低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和Jun基因表达的影响

目的 :观察低氧预处理对缺氧 复氧后大鼠海马神经元Jun表达的影响。方法 :取培养 12d的两组 (对照组和低氧预处理组 )神经元 ,同时置于缺氧环境 (0 .90L LN2 0 .10L LCO2 )中培养 4h后取出 ,置含 0 .10L LCO2 和空气的培养箱内复氧培养 2 4h和 72h ,于不同时间取出 ,观察神经元存活数 ,并用抗Jun抗血清进行免疫组织化学染色 ,观察Jun表达阳性和阴性神经元数目 ,计算Jun表达神经元所占百分率。结果 :经低氧预处理的海马神经元缺氧 复氧后Jun表达阳性神经元百分率较对照组明显减少 ,神经元存活数明显高于对照组。结论 :低氧预处理可使海马培养神经元对缺氧产生耐受 ,减少缺氧 复氧后神经元Jun的表达。提高神经元存活数     

缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl—2表达的影响

采用免疫组化方法,观察缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl-2表达的影响。结果显示,缺氧2h时Bcl-2免疫反应阳性神经元的平均光密度较缺氧前明显增强,但缺氧4h和重新恢复供氧后24—72h时,Bcl-2免疫反应阳性神经元的平均光密度又逐渐减弱。缺氧后Bcl-2免疫反应阳性神经元数和阳性率亦随神经元存活数的下降而逐渐减少。本结果提示,缺氧早期Bcl-2免疫染色阳性神经元的免疫反应增强可能是脑细胞在缺氧条件下的自我保护机制,Bcl-2可能对海马神经元缺氧损伤具有一定调控作用。     

人重组白细胞介素—6对缺氧时大鼠海马神经元Bcl—2表达？…

目的和方法：采用免疫组化方法,观察缺氧对体外培养大鼠海马神经元Ｂｃｌ－２表达及人重组白细胞介素－６的影响。结果：经ｒｈＩＬ－６孵育的海马神经元缺氧后神经元活存 数、Ｂｃｌ－２表达阳性神经元数和Ｂｃｌ－２表达阳性神经元的平均光密度均明显高于对照组。结论：ｒｈＩＬ－６能增强缺氧神经元Ｂｃｌ－２的表达,抑制缺氧后神经元的死亡,提示ｒｈＩＬ－６参与脑缺氧损伤的调控。     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-1β表达的影响

目的:观察低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和白细胞介素- 1β(IL-1β)表达的影响.方法:取培养12 d的两组(对照组和低氧预处理组)培养神经元,同时置于缺氧环境(0.9L/LN2,0.1L/LCO2)中培养2、4、8和12 h. 分别观察它们的形态变化和神经元存活数,并用抗rhIL-1β单克隆抗体进行免疫组织化学染色,观察缺氧对大鼠海马培养神经元IL-1β表达的影响.结果:经低氧预处理的海马神经元缺氧后IL-1β表达较对照组减弱,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组.结论:低氧预处理可使海马培养神经元对缺氧产生耐受 ,其中IL-1β表达降低可能是海马神经元对缺氧的一种适应性变化.     

缺氧/复氧对培养的大鼠海马神经元Fos、Jun表达和神经元凋亡的影响

目的：观察缺氧／复氧对体外培养的海马神经元Fos和Jun表达和神经元凋亡的影响。方法：取培养12d的海马神经元,置2000cm^3的恒温（36℃）密闭容器内,连续充以无氧气体（90％N2、10％CO2）,在缺氧条件下继续培养2、4h后取出,置含10％CO2和空气的培养箱内复氧培养24h和72h。于不同时间取出,观察神经元存活数,分别用抗Fos和抗Jun抗血清进行免疫组织化学染色,计数Fos和Jun表达阳性神经元百分率,并用原位末端标记（TUNEL）法和流式细胞术分别观察和测定缺氧／复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果：缺氧／复氧后Fos和Jun表达阳性神经元百分率和凋亡神经元百分率的显著增加。结论：缺氧／复氧后即早反应基因fos在神经元中的持续表达可引起神经元凋亡,原癌基因jun的表达与神经元凋亡的发生有关。     

重组人白细胞介素-6对缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax 表达和神经元凋亡的影响

实验在培养的大鼠海马神经元中观察了重组人白细胞介素-6（recombinant human interleukin-6,rhIL-6）对缺氧-复氧后Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响。把培养12d的大鼠海马神经元分为对照组和rhIL-6组,同时于缺氧环境（90% N2 10% CO2）中培养2、4h后,再于常氧培养箱内复氧培养24和72h。于不同时间取出,分别用抗Bcl-2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色,观察缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2和Bax的表达,并用原位末端标记（TUNEL）法和流式细胞术分别检测缺氧-复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果可见,与缺氧前相比,缺氧-复氧后24和72h,海马神经元Bal-2表达明显减弱,Bax表达明显增强,凋亡神经元明显增多。经rhIL-6预处理的海马神经元与对照组相比,缺氧-复氧后24和72h,Bcl-2表达明显增强,Bax神经明显减弱,凋亡神经元明显减少。本实验结果提示,rhIL-6对海马神经元缺氧-复氧损伤具有一定的保护作用。     

缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元c-fos的表达及人重组白细胞介素-1β的影响

采用免疫组化方法,观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元ｃ－ｆｏｓ的表达及人重组白细胞介素－１β（ｒｈＩＬ－１β）的影响。结果显示,缺氧后海马神经元中Ｆｏｓ染色阳性胞核的百分率随缺氧时间的延长而显著增加。图像分析的结果显示,缺氧后Ｆｏｓ染色阳性胞核的平均光密度亦随缺氧时间的延长而显著增加。经ｒｈＩＬ－１β孵育的神经元缺氧后Ｆｏｓ染色阳性胞核的百分率和Ｆｏｓ染色阳性胞核的平均光密度均明显低于对照组。本结果表明,缺氧能诱导体外培养海马神经元ｃ－ｆｏｓ表达,ｒｈＩＬ－１β能抑制缺氧神经元ｃ－ｆｏｓ表达。提示ｒｈＩＬ－１β对海马神经元缺氧损伤具有一定调控作用。     

PSD-95结构域PDZ1过表达拮抗缺氧缺糖诱导的海马神经元凋亡

为了观察突触后致密物质-95（postsynaptic density95,PSD-95）结构域PDZI过表达对缺氧缺糖诱导的海马神经元凋亡的影响,本研究采用培养21d的Sprague—Dawley大鼠海马神经元,加入PDZ2腺病毒颗粒感染24h,收集细胞进行免疫沉淀、免疫印迹实验;缺氧缺糖1．5h后,用DAPI染色后荧光显微镜观察细胞凋亡,并收集细胞进行免疫印迹实验。结果显示：（1）PDZ2在海马神经元中过表达;（2）过表达的PDZ1使缺氧缺糖诱导的海马神经元凋亡数量减少（P〈0．05）;（3）过表达的PDZ1使PSD-95与GluR6结合减少;（4）PDZ1过表达抑制由缺氧缺糖诱导的火鼠海马神经元MLK3和JNK1／2磷酸化。以上结果提示,PDZ1过表达能拈抗缺氧缺糖诱导的海马神经元凋亡。     

缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元c—fos的表达及人重组…

采用免疫组化方法,观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元ｃ－ｆｏｓ的表达及人重组白细胞介素－１β（ｒｈｌＬ－１β）的影响,结果显示,缺氧后海马神经元中Ｆｏｓ染色了性胞核的百分率随缺氧时间的延长而显著增加。图像分析的结果显示,缺氧后Ｆｏｓ染色阳性胞核的平均光密度亦随缺氧时间的延长而显著增加。经ｒｈＩＬ－１β孵育的神经元缺氧后Ｆｏｓ染色阳性胞核的百分率和Ｆｏｓ染色阳性胞核的平均光密度均明显低于对照组。本结     

异丙酚对缺氧/复氧后原代培养的海马神经元c-fos表达和神经元凋亡的影响

目的:观察异丙酚对原代培养海马神经元缺氧反应的影响.方法:培养12 d海马神经元分组测定LDH漏出率及c-fos蛋白含量和神经元凋亡率.结果:加入异丙酚后LDH漏出率、c-fos的蛋白含量和细胞凋亡率较缺氧组明显减少.结论:异丙酚组能提高体外海马神经元的缺氧耐力,减少LDH漏出率,降低c-fos蛋白过度表达和细胞凋亡率.     

低氧预处理对大鼠海巴神经元缺氧耐受性和IL—1β表达 …

目的：观察低氧预处理对大鼠海巴神经元缺氧耐受性和白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）表达的影响。方法：取培养１２ｄ的两组（对照组和低氧预处理组）培养神经元,同时置于缺氧环境（０．９Ｌ／ＬＮ２,０．１Ｌ／ＬＣＯ２）中培养２、４、８和１２ｈ。分别观察它们的形态变化和神经元存活数,并用抗ｒｈＩＬ－１β单克隆抗体进行免疫组织化学染色,观察缺氧对大鼠海马培养神经元ＩＬ－１β表达的影响。结果：经低氧预处理的海马神经     

Anoxia-induced c-fos expression of cultured rat hippocampal neurons and effect of recombinant human interleukin-1 beta]

Effects of recombinant human interleukin-1 beta (rhIL-1 beta) on the c-fos expression of cultured rat hippocampal neurons in vitro induced by anoxia were studied by using an immunohistochemical method. The results showed that the percentage and the mean optical density of the Fos-positive neuronal nuclei in cultured hippocampal neurons increased markedly as anoxia prolonged, while those in hippocampal neurons pretreated with rhIL-1 beta were significantly lower than those of control. The results indicate that anoxia can induce c-fos expression of cultured rat hippocampal neurons in vitro and this can be inhibited by rhIL-1 beta, suggesting that rhIL-1 beta may protect neurons from damage in a certain degree during anoxia.     

海马培养细胞的缺氧损伤及降钙素基因相关肽的保护作用

采用新生大鼠海马细胞进行分离培养,观察缺氧对海马培养细胞的影响以及降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的保护作用。结果表明：培养１２ｄ的细胞置于缺氧环境（９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２）中４─２４ｈ后,随着缺氧时间延长,神经细胞由肿胀、胞膜受损乃至死亡,台盼蓝染色细胞数增多,乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和Ｋ＋漏出增加。经ＣＧＲＰ孵育的细胞缺氧后形态变化轻微,细胞死亡率以及ＬＤＨ和Ｋ＋漏出量均明显低于对照组。本结果表明,体外培养的海马神经元对缺氧甚为敏感。缺氧造成海马细胞严重损伤,ＣＧＲＰ对此有明显的保护作用。     

Na^＋／Ca^2＋交换抑制剂在大鼠海马缺氧损伤中的作用

本文以大鼠离体海马脑片和分散培养的海马神经元为标本,分别采用微电极记录技术和激光扫描共聚焦显微镜动态监测单个神经元［Ｃａ２＋］ｉ的方法,研究Ｎａ＋／Ｃａ２＋交换抑制剂Ｂｅｎｚａｍｉｌ对缺氧后海马脑片损伤以及海马神经元［Ｃａ２＋］ｉ变化的影响。结果显示,预先用Ｂｅｎｚａｍｉｌ（５０μｍｏｌ）灌流的海马脑片缺氧后ＰＶ持续时间较对照组显著延长,提示其可延缓海马不可逆缺氧损伤的发生;共聚焦测［Ｃａ２＋］ｉ实验进一步发现,急性缺氧可诱导海马神经元［Ｃａ２＋］ｉ迅速升高,而Ｂｅｎｚａｍｉｌ（２０μｍｏｌ）能显著抑制缺氧引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高。上述结果表明,抑制神经元Ｎａ＋／Ｃａ２＋交换活动可提高海马脑片抗缺氧能力,其作用机制可能与抑制缺氧所致神经元［Ｃａ２＋］ｉ升高有关,由此推测Ｎａ＋／Ｃａ２＋交换体参于大鼠海马脑区缺氧损伤,它可能是导致缺氧后神经元［Ｃａ２＋］ｉ升高的重要途径之一     

皮质酮对原代培养海马神经元的毒性作用及NMDA受体亚基表达的改变

目的研究皮质酮对大鼠海马神经元的毒性作用及NMDA受体亚基表达的影响.方法以体外原代培养的大鼠海马神经元为研究对象,根据影响因素,即给予的不同浓度皮质酮和其它因素分为8个组:对照组、10-7mol/L皮质酮组(简称10-7组)、10-6mol/L皮质酮组(简称10-6组)、10-5mol/L皮质酮组(简称10-5组)、10-6 高糖组、10-5 高糖组、10-6mol/L MK801组和10-5mol/L MK801组,镜下观察不同浓度皮质酮作用下海马神经元形态学的变化,并采用MTT方法测量各组细胞存活率,利用免疫细胞化学结合图象分析对原代培养海马神经元NMDA受体亚基的表达进行观察.结果 10-6、10-5浓度的皮质酮对海马神经元影响较大,细胞存活率较对照组明显降低,但10-6 高糖组、 10-5mol/L 高糖组、10-6mol/L MK801及10-5mol/L MK801 4个组,分别与相同皮质酮浓度处理组比较,细胞存活率显著提高.10-6和10-5组海马神经元上NMDA受体亚基表达较对照组明显降低.10-7mol/L浓度的皮质酮对上述指标影响不大.结论过量的皮质酮对大鼠海马神经元具有损伤作用,NMDA受体参与了此过程,NMDA受体拮抗剂和高浓度葡萄糖可保护海马神经元.     

Underlying mechanism of hypoxic preconditioning decreasing apoptosis induced by anoxia in cultured hippocampal neurons

It is known that hypoxic preconditioning (HP, a brief period of sublethal hypoxia) provides neuroprotection against subsequent severe anoxia, but the mechanisms of this increased tolerance have not been fully elucidated. A hypoxic preconditioning model was established by exposing a 4-day hippocampal culture to 1% O(2) for 20 min/day for 8 days. The preconditioning significantly decreased the number of apoptotic neurons at reoxygenation 24 h after 4 h of severe anoxia (0% O(2)). Further study demonstrated that the degradation of mitochondrial membrane potential (MMP) was greatly inhibited and the expression of B-cell lymphoma protein-2 (Bcl-2) was increased considerably after severe anoxia in the HP groups. These results indicate that the increased anoxic tolerance, which is induced by HP in cultured hippocampal cells, may be correlated with Bcl-2 overexpression and enhanced stability of MMP, which ultimately reduces apoptosis 24 h after reoxygenation.     

凝血酶诱导大鼠海马神经细胞凋亡及其与Bcl-2及Bax表达变化关系的实验研究

目的研究不同浓度凝血酶诱导海马神经元凋亡的作用及其机制.方法将原代培养新生大鼠海马神经元分为对照组,凝血酶组(1U/ml,10U/ml,20U/ml,40U/ml),凝血酶受体激活肽组.应用TUNEL及流式细胞仪检测凋亡细胞数及凋亡百分率,免疫细胞化学方法检测Bcl-2,Bax蛋白表达.结果低浓度凝血酶组(1U/ml)凋亡细胞数和凋亡率与对照组无差异,Bcl-2表达增加;随凝血酶浓度增加,TUNEL阳性细胞数及凋亡率明显增多,Bcl-2表达下调,Bax表达上调,Bcl-2/Bax比值降低.凝血酶受体激活肽的作用与大剂量凝血酶类似.结论凝血酶可能通过激活PAR-1受体诱导凋亡,凋亡呈剂量依赖性.Bcl-2的表达减少,Bax的表达增加,Bcl-2/Bax降低可能为高浓度凝血酶诱导凋亡的机制之一.