可溶性核糖核酸的研究——Ⅱ.脱氨作用对可溶性核糖核酸性质的影响

(1)脫氨SRNA的ε(p)及超离心沉降行为皆与SRNA相似。脫氨SRNA的紫外吸收高峰及低峰皆稍向短波长方向移动。Mg~(++)使SRNA产生紫外低吸收效应,尿素使SRNA的光吸收值增高;在同样条件下,Mg~(++)及尿素对脫氨SRNA紫外吸收值影响极小。脫氨SRNA易为Ba~(++)等金属离子所沉淀,在pH5—7.2范圍內,0.083MBaCl_2即可使脫氨SRNA沉淀約90%,而SRNA的沉淀尚不足10%。脫氨SRNA經碱或牛胰RNase水解后,則不再能为BaCl_2所沉淀。温度对BaCl_2沉淀脫氨SRNA与SRNA有显然不同的影响。(2)用大腸杆菌RNase和牛胰RNase两种酶水解脫氨SRNA与SRNA时,Mg~(++)可以提高这两种酶对前者的降解速度,而对后者起稳定作用。(3)大腸杆菌RNase降解脫氨SRNA可以得到黄嘌呤、次黄嘌呤及尿嘧啶三种单核苷酸,降解SRNA可以得到腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤及尿嘧啶四种单核苷酸。     

大腸杆菌多核苷酸磷酸化酶的研究 Ⅰ.酶的提純与性质

大腸杆菌的抽提液中,合有焦磷酸酯酶,P~(32)中含有放射性焦磷酸,二者的联合作用,对于利用P~(32)-ADP末端磷交换方法測定多核苷酸磷酸化酶有干扰作用,P~(32)必須事先用酸水解。粗酶液中含有磷酸酯酶,能分解ADP、AMP,含量高时,对测定多核苷酸磷酸化酶有严重的干扰作用。經过一系列提純步驟,純酶制品的比活性与抽提液相比可提高約400倍,其中未檢查出核酸酶,非特异性磷酸单酯酶,5′-核苷酸酶,焦磷酸酯酶的含量很少。提純的酶制品相当稳定,在2—4℃中可保存三周,在37℃、47℃中加热20分钟,仍能保存87.2%与82.7%的活性,TMV-RNA,酵母HRNA与商品酵母HRNA均能稳定酶活性。     

可溶性核糖核酸的研究 Ⅰ.金属离子对可溶性核糖核酸酶解稳定性的作用

(1)各种金属离子对大腸杆菌RNase活力的影响不同,Mg~++不仅沒有抑制作用而且是大腸杆菌RNase表現活力的必需因素。Ca~(++)与Ag~(++)相似,Co~(++)对酶活力影响較小,而Ni~(++)則有抑制作用。(2)在Mg~(++)、Ca~(++)或Na~+等存在下,大腸杆菌RNase和牛胰RNase降解SRNA的速度远比HRNA为慢;利用Mg~(++)对这两种RNase活力的影响不同,在Mg~(++)存在与否下,比較SRNA与HRNA降解速度的結果指出,SRNA的二級結构是其酶解緩慢的主要原因,而Mg~(++)等金属离子对稳定其二級結构起着重要的作用。这种作用在60℃仍然存在。(3)SRNA影响RNase对HRNA的降解。这种現象可能用酸溶性核苷酸与RNA一起沉淀的作用解释,但也不能完全排除两个結构相似底物(SRNA与HRNA)同时存在相互竞爭的可能性。(4)对SRNA不能为其他核酸降解酶完全降解或降解速度緩慢的原因及其生理意义进行了討論。     

可溶性核糖核酸的研究 Ⅲ.酵母可溶性核糖核酸中抗碱二核苷酸的分离与鉴定

利用Tomlinson和Tener的DEAE-纤维素柱层析方法,我们从酵母SRNA的碱水解产物分得抗碱二核苷酸的层析峰。将抗碱二核苷酸混合物用大肠杆菌碱性磷酸单酯酶处理后,纸层析分离可得到四个部分,分别称A_1,A_2,A_3及A_4。经鉴定A_1为2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷(G'pG),A_2主要为2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷(C'pG,纯度约为87%),A_3则至少合2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷(C'pA)和2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷(G'pA),A_4较为复杂,未最后鉴定。因此酵母SRNA中至少含有下列四种抗碱二核苷酸:2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷酸(G'pGp),2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷酸(C'pGp),2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷酸(C'pAp)及2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷酸(G'pAp)。除此以外,还得到核苷二磷酸的层析峰,其中主要为鸟便嘌呤核苷-2′(3′),5′-二磷酸,只有少量的腺嘌呤核苷-2′(3′),5′-二磷酸。     

栝楼核糖核酸酶的性质研究

关于栝楼核糖核酸酶的性质已经研究.它对核糖核酸和多聚尿嘧喧核苷酸所显示的酶活性,有很大的相似性:(1)栝楼核糖核酸酶的最适度应pH在5左右;(2)稳定的pH范围在5-12之间;(3)最佳反应温度为55℃左右;(4) 热稳定性:在15分钟内,60℃以下酶活性基本稳定,在65℃左右时大约有50%的活性丧失;(5)金属离子中,除CU~(2+)和Ag~+有明显的抑制作用外、一般作用不明显.另外,酸对其它合成的多聚核苷酸的水解作用,显示有碱基特异性;对双链RNA(CPV RNA)也显有活性.实验中未发现该酶有磷酸单酯酶的活性及降解DNA的活性.因此,该酶可能是一种具有碱基特异性的核糖核酸酶.     

大肠杆菌可溶性核糖核酸的研究 Ⅲ.可溶性核糖核酸5’-磷酸单酯末端核苷酸的排列

(1)比较了E.coli DNP-S-RNA和S-RNA的紫外光谱,并研究了DNP-S-RNA的RNase I的降解条件,结果表明两者无显著差别。(2)对DNP-S-RNA的RNase I降解产物的双向电泳层析图谱进行了分析,并与S-RNA图谱进行了比较,两者图谱中光吸收点的分布一致,相应点经洗脱后,由光谱分析与核碱组成测定证明均含有相同的核苷酸组成。(3)在DNP-S-RNA和S-RNA于同一条件下得到的图谱中,前者的某些光吸收点中含有不同量的DNP-。根据DNP-可以标记S-RNA末端5′-磷酸单酯,分析了DNP-结合物,说明在E.coli S-RNA分子中,B末端核苷酸除pGp…以外,尚有pAp…,pCp…以及痕量的pUp…。和末端相邻的核苷酸排列形式,随特异S-RNA而有不同,有pGpUp…,pGpCp…,p(GpGpAp)Up…,p(GpAp)Up…+pGpGpUp…,p(GpAp)Cp…,pApUp…和pApCp…。其他四核苷酸以上多核苷酸未分析。由于电泳和层析后原点部分标记了DNP-,估计末端核苷酸排列有五、六核苷酸以上的多嘌呤核苷酸的排列形式,其中以G为主。     

大肠杆菌可溶性核糖核酸结构的研究 Ⅱ.可溶性核糖核酸的RNase Ⅰ降解产物的双向电泳层析图谱

(一)应用双向电泳层析图谱法分析了大肠杆菌S-RNA的RNase I降解产物。结果表明成堆排列的嘧啶核苷酸占核酸重量的17.1%;二核苷酸占12.7%。成堆排列的嘧啶约占嘧啶总量的45—60%左右,证明在S-RNA分子中核苷酸的分布是不均一的。(二)在76个核苷酸链中成堆排列的嘧啶核苷酸残基,—PypCpNp—,—PypUpNp—分别是13.7和5.5;在低聚核苷酸中,—GpCp—,—ApCp—,—GpUp—和—ApUp—分别是2.5,2.O,1.4和1.1。Pyp(?)Up占1.1。(三)核苷酸在S-RNA链中的排列形式不符合按无规排列的计算结果,说明核苷酸的排列具有一定程度的规律性。     

大肠杆菌可溶性核糖核酸结构的研究 Ⅰ.可溶性核糖核酸的结构分析和一种测定核苷酸分布的方法

(一)利用不同工具酶和化学因素对于核酸的特异降解作用,提出一种简便的系统分析S-RNA RNase I降解物的方法。方法共分四个步骤,连续在纸上进行,可以测定末端以及—PypCpNp—,—PypUpNp—,—PypApNp—,—PypGpNp—,—PupApNp—,—PupGpNp—,—PupCpNp—,—PupUpNp—在核酸链中的分布。(二)对大肠杆菌S-RNA的内部结构进行了分析,得到以下结论:(1)在S-RNA链中,嘧啶或嘌呤核苷酸有“成堆”的排列。属于这种排列的核苷酸,嘧啶占总嘧啶量的56.5%;嘌呤占总嘌呤量的56.4%。(2)S-RNA经RNase I降解后多核苷酸片段(Pup)_nPyp中,嘧啶端C>U,C/U比值为1.5;嘌呤端G>A,G/A比值为1.2。(三)大肠杆菌S-RNA根据本方法分析结果计算,由76±1核苷酸残基组成(未包括(?)Up),分子量约为25000±1000,与应用核碱组成分析计算的结果基本符合。(四)根据—PupCpNp—与—PypGpNp—以及—PupUpNp—与—PypApNp—的测定值基本相同一点,讨论了S-RNA双螺旋结构,核碱成G—C、A—U对排列的可能性。并估计在S-RNA链中,少数不成对排列的碱基,可能分布于嘧啶或嘌呤“成堆”的链节中。     

2-硫尿嘧啶对大腸杆菌酶合成的影响——具有性质差异的碱性磷酸酯酶的产生

大腸杆菌PB-8,在含无机磷和2-硫尿嘧啶的培养液中合成的碱性磷酸酯酶,对热、酸的稳定程度以及酶的比活力等,均显著地低于正常条件下合成的酶;二者在免疫滴定沉淀反应方面也显著地不同。尿嘧啶能够部分消除2-硫尿嘧啶的这些影响。核糖核酸結构受2-硫尿嘧啶参入的影响,可能是上述这些性质差別的直接原因。     

酶法改性提取黑豆皮可溶性膳食纤维及性质的研究

以黑豆皮为实验原料,采用酶法对其进行改性,以提高可溶性膳食纤维(Soluble dietary fiber,SDF)的提取率,并利用响应面法优化酶法改性黑豆皮中可溶性膳食纤维的提取工艺条件。结果表明:提取的最优工艺为:酶(纤维素酶∶半纤维素酶=1∶2)的添加量为5%,p H值为4.6,温度为50℃,时间为3 h。SDF的提取率为14.90%。经验证实验得其接近理论值。研究发现改性后黑豆皮SDF的持水力和膨胀力分别提高3.71%,10.97%。通过扫描电镜图表明,改性后黑豆皮SDF较原始SDF的表面光滑,蜂窝状小孔较少,结构较分散,颗粒大小形状不一。本研究为黑豆皮高膳食纤维食品的开发及黑豆皮综合利用提供理论依据。     

大腸杆菌多核苷酸磷酸化酶的研究 Ⅱ.核酸的結构与磷酸解作用

(1) 利用磷酸单酯酶切除商品酵母RNA末端磷酸,可以提高大腸杆菌多核苷酸磷酸化酶对其磷酸解速度达5—7倍之多,說明大分子核酸和寡核苷酸一样,3′-磷酸末端是妨碍磷酸解的重要因素。(2) 商品酵母RNA,經过脫氨后,磷酸解速度有所提高;說明RNA二級結构的破坏,有利于磷酸解反应的进行。(3) 磷酸解脫氨RNA时,要求較高濃度的Mg~(++)其最适濃度由5×10~(-3)M提高到8×10~(-2)M。(4) 3′-单核甘酸对RNA的磷酸解无影响。     

核糖核酸結构的研究 Ⅲ.利用核糖核酸酶T_1研究絲腺与酵母可溶性核糖核酸的結构

(1) 从高峰淀粉酶制剂(Taka-Diastase)制得RNase T_1,提纯了2800倍,可用于结构研究,从上海四万酿造厂的米麯也分得类似纯度、类似特异性的酶。(2) 用RNase T_1单独或与RNaseⅠ联合作用的结果,均发现啤酒酵母与蓖麻蚕絲腺腺体sRNA的结构有显著差异。例如用RNase T_1单独作用时,由蓖麻蚕蒜腺sRNA所得Gp大于啤酒酵母sRNA,而UpUpGp则小于后者。用两个酶联合作用时,由蓖麻蚕絲腺sRNA所得Cp、(Gp+Gp!)大于啤酒酵母sRNA,且前者较后者多出许多含稀有成份的紫外光吸收点,其电泳层析行为及表现熒光性质较为特殊。(3) 蓖麻蚕蒜腺sRNA合有-Gp(Ap)_4Cp-及-Gp(Ap)_3Cp-等结构。(4) RNase Ⅰ与RNase T_1联合水解sRNA所得Gp!/Gp值大于RNase T_1单独作用时所得Gp!/Gp值。     

鲤鱼鱼皮胶原蛋白的提取及其性质研究

首先对鲤鱼鱼皮的成分进行了研究,通过凯氏定氮、索式抽提、高温灰化、直接干燥法测定了鱼皮的蛋白质、脂肪、灰分、水分含量。通过粘度测定法得到鱼皮胶原蛋白的变性温度为28℃左右;紫外可见光谱扫描的结果证明鱼皮胶原蛋白在228 nm有一最大吸收峰;SDS-PAGE电泳初步确定鱼皮胶原蛋白是I型胶原蛋白;酶解实验进一步证实了鱼皮同鱼鳞、鱼骨的胶原蛋白在结构上具有很大的相似性。     

小檗色素的提取及其理化性质研究

研究了不同溶剂对小檗色素的提取效果,以及不同pH、不同金属离子、氧化剂和还原剂对该色素稳定性的影响。结果表明,小檗色素在40％的乙醇溶液及水中的溶解效果最好;在酸性条件下色素较稳定;铁离子对其有增色作用;氧化剂、还原剂对色素稳定性均有影响,其中以还原剂影响较大。通过对小檗色素理化性质的研究,表明该色素在化妆品、食品、染料、饮料等工业领域有很大的应用前景。     

从木霉属菌分离核糖核酸酶及其性质

核糖核酸酶广泛分布于自然界中,但其中从微生物细胞获得者为最重要。它们在很多工业过程中有着潜在的应用价值,特别是可用于大规模生产5′-核糖核甘酸以及3′-核糖核甘酸,作为食品调味剂。     

三叶海棠色素提取工艺及其性质研究

研究了三叶以素的提取工艺及其化学性质，提出了ＮａＯＨ－热水浸提法，测得其在酒精及ＮａＯＨ溶液中的最大上波峰为３８２ｎｍ，查明该色素具有较强的耐酸性，耐生、耐还原性、耐热性、抗氧化性，发曹春在权性条件下耐光性能极佳。     

猪腎脏羧肽酶的提取及其性质的研究

(一)从猪腎脏組織細胞內抽提出一新羧肽酶制剂,能水解牛胰羧肽酶A,B的底物Cbz-甘-苯丙及B-甘-精及其他各种带有Cbz的合成肽。此酶具有較广的专一性,能作用于一般蛋白水解酶和肽酶所不能水解的脯-賴(ε-Tos)或脯-賴间的肽鍵。(二)酶的最适pH在7.5—8.0之間,不被DFP和PCMB所抑制,但能被較高浓度的碘乙酰胺(0.01M)所抑制。对大多数底物酶的反应属于零級反应。(三)酶对10~(-3)MEDTA透析后,活力全部丧失。如加入Co~( ),Mn~( )或Ca~( )等离子能部分或全部恢复酶的活力,但加入Co~( )却能使酶活力提高二倍以上。(四)初步将猪腎脏羧肽酶应用于C端氨基酸組成的測定,并取得較滿意的結果。     

北京棒状杆菌RNA聚合酶的提纯及其性质的研究

本文报道了北京棒状杆菌RNA聚合酶的分离和提纯方法。经DEAE纤维素层析提纯后的酶的比活比硫酸铵分段后提高53倍;低浓度利福平和放线菌素D对酶显示强烈的抑制作用;酶对外加DNA模板呈现明显的依赖性;酶的反应最适温度为37℃,最适pH为7.9,反应30分钟时酶活力达到最高值,当0．I 5M氯化钾存在时表现最高酶活性。此外,本文还报道了模板、二价金属离子浓度和抑制剂浓度对酶活力的影响。