｈａｉｔａｎｅｎｓｉｓ,Ｐ．ｋａｔａｄｎｉ ｖａｒ．ｈｅｍｉｐｈｙｌｌａ和Ｐ．ｏｌｉｇｏｓｐｅｒｍａｔａｎｇｉａ）的１５个无性系丝状体进行了遗传多样履分析,从５０个ＯＰＥＲＯＮ引物中经过初筛,其中６个引物可以扩增出稳定的可重复的图谱。这６个引物共扩增出了６０条带,多态性比例达９７．１％。根据ＲＡＰＤ结果将这１５个无性了紫菜的ＤＮＡ     

The Application of RAPD Markers in Diversity Detection and Variety Identification of Porphyra

RAPD (random amplified polymorphic DNA) markers were generated from filaments of 15 Porphyra lines representing four important groups, P. yezoensis, P. haitanensis, P. katadai var. hemiphylla and P. oligospermatangia. Among the total 69 fragments generated by 6 selected primers (among 50 primers), 67 appeared to be polymorphic (97.1%). Cluster analysis based on the RAPD results was performed. The 15 Porphyra lines were divided into 3 groups. This result was consistent with that from taxonomy analysis. A DNA fingerprinting based on 8 bands amplified with OPN-02 and OPJ-18 was constructed and might be used in Porphyra variety identification. Five specific RAPD fragments of 5 Porphyra lines were isolated and cloned into pGEM-T easy vector. These five RAPD fragments may be useful in germplasm identification and property protection of Porphyra.