结直肠癌相关周期蛋白质研究进展

细胞周期蛋白是调控真核细胞有丝分裂时相的一类蛋白质,在肿瘤细胞的分裂增殖活动中同样起到十分重要的调控作用。在结直肠癌中,细胞周期蛋白的异常表达和调节失控十分常见。在结直肠癌相关周期蛋白的研究中,关于细胞周期蛋白Cyclin D1的研究最深入,可作为结直肠癌的一项诊断指标并作为其增殖程度的监测。近年来,随着周期蛋白Cyclin E、B1和周期蛋白依赖激酶Cdk1、Cdk4以及p21等在结直肠癌发生发展中的作用陆续得到一系列相关实验的初步证实,结直肠癌的研究不断向前推进,细胞周期蛋白必将为结直肠癌的治疗提供新的靶点。本文主要从细胞周期蛋白在结直肠癌中的表达、治疗效果这2个方面,介绍近年来结直肠癌相关周期蛋白的研究进展。     

MicroRNA-203在结直肠癌研究中的进展

结直肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤。目前认为结直肠癌的形成是一个多因素、多步骤的过程,其具体发病机制尚不清楚。microRNA是一类非编码小分子RNA,能在转录后水平调控靶基因的表达,参与肿瘤的增殖、侵袭和转移,甚至调节肿瘤化疗敏感性。学者普遍认为mircroRNA-203(mir-203)是抗癌小分子RNA,但与以往不同的是mir-203在结直肠癌肿的表达水平仍存在争议。本文将概述mir-203在结直肠癌的发生、发展、诊断、预后以及药物抗性中发挥的各类生物学作用。阐述mir-203在结直肠癌不同信号通路中的作用,探索其在结直肠癌研究中的全部潜能。     

PKM2和Notch1在结直肠癌中的研究进展

研究表明, M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2, PKM2)和Notch1在结直肠癌组织中高表达,且与结直肠癌的发生、发展有一定的关系;其表达水平亦与肿瘤的化、放疗效果有关,严重影响患者预后,是目前结直肠癌治疗和研究的关键靶点。PKM2主要通过调节癌细胞代谢及基因转录,促进癌细胞外泌体分泌,并在某些lncRNAs的调节下发挥促癌作用,可作为结直肠癌的辅助诊断指标。Notch1可在mi RNAs以及自噬的调节下发挥促癌作用,且可通过促进上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)促进结直肠癌转移。此外,PKM2和Notch1在结直肠癌中的作用与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路有联系,但两者之间是否有相关性,目前尚不明确。本文主要就PKM2和Notch1在结直肠癌中的研究进展进行探讨,以期为结直肠癌的靶向治疗研究提供新思路。     

IGF-Ⅱ、IGF-lR、IGFBP-3在结直肠癌中的表达及诊断价值研究

目的:探讨结直肠癌中IGF-Ⅱ、IGF-l R以及IGFBP-3等的阳性表达及诊断价值。方法:收集我院45例结直肠癌、33例炎性息肉、40例腺瘤以及35例正常肠粘膜组织予以免疫组织化学SP法进行IGF-Ⅱ、IGF-l R以及IGFBP-3检测,并统计结直肠腺瘤不同组织类型和结直肠癌不同Dukes分期的阳性表达差异。结果:结直肠癌组织中IGF-Ⅱ、IGF-l R以及IGFBP-3表达均呈高阳性率,并且显著高于其他3组(P0.05)。结直肠腺瘤管状、混合型、绒毛状等不同组织类型IGF-Ⅱ、IGF-l R以及IGFBP-3表达阳性率呈逐渐增高趋势,绒毛状腺瘤显著高于其他两型(P0.05)。45例结直肠癌中,Dukes分期A、B两期显著低于C期和D期,比较差异具有显著性(P0.05)。结论:IGF-Ⅱ、IGF-l R以及IGFBP-3可能在结直肠腺瘤发生、发展及进展为结直肠癌的过程中起一定作用,对结直肠癌早期诊断具有一定价值。     

人白细胞抗原G在结直肠癌中的表达及意义

目的：在蛋白水平检测人白细胞抗原G（HLA-G）在结直肠癌组织中的表达,探讨HLA-G分子在结直肠癌不同分级和不同分期中的表达差异及在肿瘤逃逸中作用。方法：用免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁正常结直肠组织HLA-G的表达情况,用SPSS13.0软件、Kruskal-Wallis test进行分析。结果：HLA-G分子在结直肠癌组织中的表达率为42.3%（41/97）,在癌旁正常结直肠组织的表达率为0（0/20）;HLA-G分子表达与结直肠癌临床TNM分期（P〈0.05）和组织学分级（P〈0.01）相关。结论：HLA-G分子在结直肠癌组织中表达上调,且与结直肠癌的侵袭性生长密切相关;HLA-G分子可能下调宿主对肿瘤细胞的免疫应答反应,使肿瘤细胞逃避机体的免疫监视。     

miR-195-5p在结直肠癌和肺癌细胞中的功能差异性研究

目的:分析miR-195-5p在结直肠癌和肺癌组织及相应肿瘤细胞中的表达差异和功能差异。方法:通过starBase数据库调取癌症基因组图谱(TCGA)中miR-195-5p表达数据,分析其在结直肠癌和肺癌组织中的表达差异;采用人结直肠癌细胞系SW620、小鼠结直肠癌细胞系MC38、人肺癌细胞系A549和小鼠肺癌细胞系344SQ进一步分析miR-195-5p在不同肿瘤细胞中的表达差异;采用CCK-8法检测miR-195-5p过表达对SW620和A549细胞增殖的影响;采用Transwell实验检测mi R-195-5p过表达对SW620和A549细胞侵袭与迁移能力的调控差异。结果:生物信息学分析结果显示miR-195-5p在结直肠癌组织中显著高表达,而在肺癌组织中的表达量却低于正常对照;与组织表达结果类似,结直肠癌细胞中miR-195-5p的表达量显著高于肺癌细胞;过表达miR-195-5p抑制人肺癌细胞A549的增殖、迁移与侵袭,而在人结直肠癌细胞SW620中结果却截然相反。结论:miR-195在不同类型的肿瘤中表达不同,功能也存在差异,不能简单地概括为一种抑癌因子或致癌因子,miR-195在肿瘤中的作用仍有待进一步研究。     

IGF-Ⅱ、IGF-1R、IGFBP-3在结直肠癌中的表达及诊断价值研究

目的：探讨结直肠癌中IGF-Ⅱ、IGF-1R以及IGFBP-3等的阳性表达及诊断价值。方法：收集我院45例结直肠癌、33例炎性息肉、40例腺瘤以及35例正常肠粘膜组织予以免疫组织化学SP法进行IGF—Ⅱ、IGF—1R以及IGFBP-3检测,并统计结直肠腺瘤不同组织类型和结直肠癌不同Dukes分期的阳性表达差异。结果：结直肠癌组织中IGF—Ⅱ、IGF—1R以及IGFBP-3表达均呈高阳性率,并且显著高于其他3组（P〈0．05）。结直肠腺瘤管状、混合型、绒毛状等不同组织类型IGF-Ⅱ、IGF—1R以及IGFBP-3表达阳性率呈逐渐增高趋势,绒毛状腺瘤显著高于其他两型（P〈0．05）。45例结直肠癌中,Dukes分期A、B两期显著低于C期和D期,比较差异具有显著性（P〈0．05）。结论：IGF—Ⅱ、IGF-1R以及IGFBP-3可能在结直肠腺瘤发生、发展及进展为结直肠癌的过程中起一定作用,对结直肠癌早期诊断具有一定价值。     

肝癌微血管浸润相关长链非编码RNA(lncRNA-MVIH)在结直肠癌中的表达

为了探讨长链非编码RNA肝癌微血管浸润相关mRNA(MVIH-lncRNA)在结直肠癌中的表达及其临床意义。本研究采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测MVIH-lncRNA在44例结直肠癌组织、44例癌旁组织和13例正常结肠组织中表达。研究结果表明:MVIH-lncRNA在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织(p0.001)和正常结肠组织(p0.001),并且MVIH-lncRNA的表达在正常结肠组织、癌旁组织、结直肠癌组织中呈递增趋势(p0.001)。高表达MVIH-lncRNA与淋巴结转移相关,而与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分化不相关;MVIH-lncRNA表达上调患者生存时间更短(p=0.034),其在结直肠中高表达提示预后不良。本研究的结果表明MVIH-lncRNA在结直肠癌的早期诊断、预后评价中的具有重要的意义,为进一步研究MVIH-lncRNA在结直肠癌的发生发展中的分子机理奠定了研究基础。     

GJA1在结直肠癌组织中表达及促进侵袭转移的研究

摘要 目的：间隙连接Alpha-1蛋白（Gap Junction Alpha-1,GJA1）是间隙连接中分布最广泛的蛋白,并在多种肿瘤中起促癌作用,但其在结直肠癌发生、发展的作用研究甚少。本实验旨在探究GJA1在结直肠癌组织中的表达情况及其对结直肠癌细胞系侵袭、转移能力的影响,以期为结直肠癌的诊断和预后寻找新的生物标志物。方法：收集92对结直肠癌及其癌旁组织样本,提取组织RNA,利用qRT-PCR检测GJA1相对表达量,并分析GJA1表达与临床病理特征及预后的相关性。在HCT116和HCT8两种结直肠癌细胞系中分别构建GJA1过表达载体和敲减载体,利用qRT-PCR和、Western Blot检测上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）相关蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail的表达变化,利用Wound healing和Transwell实验观察其迁移、侵袭能力的变化。结果：相对于癌旁组织,GJA1在结直肠癌组织中显著低表达。并且结直肠癌中低表达的GJA1与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴血管转移相关,低表达GJA1结直肠癌患者显示更差的总体生存率和更低的无病生存率。此外,过表达GJA1后,结直肠癌细胞E-cadherin的表达升高,N-cadherin、Vimentin和Snail的表达降低,划痕愈合减慢,Transwell转移细胞减少;而敲减GJA1后,结直肠癌细胞E-Cadherin的表达降低,N-Cadherin、Vimentin和Snail的表达升高,划痕愈合加快,Transwell转移细胞增多。结论：GJA1在结直肠癌中低表达,其表达降低可通过EMT促进结直肠癌的侵袭、转移并影响病人预后。     

CXC趋化因子配体8促进结直肠癌微环境中M2型巨噬细胞趋化及浸润

CXC趋化因子配体8(CXC chemokine ligand 8,CXCL8)在结直肠癌等多种肿瘤中高表达,并促进肿瘤恶性进展。研究发现,结直肠癌微环境中有大量M2型巨噬细胞浸润,但CXCL8是否影响M2型巨噬细胞的浸润及其潜在机制尚未可知。本文旨在探讨CXCL8对结直肠癌中M2型巨噬细胞浸润及趋化作用的影响。本研究首先分析了TCGA数据库结直肠癌样本中CXCL8表达水平及免疫细胞浸润情况,并在临床组织中进行验证。随后Western 印迹及qRT-PCR检测5种结直肠癌细胞株CXCL8的表达情况。佛波酯(PMA)及IL-4诱导THP-1至M2型巨噬细胞后,与HCT116、SW480细胞及过表达CXCL8的HCT116(CXCL8/HCT116)、SW480(CXCL8/SW480)共培养,检测M2型巨噬细胞趋化情况。白细胞介素1β(IL-1β)处理HCT116、SW480细胞,检测CXCL8表达情况,与M2型巨噬细胞共培养,分析趋化结果。结果显示,患者癌组织CXCL8表达高于癌旁组织,CXCL8高表达癌组织中存在更多M2型巨噬细胞浸润;IL-1β作用于HCT116或SW480后,CXCL8的mRNA及蛋白质表达水平升高(P<0.05)。Transwell实验证实,CXCL8趋化M2型巨噬细胞(P<0.05)。综上所述,结直肠癌细胞中CXCL8可由IL-1β诱导产生,CXCL8表达增加能够促进M2型巨噬细胞的趋化,结直肠癌微环境中M2型巨噬细胞大量浸润可能与CXCL8表达升高有关。     

叉头盒蛋白M1的表达水平与结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的关系

叉头盒蛋白M1 (forkhead box protein M1, FOXM1)是细胞分化和增殖的重要调节因子,目前已经证实FOXM1在多种肿瘤细胞中高度表达,然而其在结直肠癌细胞中的作用尚不明确。为了揭示FOXM1的表达水平与结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的关系,本研究检测了53例结直肠癌患者的肿瘤组织和邻近非癌组织中的FOXM1表达水平。此外,应用FOXM1 siRNA转染人结直肠癌细胞系SW620,并考察FOXM1敲低对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。免疫组化结果显示,92.45%的结直肠癌组织为FOXM1高表达(49/53),18.87%的相邻非癌组织为FOXM1高表达(10/53),FOXM1在不同组织间差异显著(χ~2=58.141, p=0.001)。QRTPCR和Western blotting分析显示,结直肠癌组织中FOXM1的m RNA和蛋白表达水平显著高于邻近非癌组织(p0.05)。此外,siRNA敲低SW620细胞中FOXM1的表达后,CCK8检测显示FOXM1沉默显著降低SW620细胞的增殖活性;Transwell测定和细胞划痕愈合结果显示,FOXM1沉默显著降低细胞的侵袭和迁移能力(p0.05)。表明FOXM1可能介导结直肠癌的发病机制,其有望成为结直肠癌分子治疗的有效靶点。     

结直肠癌中Galectin-3和β-catenin的表达与相关性研究

目的探讨结直肠癌中Galectin-3和β-catenin的表达与临床病理参数之间的关系。方法采用免疫组化En Vision法检测83例结直肠癌组织中galectin-3和β-catenin的表达。结果Galectin-3在结直肠癌中的阳性表达率为81.9%,β-catenin的异常表达率为62.7%。结直肠癌中galectin-3的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移和病理分期有关(P0.05),而与患者年龄、肿瘤部位、肿瘤大小和脉管侵犯无关(P0.05)。结直肠癌中β-catenin的异常表达与分化程度、淋巴结转移、脉管侵犯和病理分期有关(P0.05),而与患者年龄、肿瘤部位、肿瘤大小和浸润深度无关(P0.05)。结直肠癌中galectin-3的表达与β-catenin异常表达呈正相关(P0.05)。结论Galectin-3的表达可能与结直肠癌的高浸润转移能力有关,其可能是通过β-catenin表达异常而促进肿瘤的浸润扩散。     

AEBP1在结直肠癌中的表达及其意义

目的:研究脂肪细胞增强结合蛋白1(AEBP1)在结直肠癌组织中的表达情况,以探索其临床意义。方法:运用免疫组织化学和实时定量PCR技术,对AEBP1在结直肠癌中的表达情况进行检测,并分析其表达量与患者临床病理特征的关系。结果:AEBP1在结直肠正常组织、腺瘤和癌组织中的免疫评分有明显差异(P0.05),而且AEBP1的阳性表达与肿瘤的分期和浸润深度明显相关。基因水平AEBP1的表达在肿瘤组织中明显高于正常组织。结论:AEBP1在结直肠癌组织中存在异常表达,并且可能是结直肠癌早期诊断和浸润深度的肿瘤标志物。     

结直肠癌中c-erbB-2和E-cadherin蛋白表达与临床病理关系

为了探讨c-erbB-2和E-cadherin（E-cad）蛋白表达与结直肠癌浸润转移的关系及相关性.应用免疫组织化学技术,检测90例结直肠癌中c-erbB-2和E-cad蛋白表达.结果表明：90例结直肠癌中c-erbB-2和E-cad蛋白阳性表达率分别为52.2%（47/90）和46.7%（42/90）.c-erbB-2高表达及E-cad低表达与结直肠癌Dukes分期、浆膜浸润和淋巴结转移均呈正相关（P〈0.05）.结直肠癌中c-erbB-2表达与E-cad表达呈负相关（P〈0.05）.c-erbB-2和E-cad表达与结直肠癌浸润转移密切相关.联合检测其蛋白表达可作为判断结直肠癌预后的客观指标.     

miR-200家族——一类新的结直肠癌相关基因

结直肠癌是常见消化道恶性肿瘤,其发病率位居胃肠道肿瘤前列。病人早期无明显症状或不适,缺乏有利的患病指征。目前结直肠癌的治疗仍是以手术切除为主,放射治疗、化疗治疗为辅,据临床实践显示,中西医结合治疗药也能达到一定的治疗效果。但是,纵观患者的总体治愈率和生存率,临床治疗并未能大大改善当前的窘境。为此,对结直肠癌的研究日益受到重视,近年来的研究已深入分子水平,发现某些基因与结直肠癌的演变、预后、治疗等存在联系。数据显示mi R-200家族在结直肠癌中的表达异常,会影响患者的生存率和存活时间,介导肿瘤细胞的恶性生物学行为。并且mi R-200家族能调控上皮-间充质转化(epithelial mesen-chymal transition,EMT)关涉因子,如ZEB1、ZEB2,被认为是EMT相关家族,其在结直肠癌侵袭、转移中的作用亦是当前的研究热点。本研究就mi R-200家族与结直肠癌的联系予以综述,为结直肠癌的进一步研究和临床治疗探讨提供思路。     

RASSF6在结直肠癌中的表达研究

结直肠癌是遗传因素与外界环境因素共同作用的结果,其中70%以上遗传倾向不明显,呈散发性。而目前已报道的散发性结直肠癌分子标识,如APC、KRAS以及TP53等对其发生的解释有限。新一代高通量的外显子测序技术是肿瘤候选基因筛查的有效手段。本研究在前期3例散发性结直肠癌外显子测序的结果中发现,RASSF6基因发生功能缺失突变。为了深入研究基因功能,我们对RASSF6基因在结直肠癌细胞系及结直肠患者组织的表达进行研究。结果为:相比于正常细胞NCM460,RASSF6在HT-29及SW480肠癌细胞系中呈高表达,而在Lo Vo细胞中并无统计学差异。RASSF6在结直肠癌组织中强阳性表达较高(32%),而正常组织中并未发现强阳性表达,两组间具有统计学差异(p0.000 1)。结论:抑癌基因RASSF6在结直肠癌中表达升高可能是代偿性的结果,而其表达是如何调节的仍需进一步深入研究。     

miR-598 对结直肠癌细胞转移潜能的影响

目的:探讨miR-598在结直肠癌转移中的作用和分子机制,为寻找新的结直肠癌治疗靶标提供理论依据。方法:收集30对人结直肠癌及癌旁正常组织标本,采用qRT-PCR检测miR-598的表达,采用Transwell和划痕实验确定miR-598对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响,利用在线靶基因预测软件,筛选出miR-598可能的下游靶基因Jagged 1(JAG1),利用Western blot及双荧光素酶报告基因实验检测miR-598对JAG1及上皮间质转化标志物(Vimentin及E-cadherin)表达的影响。结果:与正常肠黏膜组织对比,miR-598在结直肠癌组织中的表达水平明显降低;miR-598显著抑制结直肠癌细胞的侵袭及迁移能力;分子机制分析证实miR-598能够作用于JAG1的3'-UTR并抑制其表达;过表达miR-598显著下调Vimentin的表达水平,而提高E-cadherin的表达水平。结论:miR-598在人结直肠癌中表达明显下调;miR-598通过靶向调控靶基因JAG1的表达,抑制结直肠癌细胞EMT,从而有效的抑制了结直肠癌细胞的侵袭和迁移。     

CAFs调控MAPK/ERK5通路抑制结直肠癌HT-29细胞凋亡

为探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究通过组织贴壁法从结直肠癌组织中分离CAFs,并验证CAFs中α-SMA的表达;通过Transwell建立CAFs和结直肠癌细胞系HT-29共培养系统,CCK8检测结直肠癌HT-29细胞活力;流式细胞术检测HT-29细胞凋亡率;通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测结直肠癌细胞中VEGF的mRNA和蛋白表达以及ERK5磷酸化水平。与对照NFs相比,α-SMA在结CAFs中表达显著增加(p0.01)。CCK8结果表明CAFs促进结直肠癌细胞的增殖;流式结果显示CAFs能抑制细胞凋亡;Real-time RT-PCR和Western blotting结果显示CAFs促进结直肠癌细胞内VEGF的mRNA和蛋白表达,并促进ERK5磷酸化。本研究初步表明,CAFs激活MAPK/ERK5通路和VEGF的表达,可促进结直肠癌HT-29细胞增殖。     

MAT2A与NDRG2基因在结直肠癌中表达情况及临床意义的研究

目的研究MAT2A(甲硫氨酸腺苷转移酶2A)和NDRG2(N-Myc下游调节基因-2)基因在结直肠癌组织中的表达及两者的相关性,为结直肠癌的研究及治疗提供重要参考。方法选取68例术中切除结直肠癌组织及相应的癌旁组织标本,应用RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应)和Western blotting(蛋白质印迹法)检测结直肠癌中MAT2A和NDRG2表达水平。结果结直肠癌中MAT2A和NDRG2mRNA表达情况:MAT2A阳性表达率(66.2%,45/68)高于癌旁组织(7.4%,5/68);NDRG2阳性表达率(36.8%,25/68)低于癌旁组织(91.2%,62/68);两者的表达与患者年龄、性别、肿瘤生长位置等因素均无关,与癌肿临床分期、分化水平及淋巴结转移密切相关。癌肿组织中MAT2A蛋白表达量相较于癌旁组织明显增多(t=39.1152,P=0.0000),而癌肿组织中NDRG2蛋白表达量较癌旁组织明显降低(t=46.5103,P=0.0000);且在结直肠癌组织中两基因的表达可能有相关性(χ~2=7.41,P=0.009)。结论在结直肠癌组织中MAT2A表达增高,NDRG2表达下降,两者与肿瘤的发生发展具有一定相关性,推测可能与DNA甲基化异常有关,但具体机制仍待进一步研究。     

MXRA5在结直肠癌中的表达及其意义

目的:在我们的前期实验中,我们运用质谱技术研究新鲜培养的结直肠癌和对应的正常黏膜蛋白组学差异时发现基质重建相关蛋白5(MXRA5)在两者之间的表达有明显的差异,而目前并没有关于MXRA5是否可以作为结直肠癌肿瘤标志物的研究;本实验的目的是探索MXRA5在结直肠癌中的表达情况以及其临床意义.方法:运用免疫组化和实时定量PCR技术,对MXRA5在结直肠中的表达情况进行检测,并分析其与临床病理特征的关系.结果:MXRA5在结直肠正常组织、腺瘤和肿瘤中的免疫评分有明显差异(P＜0.05),而且MXRA5的阳性表达与肿瘤的分期和大网膜转移明显相关.基因水平MXRA5的表达没有发现明显差异.结论:我们的研究结果证实了MXRA5在肠癌组织中存在异常表达,并且可能是结直肠癌早期诊断或者大网膜转移的肿瘤标志物.