基因组研究中全长cDNA克隆的策略

全长ｃＤＮＡ的克隆是上前人类基因组研究中的一个重要方面,与大规模基因组测序相比较,ｃＤＮＡ测序克隆用相对较少费用获得更多的功能基因信息,故也是符合我国国情的基因组研究的主要方向。如何更加高交地获得新的全长ｃＤＮＡ,本文结合作者工作中的经验,对从全长文库的建立到全长ｃＤＮＡ的测序及克隆方法作了较为详细的介绍。     

文摘

010 0 51炭疽杆菌水肿因子基因的克隆与序列测定 [中 ]/袁斌… / /生物技术通讯 .- 2 0 0 0 ,11( 4 ) .- 2 4 9～ 2 51采用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)从炭疽芽孢杆菌减毒株Ｙｂ1中扩增其水肿因子 (ＥＦ)的编码区基因 ,将其克隆至ｐＧＥＭ -Ｔ载体中 ,并分步测定其序列。序列测定表明 ,该基因长 2 30 1ｂｐ ,编码 2 67个氨基酸 ,与已报道的Ｓｔｅｒｎｅ标准株的ＥＦ基因完全一致。 (紫玉 )0 10 0 52人骨形态发生蛋白 - 7全长ｃＤＮＡ的克隆及序列测定 [中 ]/饶亚兰… / /生物技术通讯 .- 2 0 0 0 ,11( 4 ).- 2 52～ 2 53从人胎儿肾中提取总ＲＮＡ…     

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00 0 0 90人ｒｅｔｉｃｕｌｏｎ 4ｃ(ＲＴＮ4ｃ)的ｃＤＮＡ克隆与组织表达谱分析 [中 ]/毕安定…∥科学通报 .- 2 0 0 0 ,4 5( 9) .-960～ 967ＲＴＮｓ(ｒｅｔｉｃｕｌｏｎｓ)是一个与神经内分泌细胞生长、分化有关联的基因家族 ,迄今已发现了ＲＴＮ1,ＲＴＮ2和ＲＴＮ3等 3个成员 ,其中ＲＴＮ1和ＲＴＮ 2已被证明分别具有 3种不同长度的转录本。以一个与小细胞肺癌发病机制有关的ＲＴＮ1ｃｃＤＮＡ为信息探针 ,通过电子杂交辅助的新基因克隆技术 ,从人脑ｃＤＮＡ文库中分离到一个长 1677ｂｐ的ｃＤＮＡ ,它含有一个编码 199个氨基酸残基的完…     

文摘

00 0 111生物信息学技术克隆人类神经髓鞘蛋白零家族基因 [中 ]/唐冬生…∥生物化学与生物物理学报 .- 2 0 0 0 ,32 (4 ) .- 36 4～36 8为克隆新的髓鞘蛋白相关基因 ,将ＭＰＺ基因编码区ｃＤＮＡ序列与ＥＳＴ数据库进行同源性比较 ,得到与ＭＰＺ显著相似的 2个ＥＳＴ ,构建成 80 1ｂｐ的重叠群。此重叠群与定位在 1ｑ2 4的 12 8ｋｂｇＤＮＡ的相似性为 10 0 %。计算机分析表明 80 1ｂｐ的重叠群可能存在一个 435ｂｐ的阅读框架。在重叠群上设计两个引物与文库载体臂上的引物配对 ,扩增各种ｃＤＮＡ文库ＤＮＡ作巢式ＰＣＲ。在所得ｃＤＮＡ上…     

基因组研究中全长cDNA克隆的策略

全长cDNA的克隆是目前人类基因组研究中的一个重要方面,与大规模基因组测序相比较,cDNA测序克隆用相对较少费用获得更多的功能基因信息,故也是符合我国国情的基因组研究的主要方向。如何更加高效地获得新的全长cDNA,本文结合作者自己工作中的经验,对从全长文库的建立到全长cDNA的测序及克隆方法作了较为详细的介绍。     

微生物基因组研究及其对生命科学的影响

微生物基因组研究是人类基因组计划 (ＨＧＰ)的一部分 ,主要含有以下三类[1 ] :人类基因组计划中的“模式生物”(ｍｏｄｅｌｏｒｇａｎｉｓｍ) ,即重要病原微生物和对阐明生物学基本问题有价值的微生物。自 1 995年流感嗜血杆菌 (Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ)的全基因组序列完成以来 ,微生物基因组研究范围不断扩大 ,目前已达 1 0 0多项 (ｈｔｔｐ ://ｗｗｗ .ｔｉｇｒ.ｏｒｇ,1 999/5/1 9) ,已完成测序的微生物 2 5个 ,其中 1 9个已发表。微生物基因组研究对人基因组计划及微生物学 ,甚至整个生命科学都产生了巨大影响。1…     

动物细胞培养及单克隆抗体

962115 对CD3-专性单克隆抗体进行PCR克隆和定序[英]/Thirion, S.…//Immunogenetics. -1995, 43(3).-167～168[译自DBA,1996,15(7),96-03879] 使被免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了CD3-专性单克隆抗体。从总RNA开始,从产抗CD3抗体的杂交瘤中制备cDNA。分离了     

植物细胞、组织及原生质体培养

961702 不同浓度的赤霉素和激动素对马铃薯离体块茎形成的影响[英]/Kefi,s.…//Hortscience.-1995,30(4).-752[译自DBA,1996,15(2),96-00946] 为了测定单一的或组合的赤霉素(GA3)和激动素浓度对马铃薯离体块茎形成的影响,在补加6％蔗糖的MS培养基中包括了3种浓度(0、2和5ml/l)     

疫苗

961792 脑膜炎奈瑟氏球菌P64k外膜蛋白的克隆、表达及鉴别[英]/Guillen, G.…//Biotechnol.Apl.-1995,12(2).-72[译自DBA,1995,14(25),95-15046] 从构建于载体EMBL-3中的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株B385基因组文库中分离出编码高分子量蛋     

植物遗传工程

961449 葡萄多酚氧化酶的分子分析及PPO表达的反义介导抑制的研究[英]/Martinez,M.V.…//Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1995,209Meet.,Pt.1.-AGF022[译自DBA,1995,14(22),95-13271] 降低多酚氧化酶(PPO)表达的新方法是通过导入反义PPO基因构建物产生葡萄转基因植株。克隆并测序的红色葡萄品种中的PPO基因,并利用葡萄     

植物学通报2002年19卷关键词索引总目次(括号内为页码)

数字或英文3’ｃＤＮＡ末端 (5 84)ＡＦＬＰ (4 4 4)ＡＦＬＰ分析 (1 94)ＡＭ菌根 (4 62 )ＡＴＰ酶 (5 88)α 淀粉酶 (63 )ＣＨＳ (2 65 )ＣＯＰ1 (62 0 )ＤＮＡ甲基化 (3 74)Ｆｉｂｅｒ ＦＩＳＨ技术 (3 5 9)ＦＬＣ (4 0 6)ＧＡ12 ＿醛 (1 3 7)ＧＡｓ (63 )ＧＡ信号传导 (1 3 7)Ｈ ＿ＡＴＰａｓｅ (1 84)ＩＴＳ (698)ＭＡＤＳ＿ｂｏｘ基因 (1 5 0 )ｍＲＮＡ (1 0 3 )ＰＬＤ (1 5 6)ＰＣＲ产物克隆测序 (698)ＰＣＲ产物直接测序 (698)ＲＡＰＤ (2 0 1 ) (4 5 2 )ＲＮＡｉ (4 91 )Ｒｉ质粒 (65 0 )ｒｏｌ基因 (65 0 )ＳＳＲ标记 (4 4 )中文一…     

抗生素和干扰素

960987 四环素氯化基因的克隆和核苷酸序列[英]/Dairi,T.…//Biosci. Biotechnol.Biochem.-1995,59(6).-1099～1106[译自DBA,1995,14(17),95-10056] 分离出2个含有特殊类型自身防御基因的粘粒克隆,该基因来自产6-脱甲基金霉素的金霉素链霉菌NRRL 3203。将冷冻的原菌丝体接种到4ml的     

基因工程

<正> 854681 一个简单而有效的载体-引物 cDN-A 克隆体系[英]/Alexander,D.C.…//Gene.-1984,31(1～3).-79～89[译白DBA,1985,4(4),85-01574]经修正的 Okayama 和 Berg 的载体-引物     

动物遗传工程

961945 作为药理学工具的转基因动物[英]/Buerki,K.…//Adv.Drug Res.-1995,26.-143～177[译自DBA,1995,14(24),95-14457] 综述内容如下:(1)产生遗传改良动物的方法;(2)获得功能模型,如点突变或克隆序列的定向插入,cre/lox-介导的基因或转基因的活化;(3)丧失功能模式,如反义RNA、核酶或显性阴性突变的表达、     

激素和活性多肽

<正> 852871大鼠脾β-4胸腺素(一种可能的胸腺激素)互补D N A的克隆及序列分析[英]/Wodnar Filipowicz,A.…//Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.-1984,81(8).-2295～2297[译自D B A , 1984,3(16),84-07556]用互补DNA的分子克隆已确立了大鼠脾β-4胸腺素的mRNA可翻译部分的序列,     

疫苗

910844 用甲基营养的多形汉森酵母合成和分泌乙型肝炎中表面抗原[英]/Shen,s.H.…// Gene.-1989,84(2).-303～309[译自DBA,1990,9(15),90-08731]应用甲基营养的多形汉森酵母(Hansenula polymorpa)作生产和分泌异源蛋白的寄主,克隆了乙肝病毒中表面抗原(preS2-HBsAg)基因,该基因在甲醇氧化酶基因的甲醇调节启动子控制下表达.     

MCP-1结构与功能的分子基础

ＭＣＰ 1 (ｍｏｎｏｃｙｔｅｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ 1 )是第一个被克隆鉴定的ＣＣ家族趋化因子 ,最早的研究起源于Ｃｏｃｈｒａｎ等[1] 报道的小鼠基因ＪＥ ,该基因从经血小板衍生因子 (ＰＤＧＦ)刺激的成纤维细胞中克隆 ,编码的蛋白质具有趋化白细胞功能。 1 989年 ,Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ等[2 ]从神经胶质瘤系Ｕ 1 0 5ＭＧ筛到一ｃＤＮＡ克隆 ,其核苷酸和氨基酸序列与鼠ＪＥ同源 ,命名为ＭＣＰ 1。同年Ｆｕｒｕｔａｎｉ[3] 和Ｒｏｂｉｎｓｏｎ[4] 亦报道相同的趋化因子 ,分别命名为ＭＣＡＦ(ｈｕ ｍａｎｍｏｎｏｃｙ…     

栖热菌属热稳定DNA聚合酶

ＤＮＡ聚合酶是能够以ＤＮＡ或ＲＮＡ为模板 ,在寡核苷酸或蛋白质引物的引导下催化合成ＤＮＡ的一类酶 ,已经分离纯化的有上百种 ,其中有半数已经被克隆和测序。它们之间在ＤＮＡ序列、氨基酸序列、二、三级结构方面有较高的同源性 ,且与ＲＮＡ聚合酶和反转录酶之间也有不同程度的同源性[1～ 4] 。1　ＤＮＡ聚合酶的分类ＤＮＡ聚合酶有许多不同的类群 ,如很小的 (3 9ｋＤａ) ,来自哺乳动物的修复性单亚基ＤＮＡ聚合酶 ,巨大的 (可高达 90 0ｋＤａ)、多亚基(可达 2 0多个亚基 )的复制性ＤＮＡ聚合酶 (如Ｅｃｏ聚合酶Ⅲ )。有些ＤＮＡ聚合酶则…     

安捷伦科技在微阵列试剂盒中增加人类基因组筛选功能

安捷伦科技日前在其人类ｃＤＮＡ微阵列试剂盒系列中推出第二个试剂盒。这一可以立即使用的试剂盒带有人类基因组筛选功能 ,为发现新药和诊断疾病的研究人员提供了一致的基因组信息。这些新推出的ｃＤＮＡ微阵列基于安捷伦业内领先的喷墨打印微阵列制造技术 ,包含 140 0 0多个扩增子 ,代表着Ｉｎｃｙｔｅ专有的ＨｕｍａｎＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ 1和 2克隆集合中的ｃＤＮＡ。通过新推出的安捷伦Ｈｕｍａｎ 2ｃＤＮＡ微阵列试剂盒 (Ｇ410 1Ａ)和以前的版本(Ｇ410 0Ａ) ,研究人员现在可以分析超过 2 5 0 0 0条人类基因序列的表达。新旧版本保持…