镉诱导小鼠睾丸细胞凋亡与Caspase-3、Bcl-2和Bax mRNA的表达

一个月大雄性小鼠24只,随机分为6组,用30 μmol/kg CdCl2作用小鼠睾丸不同的时间(3 h、6 h、12 h、18 h、24 h)后,利用DNA电泳、免疫组化和半定量RT-PCR技术,分析生殖细胞凋亡过程中三种关键物质Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白和mRNA的表达量变化.结果显示:1) DNA各组 (除对照组外)均出现不同程度断裂.2)Caspase-3蛋白表达量一直上升,与对照组相比差异极显著;Bax蛋白在12 h前一直上升,与对照组相比差异显著,12 h后又开始下降,且与对照组相比无显著差异;Bcl-2蛋白在下降,与对照组相比差异显著.3)RT-PCR结果显示Caspase-3基因表达量减少;Bax基因表达量逐渐上升;Bcl-2基因表达量波动很大.综上所述,Caspase-3、Bcl-2和Bax三个基因可能参与了镉应激状态下小鼠睾丸组织细胞的凋亡过程.     

原花青素诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制的研究

为探讨原花青素对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响及其可能的作用机制,以体外培养的SGC-7901细胞为研究对象,经一定浓度的原花青素作用后,用MTT法及流式细胞仪检测细胞增殖抑制及凋亡情况,Real-time PCR技术及免疫组化法检测Bcl-2、Bax mRNA和相关蛋白表达的含量。结果表明,不同浓度的原花青素不仅能有效抑制SGC-7901细胞增殖,还可诱导细胞凋亡,且抑制增殖及促进凋亡作用呈浓度和时间依耐性;Real-time PCR及免疫组化试验中显示,随着原花青素浓度的增加,Bcl-2mRNA及相应蛋白表达逐渐减少,Bax mRNA和相关蛋白表达逐渐增加。因此,原花青素对人胃癌SGC-7901细胞具有明显的抑制作用,其作用机制可能与上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白水平有关。     

新型鬼臼毒素衍生物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制研究

目的探讨新型鬼臼毒素衍生物10Ⅲg诱导人肺腺癌细胞A549细胞凋亡及其调控机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTr）比色法、流式细胞术测定细胞周期细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳和微管蛋白组化染色,Western印迹法检测凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达。结果新型鬼臼毒素衍生物10m。对A549细胞增殖具有明显的剂量和时间依赖性抑制作用,细胞周期分析显示S期细胞数明显增多,出现G2／M期阻滞;10Ⅲg作用48h后DNA电泳可见明显的梯状条带;10Ⅲg能破坏A549细胞的细胞骨架,与依托泊苷相比有明显促进微管解聚现象;10Ⅲg浓度为10^-6mol/L时能显著促进Bax、Caspase-3蛋白的表达。结论新型鬼臼毒素衍生物10Ⅲg通过诱导A549细胞发生G2／M期阻滞而抑制其增殖,其机制可能与抑制细胞微管解聚及诱导细胞凋亡有关。     

大鼠双下肢骨折合并失血对心肌细胞损伤的作用及其机制

目的：探讨双下肢骨折创伤失血反应可否诱导心肌细胞发生凋亡反应,为深入研究骨折创伤后心肌损伤机制奠定基础。方法：SD大鼠20只,随机分为对照组及创伤组（n=10）,制备双下肢骨折创伤失血模型;原代心肌细胞培养复制创伤模型。ELISA检测血清IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α水平;心肌组织HE染色、Tunel试验观察心肌受损、凋亡;Western blot及RT-PCR检测心肌组织凋亡调控基因Bcl-2/Bax表达变化。结果：创伤后血清炎性因子时间依赖性改变,IL-2（8 h）、IL-6、IL-10（4 h）、TNF-α（1 h）达到峰值,随后逐步回落;心肌HE染色发现心肌细胞肿大,排列紊乱,炎细胞浸润;Tunel试验证实大量核染成棕褐色的心肌细胞,凋亡指数增加（P<0.05）;Western blot及RT-PCR检测表明,无论在体及心肌细胞培养中,促凋亡基因Bax表达上调（P<0.05）,而抑凋亡基因Bcl-2表达下调（P<0.05）。结论：大鼠双下肢骨折创伤失血反应通过诱导心肌细胞凋亡进而造成心肌损伤。     

三七总皂甙对人急性髓系白血病细胞株U937 的抑制增殖及诱导凋亡作用

目的:观察三七总皂甙(panax notoginsenosides,PNS)对人急性髓系白血病细胞株U937凋亡的影响,并探讨PNS对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法:将处于对数生长期的U937细胞分为5组:正常对照组及PNS组(5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40mg/L),药物作用12 h、24 h、48 h后,CCK-8比色法检测PNS对肿瘤细胞的相对细胞活力的影响;流式细胞术检测PNS促进细胞凋亡的能力;RT-PCR和Western blot法分别检测不同浓度的PNS对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:CCK-8分析显示,PNS在低浓度(≤40 mg/L)能明显抑制肿瘤细胞的活力,40 mg/L处理组较正常对照组细胞活力在3个时间点分别下降47%、72%、85%;与对照组相比,处理组的凋亡率显著增加,10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L实验组凋亡率分别上升7%、10%、43%;PNS能明显增加细胞内Bax mRNA及蛋白的表达,抑制Bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结论:PNS具有抑制人急性髓系白血病细胞株U937的增殖抑制及凋亡诱导作用,并能影响Bax和Bcl-2蛋白的表达。文章探讨了PNS抑制肿瘤发展可能存在的作用机制,为将来进一步研发PNS作为白血病治疗药物奠定基础。     

bc-2核酶与Bax在诱导食管癌细胞凋亡中的协同作用

为了同时调节二种凋亡相关蛋白的表达诱导肿瘤细胞凋亡,探索肿瘤基因治疗的可能性,同时转入可诱导表达的特异性切割bcl-2的核酶基因及bax基因,间接免疫荧光标记法检测Bcl-2及Bax蛋白的表达量,用TUNEL、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.共转染后Bcl-2蛋白表达下降,同时Bax蛋白表达升高,导致30%左右细胞凋亡,并可使细胞对紫杉醇的敏感度增加近4倍,使紫杉醇有效作用时间缩短近一倍.同时调节二个凋亡相关基因可导致细胞凋亡,并能有效促进化疗药物诱导的凋亡.同时校正多个基因的异常表达,比仅仅改变单个基因可更有效地达到治疗肿瘤的目的.     

灰树花多糖对乳腺癌细胞MCF-7的凋亡作用

采用MTT法测定不同给药浓度的灰树花多糖(PGF) (1、10、20、50、100和200 μg/mL)在24、48和72 h对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制率,并采用Hoechst染色与流式细胞技术观察20、50和100 μg/mL PGF给药24 h后MCF-7的凋亡情况,同时采用Western blotting对20、50、100 μg/mL PGF给药24 h后MCF-7细胞中Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平进行检测。研究发现PGF给药24、48和72 h后对MCF-7的增殖均有显著的抑制作用。随着PGF给药浓度增加,MCF-7细胞核裂解增多,细胞凋亡数量增多。PGF 20、50和100 μg/mL给药对MCF-7细胞Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平可见显著性差异。     

桃叶珊瑚苷对光损伤HaCaT细胞Bax, Bcl-2, Caspase-3表达的影响

目的:探讨桃叶珊瑚苷对紫外线B诱导的HaCaT细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响,进一步阐明桃叶珊瑚苷抗光老化的作用机制。方法:将指数生长期HaCaT细胞随机分为正常对照组、模型对照组、10~(-7)、10~(-6)、10~(-5) mol·L~(-1) AU处理组,采用64 m J·cm~(-2)的UVB照射建立细胞光损伤模型,以终浓度10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)mol·L~(-1)AU处理光损伤细胞,试剂盒检测ROS含量、Caspase-3活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western-Blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达量。结果:UV照射的HaCaT细胞ROS含量、细胞凋亡率、Caspase-3活性、Bcl-2、Bax蛋白表达量均升高(P0.01),Bcl-2/Bax值降低(P0.01);不同浓度桃叶珊瑚苷处理后,ROS含量、Caspase-3活性、Bax蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量、Bcl-2/Bax值升高,10~(-6)、10~(-5) mol·L~(-1)桃叶珊瑚苷组与模型对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05,0.01)。结论:桃叶珊瑚苷通过清除ROS,下调Bax、Caspase-3表达,上调Bcl-2表达,抑制细胞凋亡,保护受损的HaCaT细胞,拮抗光老化。     

去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究

体外实验证明１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ,可诱导Ｋ５６２细胞发生凋亡。提取加药组细胞ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳呈现典型的ＤＮＡ“梯子”,同时加药组细胞出现核固缩、碎裂及胞浆浓缩等形态学变化。流式细胞测试结合形态学观察,特别是细胞超微结构观察,证明去甲斑蝥素诱导的Ｋ５６２细胞凋亡大部分发生在细胞周期的Ｍ期,也有部分发生在间期。免疫细胞化学结果表明,１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ,与对照组相比,加药组细胞中ｂｃｌ┐２蛋白表达增强,而Ｂａｘ蛋白表达减弱,两组间有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。     

甲基苯丙胺中毒大鼠相关脑区Caspase-3 和Bcl-2 表达的研究

目的:研究凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2在甲基苯丙胺神经毒性机制中所发挥的作用。方法:40只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(n=10)和实验组(又分为3个亚组,分别为注射1天后、4天后、7天后,n=10)。实验组给予20mg/kg的甲基苯丙胺腹腔注射,对照组给予相同剂量的生理盐水注射。用免疫组化检测中毒大鼠相关脑区Caspase-3和Bcl-2的表达,用图像分析技术对检测结果进行分析。结果:Caspase-3在中毒大鼠不同脑区表达逐渐增加并可见明显的阳性信号;Bcl-2在中毒大鼠不同脑区表达逐渐减弱。结论:凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2参与了甲基苯丙胺神经毒性机制。     

甲基苯丙胺中毒大鼠相关脑区Caspase-3和Bcl-2表达的研究

目的：研究凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2在甲基苯丙胺神经毒性机制中所发挥的作用。方法：40只健康雄性SD大鼠随机分为对照组（n=10）和实验组（又分为3个亚组,分别为注射1天后、4天后、7天后,n=10）。实验组给予20mg/kg的甲基苯丙胺腹腔注射,对照组给予相同剂量的生理盐水注射。用免疫组化检测中毒大鼠相关脑区Caspase-3和Bcl-2的表达,用图像分析技术对检测结果进行分析。结果：Caspase-3在中毒大鼠不同脑区表达逐渐增加并可见明显的阳性信号;Bcl-2在中毒大鼠不同脑区表达逐渐减弱。结论：凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2参与了甲基苯丙胺神经毒性机制。     

大天鹅肾组织显微结构及细胞凋亡相关蛋白的表达

为了解大天鹅(Cygnus cygnus)肾的结构特点和相关活性蛋白的表达情况,采用石蜡切片、H.E染色和免疫组化法,观察分析大天鹅的肾组织显微结构和Caspase-3、Bcl-2、Bax及AQP-3的表达。大天鹅的肾组织主要由肾单位、集合管和结缔组织构成;肾小球由一团盘曲的毛细血管构成,近端小管由单层立方上皮组成,游离面有刷状缘,细段由单层扁平上皮组成,远端小管由立方形上皮组成,腔面无刷状缘。近端小管上皮细胞中有Caspase-3、Bcl-2、Bax阳性表达,远端小管上皮细胞有Caspase-3阳性表达,集合管上皮细胞有Bcl-2、AQP-3阳性表达,在肾小球毛细血管内皮有Bcl-2阳性表达。Caspase-3、Bcl-2、Bax及AQP-3共同调节细胞的生长与凋亡过程,可能在稳定鸟类肾单位和集合管结构及调节肾组织水平衡等方面有重要的作用。     

Caspase-12抑制剂对百草枯中毒大鼠肝损伤的保护作用

目的:观察caspase-12抑制剂Z-ATAD-FMK对百草枯染毒大鼠肝脏caspase-12蛋白表达和肝细胞凋亡的影响,以及通过血清SOD和MDA的检测,探讨其对百草枯中毒大鼠肝脏保护作用和对机体氧化应激反应的作用。方法:50只健康Wistar大鼠随机分三组:A组为正常对照组;B组为模型组(PQ染毒);C组抑制剂组(PQ/Z-ATAD-FMK),于3d、7d处死B组和C组各10只大鼠。取血检测ALT、TBIL、SOD和MDA;HE染色观察肝组织病理学变化;免疫组化法检测caspase-12蛋白;二苯胺法检测细胞凋亡率。SPSS18.0统计分析。结果:Z-ATAD-FMK抑制剂组ALT、TBIL、MDA值低于模型组(P0.05),SOD高于模型组(P0.05);caspase-12蛋白表达和细胞凋亡率亦低于模型组(P0.05);HE染色显示凋亡和坏死程度也较模型组轻。结论:Caspase-12抑制剂Z-ATAD-FMK能减少百草枯中毒大鼠肝脏caspase-12蛋白表达和肝细胞凋亡率,减轻肝细胞坏死,对肝脏具有保护作用,同时可以抑制百草枯中毒大鼠的氧化应激反应。     

藏红花对肝纤维化大鼠肝脏组织中Caspase-3，Bcl-2 表达的影响

目的:研究藏红花(Saffron)对肝纤维化大鼠肝组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达的影响。方法:45只雄性SD大鼠随机均分为3组:正常组、模型组、藏红花组,除正常组外,另外两组给予40%四氯化碳橄榄油溶液腹腔注射制备肝纤维化大鼠模型,在造模的同时,藏红花组给予藏红花溶液5 m L·kg~(-1)·d~(-1)灌胃。8周后处死大鼠,留取肝脏组织,通过Masson染色观察大鼠肝纤维化的形成,免疫组化方法检测肝组织中Caspase-3及Bcl-2蛋白表达。结果:模型组大鼠肝纤维化程度最重,藏红花组较模型组纤维化程度轻,正常组大鼠肝脏无纤维化。与模型组比,藏红花组Caspase-3在肝实质内呈弱阳性表达,而纤维间隔内表达增加;Bcl-2的表达明显减少(P0.05),正常组Caspase-3及Bcl-2几乎无表达。结论:藏红花具有抗肝纤维化作用,其机制可能与调节Caspase-3,Bcl-2的表达有关。     

血清CysC及尿NGAL在百草枯中毒患者急性早期肾损伤中诊断价值

目的:探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)及尿性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在百草枯中毒患者急性早期肾损伤(AKI)中的诊断价值。方法:选择2011年3月至2015年3月我院收治的300例百草枯中毒患者为病例组,另选取来我院150例健康体检者为对照组,病例组根据是否发生AKI分为AKI组与非AKI组,各150例,采用酶联免疫吸附法检测NGAL、肌氨酸氧化酶法检测血清肌酐(Scr)水平、免疫透射比浊法检测CysC水平,观察所有对象入院后15 min、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d CysC、NGAL以及Scr表达水平的变化。结果:AKI组和非AKI组患者入院后8 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d的Scr水平均高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);AKI组患者入院后12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d Scr水平明显高于非AKI组,差异具有统计学意义(P0.05);AKI组入院后2 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d,非AKI组入院后8 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d的NGAL水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);AKI组患者NGAL水平在入院后48 h升至峰值,而后开始缓慢下降,且AKI组入院后4 h的NGAL水平便开始明显高于非AKI组(P0.05);AKI组基本在入院后8 h、非AKI组在入院后12 h的CysC水平便明显高于对照组(P0.05),AKI组基本在入院后3d升至峰值,而后开始缓慢下降,且AKI组在入院后12 h的CysC水平便开始明显高于非AKI组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:血清CysC及尿NGAL水平在百草枯中毒后短时间内会出现异常升高,对早期诊断AKI具有积极意义。     

Milk thistle impedes the development of carbontetrachloride-induced liver damage in rats through suppression of bcl-2 and regulating caspase pathway

Aim

The objective of this study was to examine whether MT plays a protective role against the damage in the liver by administering carbontetrachloride (CCl₄) to rats.

Main method

28 male Wistar albino (n = 28, 8 weeks old) rats have been used in the study. The rats were distributed into 4 groups according to their live weights. The groups were: (i) negative control (NC): normal water consuming group to which no CCl₄ and milk thistle (MT) is administered; (ii) positive control (PC): normal water consuming group to which no CCl₄ is administered but MT is administered; (iii) CCl₄ group: normal water consuming and group to which CCl₄ is administered (2 ml/kg live weight, ip); and (iv) CCl₄ + MT group: CCl₄ and MT administered group (2 ml/kg live weight, ip). Caspase-3, caspase-9, bax, and bcl-2 protein syntheses were examined via western blotting. MDA determination in liver tissue was made using spectrophotometer.

Key findings

MDA amount has decreased in the CCl₄ + MT group in comparison to CCl₄ group whereas caspase-3 and caspase-9 has increased and bax and bcl-2 has decreased.

Significance

These results show that MT protects the liver against oxidative damage.     

阿加曲班对急性脑梗死大鼠脑组织细胞凋亡的影响

目的探讨阿加曲班对急性脑梗死大鼠脑组织细胞凋亡数量、caspase-3、Bcl-2和Bax表达的影响。方法建立SD大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,将大鼠分为假手术组(Sham组,不插入MCAO拴线)、脑中动脉缺血模型组(MCAO组)和阿加曲班处理组(Argatroban组)。分别选取0、6和12 h共3个时间窗的样本进行检测,TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒检测大鼠脑部神经细胞凋亡,Western blot和ELISA法检测大鼠脑部caspase-3、Bax和Bcl-2水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果TUNEL法结果显示,与MCAO组比较,Sham组和Argatroban组在0、6、12 h的细胞凋亡指数均降低[0 h(14.91±4.11)﹪比(2.13±0.58)﹪、(4.22±1.01)﹪;6 h(24.75±3.88)﹪比(3.19±0.28)﹪、(12.14±1.90)﹪;12 h(48.22±2.69)﹪比(5.75±1.21)﹪、(28.45±7.84)﹪,P均<0.05]。ELISA结果显示:与Sham组比较,MCAO组0、6、12 h的大鼠脑组织细胞caspase-3、Bax表达均升高,而Bcl-2表达在6、12 h时升高(P均<0.05);与MCAO组比较,Argatroban组的脑组织细胞caspase-3、Bax表达均降低,而Bcl-2表达在6、12 h时升高[caspase-3表达:0 h(2.32±0.12)比(1.25±0.06)、6 h(5.91±0.60)比(3.26±0.22)、12 h(7.31±0.27)比(6.42±0.18)ng/ml;Bax表达:0 h(0.82±0.08)比(0.45±0.03)、6 h(1.00±0.05)比(0.66±0.04)、12 h(1.56±0.11)比(1.09±0.07)ng/ml;Bcl-2表达:6 h(1.07±0.08)比(1.56±0.05)ng/ml,12 h(0.67±0.08)比(1.45±0.06)ng/ml,P均<0.01]。Western blot结果显示,大鼠脑组织细胞caspase-3、Bax蛋白表达趋势与ELISA结果一致;而Bcl-2蛋白表达在Argatroban组高于Sham组和MCAO组,差异有统计学意义(P均<0.01)。结论阿加曲班可通过减少急性脑梗死诱导的大鼠脑组织细胞凋亡、抑制caspase-3和Bax表达,并上调Bcl-2水平而产生神经保护作用。