白及种质资源及其近缘种的SSR指纹图谱研究

白及(Bletilla striata Rchb.)为中国珍稀濒危药用植物,野生资源枯竭,混伪种繁多。该研究基于SSR标记技术对16个地区48份白及(Bletilla striata Rchb.)样品和4份黄花白及(Bletilla ochracea Schltr.)、4份小白及(Bletilla formosana(Hayata)Schltr.)、4份华白及(Bletilla sinensis(Rolfe)Schltr.)样品进行遗传多样性分析,构建白及种质资源的SSR指纹图谱,并对60份白及样品进行种质资源鉴定,分析白及属种内及其种间的遗传分化特征。结果表明:(1)20对白及SSR引物均能在4个白及属植物中成功扩增,条带清晰且多态性丰富,每对引物的复等位基因数(Na)在4~9之间,等位基因数(Na)总和为127,平均为6.35。(2)筛选出基因型丰富、多态性信息含量(PIC)高的7对白及SSR引物(BJSSR01、BJSSR14、BJSSR15、BJSSR16、BJSSR18、BJSSR19、BJSSR22)构建的白及SSR指纹图谱能将白及属各种质资源清楚分开。(3)白及属在种间水平均有较高的遗传多样性(Na=6.35,I=1.429 1,h=0.706 8),物种间遗传分化强烈(Gst=0.44),物种间的基因流较弱(Nm=0.475 3)。(4)UPGMA聚类分析表明,60份供试样品明显聚为4大支,同一物种的个体首先聚在一起,这与形态学分类基本一致;不同来源地的样品种内和种间的亲缘关系有明显差异,地理距离较近的白及样品具有较近的遗传关系。     

白及假鳞茎薄片诱导不定芽及快繁体系的构建

以白及(Bletilla striata)假鳞茎为外植体,根据上、中、下部位切取薄片,探索假鳞茎不同部位BA、NAA和TDZ对假鳞茎薄片诱导不定芽的影响,比较假鳞茎薄片不同厚度对褐化率和出芽数的影响,采用正交试验,研究了BA和NAA对不定芽增殖的效果,并对组培苗进行壮苗、生根和移栽。结果表明:假鳞茎的部位对诱导不定芽作用极显著,下部的出芽率显著高于上部和中部,BA和TDZ对诱导不定芽作用显著,NAA对诱导不定芽作用不显著。最佳诱导不定芽的方式为假鳞茎下部薄片在基本培养基+2.0 mg·L^-1BA+1.0 mg·L^-1TDZ的培养基上培养4周,出芽率为93.3%,出芽数为15个,厚度为1.6~2.0 mm的假鳞茎薄片其褐化率最低。最佳的增殖培养基为基本培养基+1.5 mg·L^-1BA+0.3 mg·L^-1NAA,增殖系数达4.3,平均苗高为7.8 cm。本研究成功建立了白及假鳞茎薄片诱导芽为关键技术的快繁技术体系,为白及种质资源创新奠定了基础。     

朝天椒的组织培养和植株再生

1　植物名称　朝天椒 (Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)。2　材料类别　下胚轴。3　培养条件　诱导愈伤组织培养基 :(1 )ＭＳ ＮＡＡ 2ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) 6 ＢＡ 0 .1 ;(2 )ＭＳ ＮＡＡ 2 6 ＢＡ 0 .5 ;(3)ＭＳ ＮＡＡ 2 6 ＢＡ 1 ;(4)ＭＳ ＮＡＡ 2 6 ＢＡ 2 ;(5 )ＭＳ ＮＡＡ 0 .1 6 ＢＡ 2 ;(6 )ＭＳ ＮＡＡ 0 .5 6 ＢＡ2 ;(7)ＭＳ ＮＡＡ 1 6 ＢＡ 2。芽分化培养基 :(8)ＭＳ 6 ＢＡ 2 ;(9)ＭＳ ＫＴ 2 ;(1 0 )ＭＳ ＫＴ2 ＮＡＡ 0 .0 2 ;(1 1 )ＭＳ ＫＴ 2 ＮＡＡ 0 .0 2 ＰＰ3330 .1。生根培养…     

三叶半夏种质资源扩繁及保存研究*

目的:通过对三叶半夏扩繁和保存方法的研究,为三叶半夏种质资源的保育和开发利用提供技术支撑。方法: 首先,通过灭菌条件筛选、愈伤诱导及丛生芽诱导等进行扩繁条件探索;其次,通过设置不同基本培养基、蔗糖浓度、不同温度和光照强度等条件探索合适的种质保存条件;最后,探索了休眠块茎唤醒方式和丛生芽再诱导方法,为种质资源再扩繁提供基础。结果: 以叶柄为外植体,升汞灭菌12 min后,接种至添加2,4-D的培养基中可诱导疏松愈伤组织。外植体接种至MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+蔗糖30 g/L +琼脂6.0 g/L,pH 5.8中可进行丛生芽诱导。合适的种质保存基本培养基为MS和N6培养基;合适的蔗糖浓度为30 g/L,过低或过高均不利于种质保存;在丛生块茎诱导时需要提供足够的温度和光照,低温及避光条件不利于种质保存。待丛生芽自然倒苗休眠后可进行长达1~2年的离体保存。对休眠块茎进行唤醒诱导时可采用切割块茎后再接种的方式。萌发出来的叶柄直接进行丛生芽诱导增殖,而块茎则接种至MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L,pH 5.8中进行再分化诱导丛生芽。诱导出来的丛生芽进行规模化扩繁或继续进行离体保存。结论: 通过对三叶半夏的种质扩繁,筛选合适的条件得到休眠丛生块茎,可对三叶半夏进行长时间的离体保存,而后唤醒和再次诱导的相关研究,为其种质资源保存、利用提供技术基础。     

毛叶枣的组织培养及植株再生

1　植物名称　毛叶枣 (Ｚｉｚｉｐｈｕｓｍｕａｒｉ ｔｉａｎａ) ,别名印度枣、缅枣、西西果等 ,广东、海南、福建等地又名台湾青枣。2　材料类别　幼嫩茎段、果肉和刚张开的幼嫩叶片。3　培养条件　培养基 :( 1 )ＭＳ 2 ,4 Ｄ 1 .0ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) ＫＴ 0 .2 5 ＣＭ     

滇产白及类习用药材资源调查及市场利用评价

采用文献调查、访问调查、实地调查,对云南白及类习用药材资源现状和市场情况调查,了解白及、小白及、黄花白及的生境特点、市场使用情况、濒危程度,为加强白及类习用药材的保护和规范化种植提供依据。结果白及主要分布在滇中,滇西、滇东南地区,小白及主要分布在滇东南、滇南、滇东、滇中地区,黄花白及主要分布在滇中、滇东北、滇东地区,分布地区有交叉,但集中分布地区又各有不同。目前白及类野生植物资源濒危,急需加强保护;白及类药材混淆多,栽培研究开展滞后,无法满足市场需求,急需加强引种育苗及规范化种植研究。     

红掌气生根根段再生快繁体系的建立

以红掌气生根根段为材料,诱导再生团块产生,进而分化出苗,形成快速繁殖系统.培养基1/2MS 6-BA1.0mg·L-1 2,4-D 0.6 mg·L-1适于气生根的保持和繁殖,1/2MS 6-BA 1.0 mg·L-1 2,4-D 0.2 mg·L-1适于诱导气生根再生团块的产生,MS 6-BA 1.0mg·L-1 2,4-D0.2mg·L-1可使再生团块分化成苗.不论是愈伤组织,还是再生团块,出现绿色组织是分化所必需的.添加2,4-D、6-BA和2,4-D的适当比例、MS培养基的无机盐浓度在再生团块的诱导与分化成苗中起重要作用.     

花生成熟胚胚轴的植株再生和快繁

利用正交试验筛选出了以花生成熟胚胚轴为外植体获得较高频率的不定芽分化和植株再生的条件,并在此基础上对花生试管苗的快速繁殖进行了研究,研究表明,4d龄实生苗的花生胚轴,接种于MS NAA0.4mg/L TDZ0.2mg/L诱导培养基上培养28d后,转移到MSo可获得丛生的再生苗。将丛生苗分离,接种到P1培养基（MS NAA0.4mg/L BAP0.5mg/L）,小苗长大,把较大的试管苗切成带叶节的茎段,接种于含不同浓度的TDZ和BAP的快繁培养基,结果表明,TDZ0.2mg/L最适宜试管苗的快繁,繁殖系数可达4.8/月,试管苗经IBA诱导生根后,移栽田间,开花结果。     

柱花草种质资源研究进展

柱花草属(Stylosanthes Sw.)约含50个种(包括二倍体和多倍体), 染色体基数x=10, 是热带和亚热带地区的优良豆科牧草, 其中圭亚那柱花草(S. guianensis Sw.)、有钩柱花草(S. hamata (L.) Taub.)、西卡柱花草(S. scabra Vog.)、矮柱花草(S. humilis Kunth)和灌木柱花草(S. seabrana B. L. Maas s & 't Mannetje)的种植面积最广。由于柱花草产量高、营养丰富、栽培容易且用途广泛(可用于青稞饲料、调制干草和干草粉、牧地种植、果树间种、水土保持及绿肥等), 被许多国家用于热带和亚热带农业生产中, 如亚洲的中国、印度、泰国和马来西亚等, 澳洲的澳大利亚, 美洲的美国、哥伦比亚、巴西和古巴, 以及非洲的尼日利亚等。该文对柱花草种质资源的系统学、种质收集、评价、利用及育种等方面的研究进展进行了系统的概括和归纳, 并展望了当前柱花草研究的热点领域和亟待解决的问题。     

柱花草种质资源研究进展

柱花草属（Stylosanthes Sw.）约含50个种（包括二倍体和多倍体）,染色体基数x=10,是热带和亚热带地区的优良豆科牧草,其中圭亚那柱花草（S.guianensisSw.）、有钩柱花草（S.hamata（L.）Taub.）、西卡柱花草（S.scabra Vog.）、矮柱花草（S.humilis Kunth）和灌木柱花草（S.seabrana B.L.Maass＆＇tMannetje）的种植面积最广。由于柱花草产量高、营养丰富、栽培容易且用途广泛（可用于青稞饲料、调制干草和干草粉、牧地种植、果树间种、水土保持及绿肥等）,被许多国家用于热带和亚热带农业生产中,如亚洲的中国、印度、泰国和马来西亚等,澳洲的澳大利亚,美洲的美国、哥伦比亚、巴西和古巴,以及非洲的尼日利亚等。该文对柱花草种质资源的系统学、种质收集、评价、利用及育种等方面的研究进展进行了系统的概括和归纳,并展望了当前柱花草研究的热点领域和亟待解决的问题。     

白及属药用植物化学成分及药理作用研究进展

结合国内外文献综述了白及属植物化学成分的研究进展,并对该属药用植物的药理活性进行了总结。白及属植物含有多种化学成分,主要有联苄类、二氢菲类、菲类、黄酮类、2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类、多酚类等。该属药用植物具有显著收敛止血、消肿生肌的功效。     

紫花三叉白芨快繁技术研究

为建立白芨(Bletilla striata)高效实用的组织培养快繁体系,以紫花三叉白芨成熟未开裂的蒴果、块茎、叶片为外植体,筛选最佳外植体材料,并研究不同生长调节剂浓度培养基对原球茎萌发、丛生芽诱导以及生根影响。结果表明,白芨种子为最佳外植体材料;培养基 KC + NAA 0.5 mg·L^–1有利于白芨原球茎丛生芽诱导;培养基 MS + 6-BA 2.0 mg·L^–1+ NAA 0.2 mg·L^–1 + 10%椰汁有利于丛生芽增殖及成苗;将 2 cm 高幼苗转入生根培养基 1/2MS + NAA 0.5 mg?L^–1中,其生根效果最好,生根率达 98.67%。     

白及蔗糖合成酶基因的克隆及表达分析

为揭示白及蔗糖合成酶基因与生长发育的关系,该研究以白及为材料,利用RT-PCR技术同源克隆白及蔗糖合成酶的关键基因SuSy,对SuSy基因的生物学特性及表达特征进行了分析,并利用实时荧光定量PCR检测SuSy基因在不同组织中的表达规律。结果表明:(1)白及SuSy基因长度为2 215 bp,编码737个氨基酸,与铁皮石斛、文心兰和蝴蝶兰的蛋白质氨基酸序列的相似性分别为97%、92%和95%。(2)生物信息学分析表明,SuSy蛋白质序列具有较高的亲水性,与拟南芥SuSy蛋白质氨基酸三级结构一致性为75.2%;系统进化树分析发现,白及SuSy蛋白与铁皮石斛处于同一个分支上。(3) qRT-PCR结果表明,SuSy基因在叶片中的表达量最高,块茎中的表达量最低;成熟叶片的表达量高于未成熟叶片的表达量;数据差异性分析显示,SuSy基因在根、块茎中表达量具有极显著性差异,但在一年生叶和二年生叶中的表达量无显著性差异,幼苗叶和一、二年生叶中表达量具有极显著性差异。由此推测,SuSy基因可能受生长发育的诱导,是调控白及生长发育关键基因。     

白及根部内生真菌多样性研究

白及是地生兰科多年生草本植物,是常见的中草药之一。白及根是白及植株吸收养分和水分的主要场所,开展其根部内生真菌的群落组成及多样性分析,对了解云南原生境白及与根部内生真菌间的共生关系具有重要意义。本研究采用形态学和ITS rDNA分子系统发育分析相结合的方法进行菌株鉴定。结果表明,3个采样点的白及根部分离到可培养内生真菌32株,包括9个目、13个科、16个属。其中木霉属Trichoderma、镰刀菌属Fusarium、拟盘多毛孢属Pestalotiopsis为优势类群,分别占总物种数的21.88%、18.75%、9.38%;中碳垫菌属Nemania、丛赤壳属Nectria、炭角菌属Xylaria、紫霉属Purpureocillium、刺盘孢属Colletotrichum、黑孢子菌属Nigrospora、Biscogniauxia、腐质霉属Humicola、脉孢菌属Neurospora、拟茎点霉属Phomopsis、植物腐霉Phytopythium、毛霉属Mucor、伞状霉属Umbelopsis为常见内生真菌类群。α多样性指数分析表明：各采样点的白及根部内生真菌物种多样性最高的是昆明市水源保护区采样点（D=0.799,H’=1.698）,保山市龙陵县采样点物种多样性最低（D=0.787,H’=1.580）。β多样性分析采样点之间的Jaccard（0.912-0.993）、Bray-Curtis（0.838-0.986）和UniFrac（加权0.618-0.631;不加权0.770-0.799）距离,结果表明3个采样点之间的内生真菌群落组成存在差异。3个采样点的不同地理环境和土壤类型给白及提供了不同的生境条件,是影响白及根部内生真菌物种丰度和群落组成差异的主要因素之一。     

不同培养基上白芨的种子萌发与幼苗形态发生

对无菌条件下白芨种子在不同培养基上的萌发及其幼苗形态发生进行了研究.结果表明:在白芨种子萌发过程中,种胚先转绿,然后在种胚远离残余胚柄的一端突破种皮,形成原球茎.在原球茎顶端分化出叶原基,并逐渐发育成叶片.在原球茎下部表面存在透明的毛状物,推测这些毛状物与幼根根毛是同功的.白芨种子萌发最适培养基为1/2 g·L-1 +1.0 mMS NAA.添加低浓度的外源细胞分裂素(6-BA或KT)与NAA组合均严重抑制种子的萌发,种子萌发率较低,形成的圆球茎较小,原球茎分化出的小苗也较细弱.白芨生根壮苗最适培养基为1/2 g·L-1 NAA+2.0 g·L-1活性炭+1.0 mg·L-1 +1.0 mMS GA3.生根壮苗培养基中加入活性炭和GA3有利于根的生长和壮苗,且植株长势健壮.炼苗基质为腐殖土和蛭石(1∶1),成活率可达90%以上.     

野生红花白芨再生体系的建立和优化

以野生红花白芨成熟蒴果为外植体,建立了白芨植株的再生体系。结果表明：白芨种子萌发最佳培养基为1/2 MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1+AC 0.5 g·L^-1;原球茎增殖最适培养基为MS+KT 1.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1+AC 0.5 g·L^-1;原球茎分化培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L^-1+KT 1.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1+AC 0.5 g·L^-1;不定芽增殖最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L^-1+KT 1.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1+AC 0.5 g·L^-1 +土豆汁150 g·L^-1,30 d后的芽增殖率达343%;最适生根培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg·L^-1+AC 0.5 g·L^-1+土豆汁100 g·L^-1,生根率达100%;试管苗移栽的最佳方式是以水苔+树皮+椰糠+锯木粉(2∶2∶1∶1,V/V/V/V)为混合基质进行多株移栽,成活率可达99%。     

菌根真菌对白及种子萌发和幼苗生根的作用

自然条件下,兰科植物需要依赖菌根真菌获得营养才能萌发。本研究对白及根和原球茎中分离的4株菌根真菌（WQ17-33、WQ17-43、JST-3和SL15-7）进行分子鉴定,并评价光照和黑暗条件下不同菌株促白及种子萌发和幼苗生根的效果。结果表明,4个菌株分别隶属于鬼伞属Coprinus、胶膜菌属Tulasnella、腊壳菌属Sebacina和Serendipita。在种子萌发前期（未形成叶子）进行暗培养较光照对菌株JST-13和SL15-7处理组原球茎阶段萌发具有显著的促进作用。不同菌株共生萌发效果不同,菌株SL15-7较其他处理原球茎和幼苗发育阶段的萌发率高。菌株JST-13和SL15-7处理组形成的幼苗较其他处理组强壮,定殖的菌丝团也较多,其幼苗生根效果也较对照组好。该研究表明白及可与多种不同类群的菌根真菌菌株形成共生关系,这些真菌在促进白及种子萌发和生根能力方面存在差异。     

白及丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)基因的序列分析

丝氨酸羟甲基转移酶（SHMT）是植物细胞光合作用和一碳代谢的关键酶之一,研究SHMT基因的序列信息对揭示其蛋白结构与功能具有重要指导意义。从白及转录组数据库中分离得到SHMT基因（NCBI登录号：MG544187）,运用生物信息学软件对该基因进行序列分析。结果显示：该基因长度为1 953 bp,编码的蛋白质长度为471aa、分子量为51.861 06 kD、理论等电点为7.17,SHMT二级结构主要由无规则卷曲结构和α螺旋结构组成,核苷酸和氨基酸序列与铁皮石斛SHMT相似性最高,达93%,结构域分析发现该蛋白具有高度保守结构域,三级结构预测为四聚体结构,跨膜区及信号肽分析发现该蛋白无跨膜区及信号肽,亚细胞定位分析发现该蛋白主要位于细胞质、叶绿体亚细胞器位置。本分析结果为白及SHMT的应用研究提供了基础数据,也为植物SHMT基因的分子研究提供了理论依据及基础资料。