一种α－半乳糖苷酶的凝胶电泳活性染色方法

介绍一种快速、简便鉴定α－半乳糖苷酶凝胶电泳带的坚固蓝Ｂ活性染色方法。采用此方法,可直接将粗酶制品上样进行凝胶电泳。电泳完成后,只需将凝胶放在反应液中浸泡５ｍｉｎ,然后再在ｐＨ为７．８,温度为４℃的条件下染色１ｍｉｎ,即可将凝胶中的酶分子定位带显示出来。这种坚固蓝Ｂ的活性染色方法与考马斯亮蓝染色相比,节省了大量时间。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳脂蛋白带的耐尔氏蓝染色法

目前聚丙烯酰胺凝胶电泳用考马斯亮蓝G或R染蛋白带、用过碘酸-Schiff试剂染糖蛋白带,均取得了满意的结果.至于用油红(OR)、苏丹黑(SB)对琼脂、醋酸纤维膜等凝胶中的脂蛋白带的染色鉴定是成功的,但对聚丙烯酰胺凝胶中的脂蛋白带的染色则不够满意.我们应用耐尔氏蓝[Nile’s blue] 染色法染盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的脂蛋白带取得了较好的结果.现介绍如下:     

聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质区带的快速负染技术

聚丙烯酰胺凝胶电泳中的快速负染为新近发展起来的方法,其原理为用还原型谷胱甘肽还原四唑鎓硝基蓝(nitroblue tetrazolium)使凝胶背景染色,而蛋白区带不被染色,成为白亮区带,故名为负染。此方法简单、经济,可在20分钟内完成,其灵敏度不亚于考马氏亮蓝染色。具体做法简介如下:凝胶电泳结束后,用无离子水洗涤凝胶板,将其置于含有8 mM 谷胱甘肽的1 M Tris-HCl,pH9.6溶液中作用15分钟,用无离子水洗涤胶板一次,而后再将胶置于含1 mM 四唑鎓硝基蓝的1 M Tris-HCl,pH9.6溶液中显色,约2分钟出现胶背景染色,而蛋白区带不     

聚丙烯酰胺凝胶电泳配合荧光增白剂显色检测木霉几丁质酶同工酶谱

为提高木霉几丁质酶检测方法的准确性和灵敏度,建立一种快速检测几丁质酶同工酶的方法。采用活性凝胶电泳、变性凝胶电泳、原位显色凝胶电泳结合荧光增白剂（Calcofluor white M2R）显色从绿色木霉LTR-2发酵产物中检测几丁质酶同工酶。活性凝胶电泳在粗酶液浓缩5倍时显示两条活性谱带,变性凝胶电泳在浓缩10倍时显示一条活性谱带,原位显色凝胶电泳在浓缩20倍时显示两条不清晰的活性谱带,SDS-PAGE显示这两条活性谱带的分子量分别为65kDa和42kDa。结果表明活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Calcofluor white M2R显色相结合的方法在几丁质酶上样量为0.47U时具有较好的分辨能力,是检测木霉几丁质酶同工酶的有效的方法。     

LDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析植物过氧化物酶同工酶

以高粱和甘蓝型油菜叶片为材料,用十二烷基磺酸锂不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳（LDS-PAGE）检测过氧化物酶同工酶的结果表明,LDS-PAGE的酶带条数比非变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳（native PAGE）明显增加,分辨率大大提高,上样量少,胶片易保存;比复性电泳（G-PAGE）的步骤简单,电泳后无需除去LDS即可直接按常规活性染色方法染色。     

以小麦叶片过氧化物酶同工酶pI6.1酶带为生化标记研究小麦在各生长期对白粉病的敏感性(英文)

小麦白粉病以其多发性、普遍性成为世界各地小麦生产的主要病害之一。在研究抗病品种对白粉病菌侵染的抗病机理中,采用等电聚焦凝胶电泳技术对抗、感白粉病小麦品种的叶片过氧化物酶同工酶酶谱进行的比较发现：两者的ｐＩ６．１酶带（位于等电聚焦凝胶电泳酶谱ｐＩ６．１）从拔节期至田间发病期之间的表现水平有很大差别。可以将其视为区别抗、感白粉病品种的特征性酶带。实验采用功能叶片（Ｆｉｇ．１）,对５０个小麦品种品系、抗、感病品种间４个组合的正反交Ｆ１代、１１９株Ｆ２代、６５株抗病品种／感病品种／／感病品种的回交一代（ＢＣ１）材料,在ｐＨ５～８范围内进行过氧化物酶同工酶的等电聚焦凝胶电泳分离。胶片于联苯胺染色液中显色。抗病品种中,ｐＩ６．１酶带在小麦全生育期均有较强的活性,染色后着色深,多属一级酶带;感病品种中,ｐＩ６．１酶带在拔节之后变得模糊不清、甚至消失踪迹,多为三级、零级酶带;然而、感染白粉病之后酶活性重新表现,并再次回升为一、二级酶带（Ｔａｂ．１）。此结果在五个年份中均能很好地重复（Ｔａｂ．２）。抗、感病品种间正反交Ｆ１代的ｐＩ６．１酶带均正常（Ｆｉｇ．２）,证明：ｐＩ６．１酶带的活性是核基因的表达行为。进而在拔节期至发病     

白及块茎铜,锌超氧物歧化酶的纯化及其性质

白及（Ｂｌｅｉｌｌａｓｔｒｉａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｒｅｉｃｈｂ．ｆ．）的ＳＯＤ同工酶只有一条较宽的谱带,确认为Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ。其块茎ＳＯＤ总活性和比活性都高,且含有丰富的白及胶;经丙酮分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析分离纯化,获得对ＣＮ￣－敏感的淡兰色Ｃｕ·ＺｎＳｏＤ粉末。在凝胶电泳染色图谱上,纯化后的酶与粗酶液的ＳＯＤ区带相对应,且其酶活性染色带与蛋白染色带位置对应,表明已纯化到均一程度。该酶分子量约３３ＫＤ,亚基分子量约为１６．４ＫＤ;紫外光区的吸收峰在２６４．６ｎｍ,等电聚焦电泳呈现一条蛋白区带,ｐＨ值在４．３５左右;该酶在ｐＨ６．０～１０．０,温度在５０℃范围内具稳定性。纯化后的酶为４５６３．２ｕ／ｍｇ·蛋白,纯化了５１倍,活力回收为２２．３％。上述酶没有过氧化氢酶活性。提取过程中还得到高质量的副产品白及胶。     

凝胶板速快干燥方法

作为分析蛋白质和酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳,已广泛地应用于医学和生物学的各个领域。垂直平板凝胶电泳与圆盘电泳相比有其独特优点:(1)操作方便,效率高;(2)数个样品同在一平板便于对比,也减少了实验过程中的系统误差;(3)结果分析方便,并可在必要时将所需酶带洗脱分析。经染色、固定、漂洗之后的凝胶图谱记载,目前通常采用扫描记录,摄影或直接保存凝胶干板等方法。关于制备干板的方法虽有报道,但由于条件和操作复杂,往往不     

叶绿体类囊体膜蛋白质的化学交联效应

研究了蛋白质化学交联剂二氟二硝基苯对叶绿体类囊体膜功能的效应。检测到ＤＦＤＮＢ抑制光合磷酸化,降低光照诱导类囊体膜的质子吸收和９－氨基吖啶（９－ＡＡ）的荧光猝灭,降低电色效应的快相上升,显抑制膜上腺三磷酶的活性,ＤＦＤＮＢ和游离的腺三磷酶进行交联反应,再经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,交联后的酶出现新的蛋白染色带。     

酪氨酸酶活性的微量分析

本文介绍了两种灵敏、精确和较简便的酪氨酸酶活性的微量分析技术。其中之一是[³H]-酪氨酸分析,直接测羟基化的酪氨酸量。根据测得的“总dpm”、“酶样品dpm”和“空白dpm”计算出微量样品中酪氨酸酶的活性。另一种方法是将各个含酶样品通过SDS-PAGE分离和适当处理,放入含多巴的磷酸缓冲液中染色,待深棕色的酶带完全显现后,再经过固定等,直接将凝胶进行光密度扫描,根据各酶带吸收峰的高度即可测出酶活性的相对变化。     

用荧光染料直接标记凝胶照相底片

用荧光染料直接标记凝胶照相底片核酸样品经凝胶电泳、ＥＢ染色后可在紫外灯下照相保存。为在照片上记下实验时间、内容,可用吖啶橙作“墨水”来做。将电泳后的凝胶放在紫外透射反射仪上,用３Ｍ厚的滤纸小心吸干凝胶表面残留的缓冲液,盖上一层塑料薄膜。取一块大小适合...     

实验2 回收DNA限制性酶切片段

一、琼脂糖凝胶电泳洗脱回收 1.DNA经限制性内切酶消化后,琼脂糖凝胶电泳。在紫外灯下检测确定需要回收的DNA条带,用刀片将含此条带的凝胶切下。 2.透析袋里装满电泳缓冲液,将切下的凝胶条块装入透析袋,挤出多余的缓冲液,袋里只留下少量缓冲液且无气泡。 3.让透析袋里的凝胶切断面同电流方向垂直。透     

鲫鱼不同组织过氧化氢酶同工酶活性的比较

对鲫鱼的心、鳃、肉、卵四种组织进行聚丙烯酰胺凝胶电泳并用KMnO4 法染色 (定性 ) ,同时与FeCl3-K3Fe(CN) 6 系统法进行对照 ,发现两种染色法得到的酶带具有一致性。然后用钼酸铵比色法测定四种组织中过氧化氢酶的活性 (定量 ) ,发现四种组织中过氧化氢酶的活性大小依次为 :心 >卵 >鳃 >肉。     

抗氧化型枯草杆菌碱性蛋白酶高产工程菌的构建：I.抗氧化型碱性蛋白…

枯草芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓＳｕｂｔｉｌｉｓ）Ｂ１３５工程菌能产生抗氧化型碱性蛋白酶,粗酶经硫酸铵分级沉淀,ＣＭ－５２层析,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００层析,得到凝胶电泳均一样品,比活达到１７００Ｕ／ｍｇ,是粗酶比活的７．６９倍,该酶在６０℃时酶活力是最高,最适ｐＨ为１０．２在５０℃时,温浴１０ｍｉｎ后,酶活降低到原来的５０％,该酶受１ＭＨ２Ｏ３作用２０ｍｉｎ,仍保持９６％的酶活。     

幼年和成年小白鼠LDH与SOD动态变化的电泳分析

采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分析方法,研究了幼年鼠和成年鼠睾丸乳酸脱氢酶(LDH)同工酶与超氧化物歧化酶(SOD)的酶带变化.观察结果表明,成年鼠睾丸的凝胶电泳胶条,多数显现六种LDH同功酶带,其中LDH\-5和LDH\-4占优势,LDH\-1\,LDH\-2\,LDH\-3显带较弱,在正极端LDH的下面是第6条酶带,相当于C亚单位(LDH\-c)的C\-4.幼年鼠睾丸的凝胶电泳胶条,只显现LDH\-1和LDH\-2两条同功酶带,以LDH\-1占优势.酶谱的变化说明,幼年鼠睾丸的LDH同功酶是以B基因表达为主,成年鼠睾丸的LDH同功酶则转变成以A基因表达为主.LDH\-c酶带的出现,表明成年鼠睾丸还有C基因的表达.睾丸SOD活性带变化提示,成年鼠睾丸的SOD带活性强于幼年鼠的活性,这与成年鼠睾丸的SOD不断地清除超氧化物自由基对精子发生过程的损伤有关.     

圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化和特性

圆弧青霉突变株ＰＧ３７ 发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５ ２００ ｕ 的碱性脂肪酶, 纯化倍数１６ ．５ , 得率３３．２％ , 在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）上均呈现单一蛋白质条带。ＳＤＳＰＡＧＥ 和凝胶过滤分别测得酶的分子量为２７．５ ｋＤ和２９ ｋＤ, 表明该酶以单体形式存在。Ｎ末端１０ 个氨基酸的序列测定结果为ＡＴＡＤＡＡＡＦＰＤ, 与已知的碱性脂肪酶的Ｎ 末端序列没有同源性。酶学特性研究结果表明, 该酶的最适作用温度为２５ ℃, 在３０ ℃以下稳定,４０ ℃处理２０ ｍｉｎ 仅残留３０ ％ 酶活性;ｐＨ 稳定范围在６．５～１０．５ , 最适ｐＨ 为１０ ．０ 。低浓度的碱性蛋白酶对ＰＧ３７ 碱性脂肪酶活性的影响较小, 可同时添加在洗涤剂中。     

以小麦叶片壶氧化物酶同工酶p16．1酶带为生化标记研究小麦在各生长期对白粉病的敏感性

小麦白粉病以其多发性、普通性成为世界各地小麦生产的主要病害之一。在研究抗病品种对白粉病菌侵染的抗病机理中,采用等电聚焦凝胶电泳技术对抗、感白粉病小麦品种的叶片过氧化物酶同工酶酶谱进行的比较发现：两者的p16．1酶带（位于等电聚焦凝胶电泳酶谱p16．1）从拔节期至田间发病期之间的表现水平有很大差别。可以将其视为区别抗、感白粉病品种的特征性酶带。实验采用功能叶片（Fig.1),对50个小麦品种品系、抗、感病品种间4个组合的正反交F1代、119株F2代、65株抗病品种／感病品种／／感病品种的回交一代（BC1）材料,在pH5－8范围内进行过氧化酶同工酶的等电聚焦凝胶电泳分离。胶片于联苯胺染色液中显色。抗病品种中,p16．1酶带在小麦全生育期均有较强的活性,染色后着色深,多属一级酶带;感病品种中,p16．1酶带在拔节之间变得模糊不清、甚至消失踪迹,多为三级、零级酶带;然而、感染白粉病之后酶活性重新表现,并再次回升为一、二级酶带（Tab.1)。此结果在五年年份中均能很好地重复（Tab.2)。抗、感病品种间正反交F1代的p16．1酶带均正常（Fig.2),证明：p16．1酶带的活性是核基因的表达行为。进而在拔节期至发病期,分析抗、感病品种的杂交F2代,p16.1处为一级酶带者与其它类型之间的比值为3：1;而在抗病品种／感病品种／／感病品种的回交一代中,两者比例为1：1。表明：p16.1酶带由一单基因编码。由此推断：感病品种的p16．1酶带在拔节期至发病期还受到一隐性调控基因的影响,造成酶活性降低或丧失。     

菜心叶片中乙醇酸氧化酶的多种组分

乙醇酸氧化酶（EC．1．1．3．1,GO）是光呼吸中的关键酶,过去对其电泳行为和等电点的报告互不一致。Grodzinski和Col－man（1972）将菠菜、烟草等植物部分纯化的GO酶液在pH8．3的聚丙烯酰胺凝胶中电泳,活性染色后出现两条活性带,两者对FMN的依赖性有一定差异。Kerr和Groves（1975）对豌豆叶片部分纯化的GO酶液进行等电聚焦电泳,表明其pI值大于9．6.Behrends等（1982）将绿色黄瓜子叶的酶液经聚焦层析,发现GO活性分布在pH8．7附近。但Nishimura等（1983）发现在pH8．9的凝胶中南瓜子叶GO不迁移,而在pH4．5的凝胶中则出现一…     

人胃液乳酸脱氢酶同工酶定量电泳测定方法

本文介绍一个琼脂糖凝胶电泳定量测定胃液乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的简易方法。包括一个灵敏的染色程序和光密度扫描,或洗脱比色。并完全适用于血清和组织抽提液中LDH同工酶分析。血清和组织提取液LDH同工酶的分离检测,最初用淀粉凝胶和琼脂凝胶电泳,四氮唑蓝(NBT)染色,以后用醋酸纤维薄膜电泳1961年提出的琼脂糖凝胶电泳,优于纸电泳和琼脂电泳的是:(1)无吸附作用,(2)含荷电基团少,电     

小鼠腹水型肝癌H22a细胞浆胞内磷蛋白磷酸酶的纯化和性质

 磷蛋白磷酸酶是磷酸化/脱磷酸化作用中重要的调节酶。本文建立了小鼠腹水型肝癌细胞胞浆内磷蛋白磷酸酶(PrP)的纯化方法。用~(32)P-酪蛋白为底物测定活力。经纯化的酶纯度提高1380倍,聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳检查,只有一条泳带。用凝胶过滤法和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法测得该酶分子量为200,000。该酶催化~(32)P-酪蛋白脱磷酸化反应的最适pH7.2,对热不稳定。