3M Petrifilm快速菌落总数测试片法与食品中菌落总数检测国标方法（GB 4789.2‒2010）的比较

目的 比较3MTM PetrifilmTM快速菌落总数测试片（RAC）法与食品中菌落总数检测国标方法（GB 4789.2‒2010）检测熟肉样品、人工污染熟肉样品中的菌落总数结果的一致性。方法 分别用两种方法对129份熟肉样品和166份人工污染熟肉样品进行菌落总数项目的检测,并对3MTM PetrifilmTM快速菌落测试片法与国标方法的实验结果进行配对资料t检验、线性回归分析以及对数值差值绝对值（|dlog|）汇总分析。结果 第一部分：两种方法检测熟肉样品、人工污染熟肉样品的菌落总数检测结果t=1.5704、P=0.1188,差异无统计学意义;相关系数R2值分别为0.897、0.964;|dlog|≤0.500所占百分比分别为97.7％、100.0％。第二部分：两种方法检测295份样品,t=1.1336,P=0.2586;相关系数R2=0.992;|dlog|≤0.500的结果百分率为99.0％。结论 在检测熟肉样品、人工污染熟肉样品时,3MTM PetrifilmTM快速菌落总数测试片法与国标方法检测结果的一致性较好。     

TEMPO/TVC法与国标方法测定食品中菌落总数的比较研究

【目的】确证TEMPO/TVC计数食品中菌落总数的检测性能。【方法】使用TEMPO/TVC法和国标方法GB4789.2对熟肉制品、方便食品、速冻食品、膨化食品、糖果、糕点、调味品7类食品进行菌落总数测定。【结果】TEMPO/TVC法和国标方法检测食品中菌落总数的检测结果一致性较好(符合率95.4%);且两种方法检测7类食品样品的检测结果P值均大于0.05,无显著性差异。【结论】TEMPO/TVC法具有操作简便、快速、高效和人为误差小的特点,在日常检测中值得推广应用。     

细菌测试片的冷水可凝凝固剂初步研究和应用

微生物测试片具有携带方便、不用配制培养基的优点, 为一种新型的检测工具。测试片的技术关键是冷水可凝胶, 本文通过研究新的冷水可凝凝固剂(HKG)的保水性能、pH、强度、微生物利用及降解和抑菌效果, 再组装成细菌菌落总数测试片, 进行特异性和食品样品效果检验, 并与倾注平板法比对, 评价其作为微生物测试片凝固剂的可行性。结果显示HKG对16种微生物均无抑菌作用, pH为中性, 强度为340.31 g/cm2 ? 48.71 g/cm2; 具有良好的保水性能; HKG在短时期(5 d)内不支持微生物生长, 不被分解利用, 在测试片和倾注培养法中5种测试菌株均可达相同的灵敏度(P = 0.438 > 0.05), 各菌株菌落数(P = 0.442 > 0.05)和食品样品菌落数(P = 0.718 > 0.05)比较在统计学上无显著差异。结果表明, HKG能较好地应用于细菌测试片计数, 并能提高检测效率。     

猫肾F_(81)传代细胞中犬细小病毒原位PCR检测方法

目的　建立在猫肾F81 细胞中犬细小病毒原位PCR的检测方法。方法　在猫肾F81 细胞上感染犬细小病毒 ,设计特异性引物 ,用直接原位PCR法在染毒 12h ,2 4h ,48h细胞片上检测出犬细小病毒 ,并与常规免疫组化的方法进行了比较。结果　在染毒 48h的细胞片上 ,用阳性记分法将两种检测方法得到的阳性细胞进行统计比较 ,差异极显著 (P <0 .0 0 1) ,用原位PCR法所得出的阳性率高。结论　原位PCR法检测犬细小病毒具有敏感性高和组织定位的优点     

中国成年人不同水产品消费水平下食物及营养素摄入状况

目的：探讨我国成年居民在不同水产品消费水平下各类食物及营养素的摄入状况。方法：利用2015年中国居民营养状况变迁的队列研究数据进行分析。将参加本次调查并有完整调查数据的18~64岁成年居民作为研究对象。采用连续3天24小时膳食回顾法收集所有调查对象的食物消费信息,采用称重法收集调查对象的调味品消费量。分析研究对象膳食水产品消费量现状并比较不同水产品消费水平下居民各类食物消费及营养素摄入状况。结果：2015年我国18~64岁成年居民水产品类食物消费量为28.6g/d、水产品类食物人群消费率为43.1%。不同水产品消费水平下,研究对象各类食物消费量和营养素摄入量均有显著性差异（P＜0.05）。结论：水产品类食物的消费水平将对我国成年居民各类食物及营养素的摄入带来重要的影响。     

大肠埃希菌对化疗药物顺铂体外敏感性的探讨

目的通过体外细菌敏感性试验研究细胞周期非特异性化疗药物顺铂（Cisplatin,DDP）对条件性致病菌———大肠埃希菌的抑菌活性。方法分别用滤纸片法和96孔板法对顺铂的抑菌活性进行研究。其中,滤纸片法是以庆大霉素作为阳性对照,以生理盐水作为阴性对照,用直尺测不同浓度顺铂抑菌圈直径大小;96孔板法是用酶标仪测定吸光值,然后计算抑菌率。根据不同浓度大肠埃希菌的抑菌率曲线,利用origin 75拟合标准曲线做图并计算出能使50%大肠埃希菌死亡所需的顺铂使用剂量（IC50）。结果滤纸片法检测结果发现,5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 mg/mL的顺铂对大肠埃希菌的抑菌圈大小分别为14、121、19、.678、.33和0 mm,而阳性对照6 670 IU/mL庆大霉素的抑菌圈大小为18 mm。96孔板法检测结果发现,顺铂对大肠埃希菌的抑制率均随用药剂量的增加而增大,呈＂S＂型曲线。用药后6、24、48和72 h时顺铂的IC50值分别为30.29、42.56、80.24和98.69μg/mL。结论顺铂对大肠埃希菌有抑制生长的作用;其抑菌作用随顺铂用药作用时间的延长而减弱。     

水苏碱调节CXCL12/CXCR4轴对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

该研究主要探讨水苏碱(STA)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响以及对CXCL12/CXCR4轴的调节机制。将EC细胞分为对照组(Control组)、CXCL12/CXCR4抑制剂组(AMD 3100组)、STA-L组(STA-L)、STA-H组(STA-H)、STA-H+CXCL12组。采用CCK-8检测细胞增殖情况;克隆形成实验检测细胞克隆能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况; Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力; Western blot检测细胞中上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、CXCL12、CXCR4蛋白的表达情况;建立小鼠EC移植瘤模型并观察各组小鼠的肿瘤生长情况。结果发现与Control组相比, AMD 3100组和STA处理组细胞增殖活性、克隆数量、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达水平降低,细胞凋亡率和E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05);与STA-H组相比, STA-H+CXCL12组细胞的增殖活性、克隆数量、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、C...     

电穿孔法转化齐整小核菌

【目的】建立齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)的电穿孔法转化方案,以实现经济、快速地遗传转化。【方法】将齐整小核菌gpd基因启动子控制的basta抗性基因bar与红色荧光蛋白基因DsRed Max组成的融合蛋白表达盒,通过电击转入野生型齐整小核菌细胞中,筛选转化子并进行PCR与荧光观察验证。在此基础上,测试了不同电压、脉冲时间、外源DNA片段与受体细胞比例等条件下的转化效率,以得到优化的电转化参数。最后,采用优化的条件,尝试转化多种抗性基因与荧光蛋白融合表达盒以测试其可用性。【结果】成功得到了bar、sdhR与aphI基因的转化子。【结论】成功建立了优化的齐整小核菌电穿孔转化法。优化的参数条件为电压2kV/cm、脉冲时间1 ms、DNA/匀浆细胞比例3μg/300 mg,电击1次。     

芝加哥天蓝法在甲屑真菌检测中效果的评估

目的 探讨芝加哥天蓝染色法对甲真菌病患者标本检测效果.方法 收集皮肤科门诊确诊的甲真菌感染患者标本160例,同时用KOH湿片法、荧光染色法和芝加哥天蓝染色法对真菌进行镜下形态学观察,并比较真菌检出率.结果 芝加哥天蓝染色法和荧光染色法对真菌的形态结构清晰易辨.芝加哥天蓝染色法、荧光染色法和KOH湿片法的检出率分别为60...     

匹拉米洞法、邻联甲苯胺法和联苯胺法检测林麝便隐血的比较

圈养林麝(Moschusberezovskii)长期受困于消化道类疾病,尤其是肠道炎症性疾病患病率和死亡率一直居高不下。粪便检测是评估野生动物消化系统是否存在出血情况的有效方法之一,并且在圈养林麝肠道健康状况评估及肠道炎症性疾病临床诊断等方面提供了一定的诊断依据。粪便隐血在消化道出血诊断中有广泛的临床诊断价值。基于此,本研究用新鲜的林麝血液进行稀释,来探究匹拉米洞法、邻联甲苯胺法和联苯胺法三种方法对林麝血液浓度的灵敏度范围。检测结果显示,匹拉米洞法的最低敏感性检测浓度为0.05 mg/L,敏感性范围远大于邻联甲苯胺法(0.40 mg/L)和联苯胺法(100.00 mg/L)。分别利用三种检测方法对林麝粪便潜血进行检测,比较检测结果的阳性率,结果显示,匹拉米洞法的检测效果优于其他两种方法,阳性率分别为匹拉米洞法检测法10.13%、邻联甲苯胺法检测法2.56%和联苯胺法检测法0,差异有诊断学意义(P <0.05)。而且在操作上,匹拉米洞法更加简便快捷。故在诊断林麝消化道出血时,采用匹拉米洞法进行林麝便隐血的检测更加准确便捷。     

金黄色葡萄球菌的检测方法优化及其在舟山市水产品加工厂中的污染状况调查

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起食物中毒的重要致病菌。为简化金黄色葡萄球菌复杂的检测方法,并了解舟山市水产品中该致病菌的污染状况,通过比较已公开的3套针对耐热核酸酶编码基因的PCR鉴定体系,根据特异性和灵敏性实验筛选了1套最优的针对金黄色葡萄球菌的PCR鉴定体系。基于这一体系和国家规定的标准方法,对舟山市水产品加工厂各个环节采集的120份样品中金黄色葡萄球菌的污染状况进行了调查。结果显示,120份样品中金黄色葡萄球菌的检出率为8.3%,PCR检测方法与国标法检出阳性率比较无显著差异,而且集中在原料和环境这两个环节检出金黄色葡萄球菌,在半成品和成品中却未检测到。由此,可以认为舟山市水产品加工厂的原料和环境中存在着一定的安全隐患,而成品相对较为安全。     

Antimicrobial susceptibility and invasive ability of <Emphasis Type="Italic">Staphylococcus aureus</Emphasis> isolates from mastitis from dairy backyard systems

Fifteen (15) backyard farms were investigated to determine the antimicrobial susceptibility and invasion ability of S. aureus isolates from cows with subclinical mastitis in México. A total of 106 cows were sampled and 31 S. aureus isolates were recovered. S. aureus isolates were resistant to penicillin class antibiotics and susceptible to gentamicin and cetyltrimethylammonium bromide. STA9 and STA13 isolates were resistant to erythromycin (MIC > 25 microg/ml) and lincomycin (STA13, MIC > 25 microg/ml; STA9, MIC > 100 microg/ml). STA9 isolate harbors the erm(B) and msr(A) genes, whereas STA13 isolate harbors the erm(C) gene. STA9 and STA13 isolates contains the lnu(A) gene. Only 5 isolates (STA11, STA13, STA14, STA15 and STA21) were able to internalize in bovine mammary epithelial cells. These results indicate that S. aureus isolates from dairy backyard farms showed differences in the antimicrobial susceptibility patterns and invasion ability in bovine mammary epithelial cells. This kind of evaluations should be performed in different dairy regions, since resistance patterns and isolate diversity vary on a per-region basis.     

金黄色葡萄球菌蛋白质相互作用网络及功能

【目的】金黄色葡萄球菌是一种革兰氏阳性菌,是目前最难以对付的病菌之一。它能引起多种感染,特别是在医院环境中。近年来,抗药性金黄色葡萄球菌传染更加严重,已成为公共卫生威胁。由于以前对于金黄色葡萄球菌的实验性研究大都是基于单个基因或者蛋白进行的,为了更好的研究这个物种,有必要从整体上把握金黄色葡萄球菌的蛋白作用机理。【方法】采用系统发生谱、操纵子法、基因融合法、基因邻近法、同源映射法等五种计算方法预测金黄色葡萄球菌蛋白质相互作用网络。【结果】从蛋白组的角度构建了金黄色葡萄球菌蛋白相互作用网络,并对网络进行功能分析。【结论】网络的分析表明金黄色葡萄球菌的蛋白质相互作用网络也服从scale-free属性,发现了SA0939、SA0868、rplD等重要的蛋白。通过对金黄色葡萄球菌的重要的细胞壁合成和信号转导调控蛋白局部网络分析,发现了一些对这两个系统十分重要的蛋白分子,这些信息将为更好的了解金黄色葡萄球菌的致病机理和开发新的药物靶点提供指导。     

榆耳不同极性提取物的体外抑菌活性

采用圆滤纸片法,以金黄色葡萄球菌O41ermc、S19NMA1、ATCC25923和大肠杆菌ERcat、EΠ￡R、ATCC25923为受试菌种,对榆耳石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和水不同极性提取物进行抑菌活性研究。结果表明:榆耳不同极性提取物对不同的菌种均有不同程度的抑制作用。     

Enumeration of micro-organisms in processed soy products with an automated most probable number method compared with standard plate method

Aim: The automated TEMPO system (bioMerieux) is based on the most probable number (MPN) method for the enumeration of micro‐organisms in foods. In this study, we evaluated the performance of the TEMPO system as a diagnostic tool in comparison with the standard method in processed soy products. Methods and Results: A verification study was conducted using artificially contaminated soy product samples such as soy protein isolate, water‐soluble soy polysaccharides, soy milk and processed soy food. Five types of micro‐organisms were analysed using the automated MPN method (total aerobic bacteria, total coliforms, Enterobacteriaceae, yeast and mould and Staphylococcus aureus) vs the standard plate method. The results from each of the methods were highly correlated (r > 0·95). Naturally contaminated processed soy products on the market were also studied. There were no discrepancies observed between the respective methods. Conclusions: TEMPO methods were equivalent to the corresponding standard plate methods with very good rates of agreement. Significance and Impact of the Study: The automated MPN method is more practical and reliable for in‐house microbiological testing in processed soy products.     

显齿蛇葡萄提取物体外抑菌试验的研究

使用药敏纸片法、试管二倍稀释法测定了显齿蛇葡萄对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鸡沙门氏杆菌、粪肠球菌、阴沟肠杆菌等5种细菌的抑菌效果,结果表明:显齿蛇葡萄的根、茎、幼叶提取物对5种细菌均有抑菌作用,以幼叶提取物抑菌效果最强,说明显齿蛇葡萄具有广谱高效的抑菌作用,但不同器官的抑菌作用有较大的差别。     

RAPID DETECTION of STAPHYLOCOCCUS AUREUS IN FOOD BY FLOW CYTOMETRY

This report describes the detection of Staphylococcus aureus in buffer and in several kinds of food by flow cytometry. Fluorescein isothiocyanate conjugated anti-protein A antibodies were used in a 4-h procedure to label cells, 10⁵-10⁶ cells/mL are needed. the use of single parameter, green fluorescence, enabled specific differentiation of S. aureus from other bacteria including 11 Staphylococcus species. the flow cytometric method can detect S. aureus in food samples after 48-h enrichment in trypticase soy broth with 10% NaCl. As low as 2 S. aureus cells present in 10 mL enrichment broth could grow to a population density detectable by the flow cytometric method after enrichment. This method was faster and less laborious than the conventional BAM (Bacteriological Analytical Manual) or AOAC (Association of Official Analytical Chemists) methods, and could be automated for analysis of S. aureus in food.     

一种鉴别临床常见致病性葡萄球菌方法的建立与初步评价

目的建立一种鉴别临床常见致病性葡萄球菌的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCRRFLP）方法。方法采用经全自动微生物鉴定系统和分子生物学方法准确鉴定的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌各3株,提取细菌DNA,PCR扩增tuf基因,扩增产物Alu I、Hinf I双酶切后进行琼脂糖凝胶电泳,分析不同葡萄球菌酶切后带型的差异。收集临床分离葡萄球菌142株,采用建立的PCRRFLP对其进行分类鉴别,随机选择分类鉴别的葡萄球菌各20株,PCR扩增16S r DNA,扩增产物测序,将结果与Gen Bank数据库进行比对,初步评价该方法的准确性。结果金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,溶血葡萄球菌均能扩增出长668 bp DNA片段。扩增产物经Alu I、Hinf I双酶切后电泳条带不同,金黄色葡萄球菌出现三条带（108 bp/192 bp/217 bp）,表皮葡萄球菌出现两条带（192 bp/304 bp）,溶血葡萄球菌出现两条带（192 bp/217 bp）。PCR-RFLP结果显示,142株葡萄球菌中金黄色葡葡球菌、表皮葡葡球菌和溶血葡葡球菌分别为67、29和46株。随机挑选的20株不同种葡萄球菌16S r DNA测序结果与Gen Bank数据库对应序列的相似性均〉99%,说明建立的PCR-RFLP方法能准确区分三种常见葡萄球菌。结论 PCRRFLP能准确鉴别临床常见的致病性葡萄球菌,为葡萄球菌病的分子诊断奠定了基础。     

一种妥布拉霉素产生菌初筛方法的建立

从金黄色葡萄球菌１００１出发,选育到一株对妥布拉霉素和卡那霉素耐药而对阿泊拉霉素敏感的突变株１００１－１１。以金黄色葡萄球菌１００１－１１和对上述三种抗生素均敏感的枯草杆菌６３５０１为测定菌,建立了一种能同时检测妥布拉霉素产生菌菌落琼脂柱总效价和组分相对含量的初筛方法。