谷胱甘肽硫转移酶基因表达的调控

催化内源性或外源性亲电子化合物与谷胱甘肽(GSH)结合的谷胱甘肽硫转移酶(GST)超基因家族是一族解毒功能蛋白.其基因的表达通过不同的机制受多种物质的调控.根据最近文献资料,对调控谷胱甘肽硫转移酶基因表达的基因结构、调控机制及氧化应激对谷胱甘肽硫转移酶基因表达的调控作用等作一简要综述.     

中华稻蝗谷胱甘肽S-转移酶的分离纯化

采用硫酸铵沉淀法和GSH-agarose亲和层析法,对中华稻蝗Oxya chinensis(Thunberg)5龄若虫谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)进行了分离纯化.结果表明:经硫酸铵沉淀,饱和度在60%-80%下沉淀中GSTs比活力较高,饱和度90%时比活力达到最高...     

Biological activities of purified harpin(Xoo) and harpin(Xoo) detection in transgenic plants using its polyclonal antibody

Many harpins have been found in plant pathogen bacteria that can elicit disease and insect resistance in plants, and promote plant growth. In this work, we overexpressed and purified Xanthomonas oryzae pv. oryzae harpin, harpinxoo, in Escherichia coli BL21/pGEX-hpa1. Harpinxoo was fused to the Cterminus of glutathione S-transferase （GST） and purified using the Bulk GST purification module and thrombin cleavage capture kit. Purified harpinxoo protein was sensitive to protease K and stable to heat treatment, and could not induce a hypersensitive response after treatment with various plant metabolic inhibitors; these characteristics were similar to harpinEa of Erwinia amylovora. The purified harpinxoo showed a similar ability to induce tobacco mosaic virus resistance in tobacco as harpinEa. Its antibody worked well in detecting the purified harpinxoo, harpinxoo in the total protein of E. coli BL21/pGEX-hpa1 and an hpal transgenic rice.     

东亚飞蝗谷胱甘肽S-转移酶RNA干扰效率研究

东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis(Meyen)是我国主要的农业害虫之一,已发现东亚飞蝗对某些农药产生了抗性,其抗性机制可能与谷胱甘肽硫转移酶(GST)代谢解毒相关.本研究利用特异性引物合成东亚飞蝗GST 4个不同家族基因的双链RNA(dsRNA),将dsRNA注射到东亚飞蝗幼虫体内,采...     

谷胱甘肽S-转移酶的诱导表达及提纯

含有日本血吸虫谷胱甘肽S -转移酶基因的质粒 pGEX - 5X - 1在大肠杆菌BL2 1 (DE3)菌株中得到表达。 37℃[1 ]下用 1 %乳糖诱导谷胱甘肽S -转移酶 (GST)的最适表达时间为 3h。盐析粗提酶液并以Habig法[2 ] 监测GST的活性 ,用pH6 .0 ,饱和度为 30 %硫酸铵去除杂蛋白 ,并调 pH7.5 ,饱和度 70 %硫酸铵使GST大量析出并保持活性。用透析法脱盐 ,并用Sephadex -G5 0凝胶对GST进行了初步纯化。初步探讨了GST的保存方法     

亚洲小车蝗痘病毒与化学杀虫剂混用的杀虫效果及对寄主主要解毒酶活性的影响

亚洲小车蝗痘病毒（Oedaleus asiaticus entomopoxvirus, OaEPV）作为一种增效剂,分别与马拉硫磷、毒死蜱、高效氯氰菊酯、氟氯氰菊酯 、溴氰菊酯化学杀虫剂混合饲喂亚洲小车蝗若虫,统计致死中浓度 LC₅₀ 和其混合使用后的增效比;测定虫体内与抗性有关的两种重要酶——羧酸酯酶（CarE）和谷胱甘肽 S-转移酶（GSTs）的比活力。结果表明：OaEPV 与化学杀虫剂混合饲喂亚洲小车蝗,OaEPV 与毒死蜱 、高效氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯混用对亚洲小车蝗无明显的增效作用,OaEPV 与马拉硫磷混用,具有一定的增效作用,增效比为 1.42 倍。混剂感染亚洲小车蝗,除与溴氰菊酯混用外,虫体的中肠部位 CarE 的比活力都受到了明显的抑制作用,其中 OaEPV 与马拉硫磷混用下降了 4.21 倍,抑制作用最大。当 OaEPV 与氟氯氰菊酯、溴氰菊酯化学杀虫剂混用后,中肠部位 GSTs 受到了明显的抑制作用,而其脂肪体部位 CarE 和 GSTs 的变化无一定的规律性。结果提示痘病毒与农药混合处理时,病毒主要通过抑制中肠部位 CarE 比活力而增加了农药的杀虫效果。     

支气管哮喘遗传因子研究

研究谷胱甘肽-S-转移酶 （glutathione S-transferase, GST）M1和T1基因多态性与支气管哮喘（asthma bronchial）的关系。采取聚合酶链反应对60名支气管哮喘患者和60名正常对照进行了GSTM1和GSTT1基因非缺失（+）和缺失（0）等位基因分布频率研究。结果表明,与对照组相比,支气管哮喘患者GSTM1基因缺失的纯合子（0/0）频率（81.2%）显著升高（χ2=32.46,P<0.001;wχ2=28.75,P<0.001）。对于GSTT1也得到类似资料。而支气管哮喘患者GSTT1基因缺失等位基因（0/0）频率（71.7%）比对照组（11.7%）显著升高（χ2=26.72,P<0.001;wχ2=35.75,P<0.001）。表明GSTM1、GSTT1缺失等位基因纯合性在哮喘患者中最有特征性的。GSTM1 0/0、GSTT1 0/0结合的频率患者组为61.7%,对照组仅为1.7%（χ2=27.3,P<0.001）。提示GSTM1和GSTT1基因多态性与哮喘有显著性关联,两个基因的突变可以被视为发生支气管哮喘遗传风险因子。     

RNAi分析舞毒蛾谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因对黄酮和槲皮素胁迫响应

为了明确舞毒蛾Lymantria dispar谷胱甘肽S-转移酶家族基因对生长发育影响及对次生物质的响应机制,采用RNAi技术分别沉默LdGSTe2、LdGSTs1、LdGSTs2和LdGSTz1基因,分析对舞毒蛾3龄幼虫体重、存活率、营养利用等生理指标的影响以及次生物质黄酮和槲皮素胁迫响应.结果表明,dsRNA可有效抑制LdGSTe2、LdGSTs1、LdGSTs2和LdGSTz1基因表达,分别注射dsLdGSTe2、dsLdGSTs1、dsLdGSTs2和dsLdGSTz1处理组舞毒蛾幼虫的相对生长率、相对取食量、食物利用率、食物转化率均低于对照组,但对幼虫的存活率无影响,表明LdGSTe2、LdGSTs1、LdGSTs2和LdGSTz1影响舞毒蛾幼虫生长发育;次生物质黄酮和槲皮素胁迫下,沉默LdGSTe2、LdGSTs1、LdGSTs2和LdGSTz1后舞毒蛾幼虫存活率显著下降,体重显著降低.沉默LdGSTe2、LdGSTs1、LdGSTs2和LdGSTz1基因对舞毒蛾幼虫的生长发育、食物利用具有抑制作用,同时影响了舞毒蛾幼虫对黄酮和槲皮素的适应能力.     

Effects of cyclic 12-, 8-, and 6-carbon compounds on glutathione S-transferase activity

The effects of feeding $\text{ICR}\text{Ha}$ mice cyclic 12-, 8-, and 6-carbon compounds on glutathione S-transferase (GST) activity in the liver, intestinal mucosa, and the forestomach were determined. The compounds used for this study were 1,5,9-trans,trans,cis-cyclododecatriene, 1,2-trans-5,6-trans-9,10-cis-cyclododecatriene-1,2-oxide, cyclododecanol, cyclododecene oxide, cyclododecane, 1,5-cyclooctadiene, cyclooctene oxide, cyclohexene, and cyclohexene oxide. The unsaturated cyclic 12-carbon compounds elicited the greatest increase in GST activity. Thus, feeding 1,5,9-trans,trans,cis-cyclododecatriene increased this activity almost 4-fold in the livers and the intestinal mucosa of experimental animals. Cyclic 8-carbon compounds were less effective and feeding the cyclic 6-carbon compounds did not result in any significant increase in GST activity. None of the compounds elicited increased GST activity in the fore-stomach. Previous studies have shown that compounds inducing increased GST activity can protect against chemical carcinogens. It remains to be determined whether the compounds identified in the present investigation as inducers of this enzyme system will have such protective capacities.     

紫外线强烈诱导的谷胱甘肽转移酶基因的功能鉴定

植物谷胱甘肽转移酶（glutathione S-transferases,GSTs)基因家族在逆境反应和植物生长发育过程中都起着非常重要的作用。为了阐明GST在紫外辐射下是否对植物有保护作用,以紫外强烈诱导表达的GST、cDNA为探针,筛选拟南芥cDNA文库,获得了这种GST的全长cDNA;利用此cDNA构建植物表达载体,并通过农杆菌介导法转化拟南芬,使其在拟南芥中得到大量表达;通过对转基因植株的紫外辐射耐性分析,证实了该GST的过量表达可明显增强拟南芥对紫外辐射损伤作用的耐受性。     

昆虫谷胱甘肽S-转移酶蛋白纯化技术研究

昆虫谷胱甘肽S-转移酶蛋白纯化的主要方法是沉淀法、层析法和电泳法。沉淀法是在进行柱层析前常使用的一种方法,但是其纯化倍数较低。层析法纯化倍数较高,但其费用也较高。电泳通常是作为一种辅助方法来使用。利用这些方法,谷胱甘肽S-转移酶蛋白最高纯化倍数为1138倍(马素永等利用层析法和电泳法对亚洲玉米螟谷胱甘肽S-转移酶蛋白进行纯化)。文章讨论了昆虫谷胱甘肽S-转移酶蛋白纯化研究的应用。     

融合蛋白GST-Ulp1p在大肠杆菌中的高效可溶性表达及其活性鉴定

利用基因工程技术,体外重组小分子类泛素修饰蛋白酶1(Ulp1)的活性片段,获得高表达、高特异性重组蛋白酶。从酿酒酵母Saccharomyces cerevisia中提取Ulp1编码第403到621个氨基酸残基之间的DNA片段(Ulp1p),在其C端加入6×His并连接到大肠杆菌表达载体pGEX中,构建重组表达质粒pGEX-Ulp1p-his6。将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,氨苄青霉素抗性筛选转化子。表达、纯化后,以SUMO融合蛋白检测其活性。经过优化,该蛋白可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的40.12%。可通过谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱或Ni-NTA凝胶亲和层析纯化得到纯度98%的蛋白。经酶切分析,比活力为1.375×104U/mg。融合蛋白GST-Ulp1p-His6无需切除谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签,具有很高的活性,制备简易;6×His标签,有利于底物蛋白切割后纯化,减少蛋白损失。本研究为制备高活力的SUMO蛋白酶提供了一个新方法。     

Robust multi-type plasmid modifications based on isothermal in vitro recombination

A robust strategy for multi-type plasmid modifications is developed based on the isothermal in vitro recombination technology, by which any combination of the sequence modifications can be efficiently achieved in plasmids at any desired position in a seamless manner. As an example, we showed that a plasmid modification with insertion of a GFP gene, deletion of a 623-bp fragment, and substitution of an ampicillin resistance gene by a kanamycin resistance gene was accomplished simultaneously by this method. Therefore, the isothermal in vitro recombination-based multi-type plasmid modification strategy is a useful approach for broad application prospects in molecular biology studies.     

飞蝗谷胱甘肽S-转移酶基因克隆、 序列分析及表达特征

谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase, GST）是一类广泛分布的多功能超家族酶系, 其中Omega家族GST在昆虫体内担负重要生理功能。为探讨飞蝗Locusta migratoria Omega家族GST功能, 利用RT-PCR技术克隆得到1条飞蝗谷胱甘肽S-转移酶Omega家族基因全长cDNA, 命名为LmGSTo1 （GenBank登录号： JQ750592）。该基因开放阅读框长738 bp, 编码245个氨基酸。该酶含有N-端和C-端2个结构域, N-端结构域由5个β-折叠和3个α螺旋组成, 包括4个GSH结合位点; C-端结构域由8个α螺旋组成, 含有5个底物结合位点。Real-time PCR结果表明, LmGSTo1在飞蝗不同龄期均有表达, 在胃盲囊和中肠表达量较低, 在前肠、马氏管、肌肉和脂肪体表达量较高; 溴氰菊酯处理可导致LmGSTo1表达水平显著下降。这些结果为进一步研究LmGSTo1基因功能提供了依据。