商品化冷冻干燥型甲型肝炎疫苗

就厚生省的计划,化学及血清疗法研究所、生研和千叶县血清研究所进行合作开发,最近已商品化1994年10月得到制造承认的甲型肝炎疫苗。在欧美商品化了美国Smithkline Beecham公司开发的灭活的甲型肝炎疫苗"Havrix".但在日本的甲型肝炎疫苗的商品化是第一个。冷冻干燥型也是世界首例。     

一种甲型肝炎灭活疫苗灭活验证试验方法的建立

目的探讨细胞培养/链特异性RT-PCR方法可否作为甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗(L-A-1减毒株)的病毒灭活验证试验方法。方法根据甲肝病毒(HAV)L-A-1株基因组序列,设计5条基因特异性引物,提取HAV基因组RNA,应用设计的正向引物进行反转录,再进行两轮PCR扩增,通过检测HAV复制过程中的负链中间体,对甲肝灭活疫苗灭活验证试验方法进行探讨,并与《中华人民共和国药典》甲肝灭活疫苗HAV灭活验证试验方法进行比较。结果细胞培养/链特异性RT-PCR方法对HAV负链RNA特异、敏感。通过方法学验证试验表明,该方法的特异性、敏感性和重复性均良好。利用此方法对5批甲肝灭活疫苗(L-A-1减毒株)进行检测,结果全为阴性,与《中华人民共和国药典》甲肝灭活疫苗HAV灭活验证试验测定结果相同。结论细胞培养/链特异性RT-PCR方法快速、灵敏可靠,可作为检测甲肝灭活疫苗(L-A-1减毒株)HAV灭活验证试验的方法。     

冻干甲型肝炎减毒活疫苗的研制

研制冻干甲肝减毒活疫苗,提高疫苗的稳定性,便于保存及运输,保证疫苗的接种效果.采用CA-9冻干保护剂,按13.5的比例加入疫苗,制备冻干疫苗.冻干甲肝减毒活疫苗具有与液体疫苗相同的安全性及免疫原性.在2～8℃保存的有效期较液体疫苗的3～5个月提高到18个月.在室温和37℃保存的稳定性也明显提高.冻干甲肝减毒活疫苗的稳定性良好,无需低温保存、冷链运输,便于甲肝疫苗的大规模推广应用.     

血源乙型肝炎疫苗的效力稳定性试验研究

对保存温度分别为３７℃、２－８℃、１８－２２℃,保存时间分别为１年、１．５年、２．５年的血源乙型肝炎疫苗进行了效力稳定性试验。结果表明,３７℃保存４周经效力测试已无活性存在,而２－８℃、１８－２２℃保存１年、１．５年、２．５年的疫苗经效力试验测定,２－８℃试ＥＤ５０／参ＥＤ５０比值可达１．０５－２．７４,２．５年后比值仍可达１．０５－１．６７,保持在合格限以上。但１８－２２℃试ＥＤ５０／参ＥＤ５０比值为０．７８－１．５２,其活性已下降。试验结果表明血源乙型肝炎疫苗在２－８℃保存的疫苗稳定性良好,其有效期至少在２．５年以上。     

在美国获批准的首例甲型肝炎疫苗

美国食品与药物管理局(FDA)已批准Smithkline Beecham plc(Philadelphia,PA)公司销售它的Havrix甲型肝炎疫苗,使Havrix成为首先在美国出售的抗甲肝疫苗。该公司于1992年为此药物提交了一份产品许可申请,FDA顾问委员会去年作的评审。目前,出售该疫苗的国家有40多个;英国是三年前批准该产品的。     

精制甲型肝炎灭活疫苗的狨猴保护实验

目的　检测精制甲型肝炎 (甲肝 )灭活疫苗的保护效果。方法　甲型肝炎病毒 (YN5株 )经Vero细胞培养制成精制甲肝灭活疫苗 ,采用普通狨猴进行疫苗的免疫原性和保护性研究。结果　 7只狨猴均有特异性抗体产生 ,无血清酶活性升高和肝组织学病理改变 ,接种疫苗的狨猴能抵抗甲肝病毒强毒 (Han ZD)株的攻击。但是 ,对照组狨猴均出现血清酶异常升高和肝组织学病理改变。结论　甲肝灭活疫苗 (YN5株 )具有良好的免疫原性和保护效果。     

动态浊度法检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗细菌内毒素含量的研究

探讨动态浊度法检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗细菌内毒素含量的可行性。参照《中国药典》2015年版通则1143细菌内毒素检测法中动态浊度法,对甲肝疫苗进行标准曲线可靠性试验、干扰初筛试验、干扰验证试验及内毒素含量的测定,同时与经凝胶法检定合格的同批疫苗进行比较。标准曲线可靠性试验结果符合规定。干扰初筛试验疫苗稀释160、320及640倍,回收率在50%~200%之间,均无干扰,符合要求。干扰验证试验结果进一步表明:疫苗稀释160倍对试验无干扰作用。采用动态浊度法检测的10批甲肝疫苗细菌内毒素含量均小于该疫苗的限值L=20 EU/m L,且与经凝胶法检定的同批疫苗结果一致。采用动态浊度法检测甲肝疫苗细菌内毒素含量是可行的,值得推广应用。     

甲型肝炎病毒Vero细胞适应株的选育研究

将甲肝患者粪便中分离的甲型肝炎病毒在Vero细胞中进行适应性培养 ,选育高滴度适应株应用于甲肝灭活疫苗研究。在Vero细胞上连续传代 ,测抗原滴度和感染性滴度 ,满意后按WHO推荐的甲型肝炎灭活疫苗规程进行灭活疫苗试制研究。经Vero细胞 14次适应性传代后 ,病毒抗原滴度可高达 1∶2 5 6 0 ,感染性滴度为 8.2 3LogC CID50 /ml。试制的灭活疫苗HPSEC检测在 2 80nm时仅有一个高峰 ,SDS PAGE电泳 ,在 2 2kD、2 6kD和 33kD处有三条蛋白带 ,和HAVVP3、VP2和VP1的位置相同。ICR小鼠效力试验表明疫苗剂量 16 0 0EU/ml与Merck疫苗5 0U效果相似。通过研究获得了Vero细胞甲肝病毒适应株YN5株 ,初步证明可作为甲型肝炎灭活疫苗的候选毒株。     

甲型肝炎病毒分离及培养特性的研究

应用人胚肺二倍体细胞(2BS)直接从甲肝病人急性期粪便中分离培养出一株甲型肝炎病毒(S_(84=1))。该毒株无致细胞病变作用,具有产量和毒力较高(10~(-6.5～(-7)))繁殖周期短(7天左右)的优点,可作为生产甲型肝炎诊断试剂和研制甲型肝炎疫苗的侯选毒株。     

加热灭活的乙肝疫苗(CLB)的免疫力与安全性

<正>乙肝苗(CLB)是用人血浆纯化的HBsAg制备的,疫苗中残余的乙肝病毒以101—104.5℃加热灭活90秒针,按着以65℃低温巴氏法灭活10小时。疫苗首先在黑猩猩和一定数量的人体中进行广泛的检测。在乙肝病毒(HBV)感染的高危人群男性同性恋中,血液透析工作人员和血液透析患者中,以安慰剂对照双盲法证明CLB疫苗     

用人胚肺二倍体细胞(2BS和SL7)分离甲型肝炎病毒

用我国建株的两株人胚肺二倍体细胞(2BS和SL7),以35℃为培养温度,直接从急性期甲型肝炎(简称甲肝)患者粪便中分离到4株病毒。该病毒在细胞培养上符合甲肝病毒的增殖特性,经免疫荧光阻断、免疫电镜及中和试验等特异性鉴定,证实为甲肝病毒。原始分离时的比较研究还显示,2BS株人二倍体细胞支持甲肝病毒增殖的能力似较SL7细胞佳。该4株病毒现已在2BS细胞稳定传代,感染滴度较高,被用于减毒活疫苗的育种研究。     

应用抗体捕捉聚合酶链反应检测贝类甲型肝炎病毒污染

污染水体中生长的贝类是传播甲型肝炎的重要途径之一,本文介绍了一种抗体捕捉后进行ＰＣＲ扩增来检测贝肉中甲肝病毒的方法,贝肉中ＨＡＶ的浓集回收采用洗脱一沉淀法并加以改进,用脊髓灰质炎病毒作为指示病毒,经二次沉淀后病毒的回收率为２６％,３０克贝肉中的病毒浓集回收在１．０￣１．５ｍｌ上清液中。     

胆囊炎性声像图改变在甲型肝炎诊断中的意义

胆囊壁增厚可由胆囊本身疾病引起，也可由非胆道疾病引起。甲型肝炎早期合并胆囊炎性改变，以往报道不多，而且此种改变往往被误诊为化脓性胆囊炎、胆周炎而延误甲肝的治疗。我院１９９２～１９９６年对住院的７１例甲型肝炎患者早期作肝脏和胆囊Ｂ超检查，发现５０例甲肝...     

甲肝减毒疫苗株选育成功

上海市卫生防疫站与卫生部长春生物制品研究所研究选育成功一种特异性强的甲肝减毒疫珠。先后为500位没有感染过甲型肝炎的健康人接种了这种活疫苗,以预防甲肝病毒感染和发病。经接种后观察,有98％以上的人产生了可长期预防甲肝发病的特异性抗体。此研究在我国甲肝减毒疫苗研究领域中处于国际领先水平。     

许昌市甲型病毒性肝炎疫苗纳入免疫规划后的甲肝流行特征分析

目的分析甲肝疫苗纳入国家免疫规划后的甲肝流行特征,为制定有效控制措施提供科学依据。方法采用描述流行病学方法对2005—2014年许昌市甲肝疫情进行描述,利用SPSS软件对甲肝疫苗纳入国家免疫规划前后流行特征进行对比分析。结果甲肝疫苗纳入国家免疫规划后,甲肝流行强度减弱,发病率下降明显;发病年龄后移,以农民、学生发病为主;无明显季节性分布,农村与城市地区年均发病率无显著差异,以经济和卫生条件差、接种率低的鄢陵县发病最多。结论甲肝疫苗纳入国家免疫规划后,接种率和接种质量迅速提高,甲肝流行病学特征发生明显变化,今后要在规范开展甲肝疫苗常规免疫接种基础上,加强重点人群免疫接种,及时开展疫情监测和风险评估,做好重点地区和人群健康教育,改善工作学习和生活卫生环境,控制局部暴发疫情。     

用蚀斑法进行麻疹疫苗的病毒滴定

按世界银行中国疫苗项目对麻疹疫苗检定的要求,建立了麻疹疫苗病毒滴定的蚀斑方法。以蚀斑法对Ｈｕ１９１株生产的冻干麻疹活疫苗样品进行了测定。结果发现,Ｈｕ１９１株生产的麻疹疫苗在琼脂和甲基纤维素覆盖下所形成的蚀斑大小及形状不同,但滴度无显著性差异;在室温和３７℃吸附的滴度无显著性差异,但细胞在３７℃生长较好;在本实验条件下,蚀斑滴定和ＣＣＩＤ５０测定的滴度呈正相关,蚀斑滴定相对较敏感;采用国产６孔聚苯乙稀培养板,Ｖｅｒｏ细胞单层,在３７℃吸附,用甲基纤维素覆盖,经结晶紫及甲醛固定染色后计数空斑,操作简便易行,结果特异敏感,重复性好,可用于麻疹疫苗病毒滴定     

中国五省市甲型肝炎病毒基因分型的研究

为了解甲型肝炎（甲肝）病毒（ＨＡＶ）在中国几个城市的基因型分布,选择浙江杭州、江苏启东、安徽铜陵、云南昆明和上海市等的甲肝病人粪便标本或血清标本,以逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）扩增合成ＨＡＶ ＶＰ１／２Ａ交接区基因区,并进行直接核苷酸序列分析和差异比较。结果表明,从这些城市甲肝病人分离到的１７株ＨＡＶ株均属基因Ⅰ型,为ＩＡ和ＩＢ亚型;所有ＨＡＶ株间核苷酸差异均小于１５％,但约５０％Ｈ     

防治和根除狂犬病的新途径

灭活的完整狂犬病毒(RV)颗粒是最安全和最有效的抗原,适合用作狂犬病的免疫治疗;灭活RV疫苗,例如HDCV疫苗,仍然是金标准。但是若干种正在研究的实验性疫苗(如以G蛋白为基础的DNA和重组疫苗),也有可能替代灭活病毒。为了达到可与金标准疫苗相当的效力,在这些新型疫苗中的G蛋白必须以与在完整病毒颗粒中相似的方式出现,即是锚定在膜上并有很高的密度。     

AT-2灭活HIV-1病毒及纯化回收鉴定

目的制备具备完整空间构型且纯度在90%以上的灭活HIV-1病毒,用于HIV疫苗研究。方法应用化学制剂2,2’-dithiodipyridine（aldrithiol-2;AT-2）灭活HIV-1病毒,对灭活的病毒超速离心浓缩并洗涤去除灭活用的化学制剂AT-2。采用分子筛技术去除灭活病毒中残存的杂质蛋白质。结果 250μmol/L AT-2与HIV-137℃作用1 h可以彻底灭活病毒的感染性,同时保留病毒的免疫原性。灭活的病毒纯化后检测不到AT-2的残留,检测牛血清蛋白残余量低于50 ng/mL。结论灭活的HIV-1病毒经过纯化后纯度达到95.6%,可以满足作为HIV疫苗研究的免疫刺激剂的使用要求。     

成年志愿者接种冻干甲型肝炎疫苗的临床观察

<正>甲肝在世界大部分地区是常见病,即使在发达国家甲肝仍然是一个严重的问题。当前在日本30岁以下的年怪人,仅1.5％甲肝抗体阳性。年平均约有10万人感染甲肝,20-40岁发病率最高。注射丙种球蛋白只能对甲肝具高危的年轻人作特异性预防,免疫力只能维持4-6个月,而注射甲肝疫苗预期更有效和持久。