分枝杆菌质粒的提取

采用经典的碱裂解法从８株致病性分枝杆菌（其中包括两株结核杆菌耐药菌株）获得３个质粒,经凝胶电泳分析它们的大小分别为７．７ｋｂ、９．４ｋｂ、２３ｋｂ左右。     

结核分枝杆菌Rv1884基因真核表达质粒的构建及表达

目的:构建结核分枝杆菌Rv1884基因真核表达载体。方法:PCR扩增Rv1884基因,测序正确后克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-);经酶切鉴定正确的重组质粒酶以阳离子聚合物转染P815细胞后,以RT-PCR方法检测mRNA的表达,以间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达。结果:构建了重组质粒pcDNA-Rv1884;RT-PCR结果证明Rv1884可在P815细胞中转录;用间接免疫荧光检测,表达有Rv1884蛋白的细胞着染。结论:构建了结核分枝杆菌Rv1884基因的真核表达载体pcDNA-Rv1884,Rv1884基因可以在P815细胞中表达。     

根瘤菌质粒研究进展

根瘤菌能使豆科植物形成根瘤并在根瘤中将氮气转换成植物能利用的形式,即共生固氮。根瘤菌普遍含有高分子量的大质粒,而且与其生物学功能有密切关系。因而质粒是根瘤菌的遗传学的重要方面。每个菌株的质粒类型通常是稳定的,也是菌株的特征之一。已报道的根瘤菌质粒的数目从l～10个不等,其分子量（Mr／10’）多在100～300之间,＞1000的称为巨大质粒（Meg…asAnd）,已知St）lorhi。obiumnwliloli和AsiZObiumgaingae均含有巨大质粒l‘］。质粒在细胞基因组中占有较大的比重,如在Anlcobiumelti中其质粒可占细胞基因组的45o。AsrhizOb…     

结核分枝杆菌核酸疫苗的构建及其小鼠免疫效果观察

将结核杆菌ＥＳＡＴ－６和ＭＰＴ－６４的编码基因分别插入真核表达载体ＪＷ４３０３构建重组质粒,用重组擀凿对４周龄的ＢＡＬＢ／Ｃ和Ｆ１代小鼠进行肌肉和皮内地末次免疫后１０天采血交分离血清,进行ＥＬＩＳＡ检测。结果表明,小鼠能产生较强的体液免疫,特异性ＩｇＧ平均水平分别为参考血清的２．２０倍３．１９倍,且对两种品系小鼠进行的相同途径的免疫,其抗体水平差异不显著,而不同途径的重组质粒免疫,抗体水平略有差异     

结核分枝杆菌毒力的研究进展

结核分枝杆菌可以在人体内缓慢增殖,释放代谢产物,造成细胞损伤,引起结核病。其致病机制可能与其复杂的细胞壁成分密切相关。结核分枝杆菌细胞壁中的脂质、糖类及蛋白类物质在构成屏障结构,保护并辅助结核分枝杆菌在细胞内的生长及迁移,调节宿主免疫应答,造成宿主组织细胞损伤等方面发挥重要生物学作用。其表达受众多基因的精细调控。本文将对结核分枝杆菌细胞壁中的脂质阿拉伯甘露聚糖和分枝菌酸在其毒力中的作用,以及sig基因对毒力的调节作用作一综述。     

质粒克隆载体研究进展

质粒克隆载体研究进展靳卫东宋增璇（中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室,天津３０００２０）关键词质粒克隆载体质粒是基因工程重要的载体之一。它是细胞内的共生型遗传因子,它能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞一些特殊表型。质...     

衣原体质粒研究进展

质粒是染色体外的遗传物质,大部分衣原体中存在隐蔽性质粒,其特有的基因组学和编码的蛋白对衣原体的生长周期、毒力、致病性和免疫性等起着十分重要的作用,对衣原体质粒的研究有助于了解其生物学作用,从而更好的预防与治疗衣原体感染的感染.     

衣原体质粒的研究进展

衣原体质粒是一个分子量约为7.5 kb,基因序列高度保守,非整合性的DNA分子,广泛存在于沙眼衣原体的各个血清型中,鼠衣原体和鹦鹉热衣原体也携带该质粒.近年来,人们发现衣原体质粒是一种毒力因子,可以导致小鼠输卵管积水.动物实验显示质粒缺失株可作为减毒活疫苗来预防衣原体感染所致的生殖道和眼睛的病变.不仅如此,衣原体质粒还是一种有效的基因操纵工具,可用于沙眼衣原体致病机制的研究.因此,开展对衣原体质粒的研究具有重要的意义.     

抗结核分枝杆菌疫苗的研究进展

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的传染病,细胞免疫中的CD4+T细胞、CD8+T细胞、Th17细胞在对抗结核分枝杆菌感染中发挥重要作用,新近研究显示抗体特定的糖链修饰有助于清除病原体,提示体液免疫也可能参与免疫保护。目前使用的疫苗——卡介苗对婴幼儿重症结核病具有良好的保护力,但是对成人肺结核保护力欠佳,所以需要研发新的疫苗。目前已有数个新型疫苗进入临床试验。本文就结核分枝杆菌的免疫保护机制作一简要介绍,主要阐述现用疫苗——卡介苗及新型疫苗的研究现状,让读者对上述知识的进展有所了解。     

溃疡分枝杆菌、溃疡分枝杆菌素与溃疡分枝杆菌毒素

1948年,MacCALLUM在澳大利亚东南沿海维多利亚一个儿童的腿部溃疡中分离到一种新的分枝杆菌,并称之为溃疡分枝杆菌（Mycobacterium ulcerans）,并证明是这种溃疡的病原菌。这种由溃疡分枝杆菌引起的皮肤感染主要存在于热带、亚热带地区,尤以西非地区更盛,具有地方性流行,现在通常称谓Bumli溃疡,中国也有发现,世界卫生组织（WHO）已组建全球Buruli溃疡行动委员会,开展对该病的防治研究,现已认为溃疡分枝杆菌感染（Bundi溃疡）是一种新发的感染病。     

衣原体质粒研究进展

质粒作为染色体外的遗传物质存在于大多数衣原体中,它们不但能调节染色体基因的表达,同时可编码衣原体相关毒力因子,影响衣原体自身的生长周期。因此,研究衣原体质粒对于进一步了解衣原体的致病机制,预防控制衣原体感染具有重要意义。现就衣原体质粒的生物学特征和主要功能进行概述。     

结核分枝杆菌蛋白抗原的研究进展

结核病当今世界人类致死的主要疾病之一,早期诊断发现病人、选择敏感的抗结核药物进行有效治疗是控制结核病的关键。而临床上对结核病患者检出率低,漏诊率和误诊率高,结果导致结核耐药的情况越来越严重。简便、快速、准确的免疫学检测方法在诊断结核病中起到了重要的作用。本文对用于免疫学检测的蛋白抗原作一综述。     

结核分枝杆菌感染动物模型的研究进展

人类结核病位居单一病原引起死亡的严重传染病之首,结核分枝杆菌是其主要病原.尽管结核分枝杆菌可引起许多种动物感染并患病,但人类是其主要宿主.动物模型作为研究人类疾病的标准化工具,虽然不能完全模拟人类结核病的整个过程,但可成为研究结核病的有用工具,有助于研究其发病机制、治疗过程及宿主对病原的免疫病理学反应.由于不同种类动物...     

大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及人结核杆菌HSP65的表达

用PCR技术从Bacillus Calmetteguérin(BCG)基因组中扩增出抗原85B(Ag85B)的信号肽(SP)DNA序列,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG2100的人结核杆菌HSP70启动子下游,构建成分泌型原核穿梭表达质粒(pBCGSPHSP65)。酶切鉴定、PCR和测序分析结果均表明分泌型原核穿梭表达质粒pBCGSPHSP65构建成功。利用电穿孔将该质粒转入耻垢分枝杆菌(Mycobacterial smegmatis, MS)中,用卡那霉素筛选出阳性重组子。经热诱导后用SDS-PAGE观察到在耻垢分枝杆菌中65kD蛋白占总蛋白的20%,而在重组耻垢分枝杆菌表达的65kD蛋白占菌体总蛋白的34.46%,占裂解物上清总蛋白的68.56%,表明重组的HSP65基因能在耻垢分枝杆菌中高效表达,表达的蛋白大部分以可溶状态存在。通过Westernblot证实分泌的该蛋白能与结核杆菌HSP65的抗体特异性结合,说明该重组蛋白具有HSP65的生物学活性。     

结核分枝杆菌耐酸机制的研究进展

结核分枝杆菌能在宿主体内长期存活,很大一部分原因是能抵抗吞噬体的酸性环境。细菌一方面能抑制吞噬体与溶酶体融合,干扰吞噬体成熟、酸化过程;另一方面也能通过自身功能抵抗吞噬溶酶体内的酸性杀伤作用。本文主要介绍吞噬体的酸化过程及结核分枝杆菌耐酸机制的最新研究进展。     

结核分枝杆菌耐药性的分子生物学研究进展

结核病一直是世界性问题,我国其发病情况尤为严重,是亚洲的第二大结核病发病国家。结核病治疗方面常使用抗生素作为首选药物,随着抗菌药的滥用,结核杆菌对多种抗菌药产生耐药性,结核病耐药患者增多,治疗难度增加。因此,结核杆菌耐药分子机制的研究更加重要,新型抗结核药物研制更加迫切。结核分枝杆菌的基因突变是引起耐药的主要分子学依据,因此基于结核分枝杆菌耐药性相关基因的深入探索,对于预防结核病的传播及治疗皆具有深远影响。本文从分子生物学角度分析了近年来结核分枝杆菌耐药性产生的原因及相关研究进展。     

结核分枝杆菌抗原检测研究进展

结核病仍然是一个严重的全球性公共卫生问题,有效控制结核病的障碍在于缺乏早期、准确的诊断方法。机体受到结核分枝杆菌感染后,体内首先出现的是结核分枝杆菌特异性抗原。因此,结核分枝杆菌抗原检测作为结核病早期诊断的方法可能具有很高的诊断价值。我们简要综述了结核分枝杆菌抗原检测的相关研究进展。     

结构分枝杆菌分泌蛋白研究进展

结构分枝杆菌（ＭＴＢ）的分泌蛋白是目前发现对ＭＴＢ感染保护性最好的一组蛋白,对结构病的预防和诊断具有重要意义。本文从其组成、生物学功能、免疫性及其在疫苗研制和ＭＴＢ诊断中的潜在价值作一概述。     

结核分枝杆菌免疫优势抗原研究进展

结核病是当今影响人类健康、流行性最广、病死率最高的感染性疾病之一。结核病的诊断和疫苗的构建成为当前的研究热点,筛选出结核分枝杆菌免疫优势抗原是快速准确的诊断结核病及研制安全有效的疫苗的关键。拟对近年来国内外学者发现的结核分枝杆菌免疫优势抗原的分子生物学特性研究进展进行综述。     

结核分枝杆菌furA基因真核表达质粒的构建及表达

以BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切pRSET-furA,获得结核分枝杆苗铁调控基因furA,将其克隆入真核表达载体pcDNA3．1（-）,构建了重组质粒pcDNA-furA,经酶切鉴定正确后,将重组质粒以阳离子聚合物转染CHO细胞。经RT—PCR分析表明,furA可在CHO细胞中转录;用间接免疫荧光检测,表达有FurA蛋白的细胞着染。以上结果表明,通过构建结核分枝杆菌furA基因的真核表达载体pcDNA-furA,使知以基因可以在CHO细胞中表达。