酿酒酵母和粟酒裂殖酵母细胞增殖对Ca~(2 )依赖性的比较研究

同样实验条件下Ca~(2 )对S.cerevisiae的增殖没有影响,但能明显促进S.pombe的增殖;Ca~(2 )螯合剂EGTA对S.cerevisiae的增殖没有明显抑制作用,但对S.pombe的增殖有显著的抑制作用,回加Ca~(2 )能够有效消除EGTA的抑制作用;而非特异性螯合剂EDTA虽然对两类酵母细胞的增殖都有抑制作用,但Ca~(2 )却不能消除EDTA的抑制作用,这样就直接指明了两类酵母对胞外Ca~(2 )的依赖性是不一样的。由于S.cerevisiae细胞的增殖速率比S.pombe细胞要快近3倍,且与转化细胞或肿瘤细胞具有类似的细胞增殖不依赖于胞外Ca~(2 )的特性,说明研究胞外Ca~(2 )对这两类酵母细胞增殖不同作用效应的机制,对搞清细胞周期失控与细胞转化之间的关系有重要的意义。     

水霉(Soprolegnia fer ax)生长菌丝顶端细胞内游离Ca~(2 )和膜结合Ca~(2 )的分布

本文比较和研究了水霉(Saprolegnia ferax)生长菌丝顶端胞内Fluo-3游离Ca~(2 )和CTC膜结合Ca~(2 )的荧光分布影像。激光共焦扫描显微镜下观察可见:Fluo-3荧光有房室化现象,Fluo-3荧光反映的是细胞质游离Ca~(2 )与细胞器游离Ca~(2 )总的分布状况,Fluo-3游离Ca~(2 )的最大荧光强度出现在菌丝顶端2—10μm区域,10μm以后荧光强度逐渐下降,约40μm以后荧光降到很低,值得注意的是菌丝顶端2μm以前存在一个低荧光强度区。CTC膜结合Ca~(2 )的荧光影像显示:pH6.8或8.0的条件下菌丝最顶端2μm以前的区域都不能被染色,但pH8.0条件下的荧光较pH6.8弥散而强烈,代表线粒体的蠕虫状荧光斑点不再能够清晰辨认,说明其它细胞器也被染色,但菌丝顶端仍然不能被着色。结合菌丝顶端DIC和超微结构分析说明,菌丝顶端泡囊不是一个Ca~(2 )库,线粒体和内质网等是菌丝胞内重要的Ca~(2 )库。本文结果还澄清了有关菌丝内细胞质游离Ca~(2 )分布的矛盾报道。     

pH影响Ca~(2 )和EGTA对水霉(Saprolegnia ferax)菌丝顶端生长的作用效应

水霉(Saprolegia ferax)菌丝在pH6.0-8.0的OM液体培养基中生长良好,在pH5.0时生长速率有所下降,在pH3.0—4.0时停止生长。短时间(30min)作用研究表明,低浓度的CaCl_2促进pH5.0(1—5mmol/L)和pH6.0(1mmol/L)条件下的菌丝顶端生长,抑制pH7.0—8.0条件下的菌丝生长。1mmol/L以上的EGTA则抑制pH5.0条件下菌丝顶端生长,促进pH6.0—8.0条件下的菌丝顶端生长。但CaCl_2和EGTA都不能使pH3.0—4.0条件下的菌丝恢复生长。长时间(8h)作用跟踪观察表明,2mmol/L EGTA(pH6.8)短时间作用可促进菌丝生长,但随着培养时间延长,则产生抑制作用,并诱导原生质从菌丝最顶端喷出。说明细胞壁Ca~(2 )起着提供胞外Ca~(2 )源和细胞壁修饰成分的双重作用。Ca~(2 )通道阻断剂verapamil对菌丝顶端生长的抑制作用也说明顶端生长所需的Ca~(2 )来自胞外。     

镧对烟草愈伤组织和油菜幼根钙含量的影响

ＭＳ培养基中添加镧（Ｌａ）（０ ．０１ ～０ ．１０ｍ ｍｏｌ·Ｌ－ １） 培养烟草愈伤组织,其总Ｃａ２ ＋ 及原生质体Ｃａ２ ＋ 含量明显比对照（ 不加Ｌａ） 低;长时间（ 继代培养３０ｄ） 较短时间培养（ 悬浮培养２４ｈ） 低．低浓度（０ ．０１ ～０ ．０５１ｍｏｌ·Ｌ－ １）Ｌａ３ ＋ 使细胞壁中Ｃａ２ ＋ 含量高于对照并随浓度提高而增加,高浓度（０ ．１０１ｍｏｌ·Ｌ－ １） 则减少．与Ｃｅ２ ＋ 相比较,Ｌａ３ ＋ 的排Ｃａ２ ＋ 作用稍弱于Ｃｅ３ ＋ ．以不同浓度Ｌａ（ＮＯ３）３ 溶液浸种,油菜幼根总Ｃａ２ ＋ 及原生质体中Ｃａ２ ＋ 含量变化与上述类似．Ｌａ３ ＋ 使烟草愈伤组织褐化明显,生长量比对照低．     

Li~ 、新霉素和Ca~(2 )对苹果花粉萌发与花粉管生长的影响

细胞外 Ca2 及其跨膜内流在花粉萌发和花粉管生长中具重要作用 〔1〕,磷脂酰肌醇 ( PI)系统产生的IP3(肌醇 - 1 ,4,5-三磷酸 )能诱导细胞内 Ca2 库释放 Ca2 〔2 ,3〕,IP3及其受体调节花粉萌发和花粉管生长〔4～ 7〕,但它们之间的作用及关系还不清楚。笔者通过抑制剂对细胞内 Ca2 的调节 ,以期进一步探讨细胞内 Ca2 库的 Ca2 释放在花粉萌发和花粉管生长中的作用及其和细胞外 Ca2 及其内流的关系。1 　材料与方法将‘国光’、‘富士’苹果 ( Maluspumila Mill.)花粉播种在基本培养基 ( 1 0 %蔗糖 1 0 0 μg/g硼酸 ) 〔8…     

线粒体Ca~(2 )转运与细胞代谢调节

线粒体具有一套完整的Ca2 转运系统 ,包括两条摄取途径和三条释放途径。生理条件下 ,它们在细胞胞质与线粒体钙稳态维持以及细胞能量代谢中起重要作用 ,线粒体从胞质摄取的Ca2 可激活某些Ca2 敏感的呼吸酶和代谢过程。病理条件下 ,线粒体Ca2 转运发生紊乱 ,通过线粒体通透性转换导致细胞坏死或凋亡     

硒对心肌质膜(Ca~(2+)·Mg~(2+))-ATPase和肌浆网Ca~(2+)-ATPase活力的影响

本文以豚鼠和大白鼠心肌肌浆网膜(SR)Ca~(2+)-ATPase的活力,心肌质膜(SL)(Ca~(2+)Mg~(2+))-ATPase的活力和电子显微镜的方法探索克山病病区粮中低硒与心肌细胞钙转运调控的共系,实验结果为硒对克山病有预防作用的观点提供了新的理论依据,并进一步支持了“克山病是一种心肌线粒体病”的观点。     

外源Ca~(2 )预处理对高温胁迫下辣椒叶片细胞膜透性和GSH、AsA含量及Ca~(2 )分布的影响

以辣椒 (Capsicum annuum)幼苗的叶片为材料 ,研究了外源 Ca2 预处理对热胁迫下细胞质膜透性和谷胱甘肽 (GSH)、抗坏血酸 (As A)含量变化及 Ca2 分布的影响。结果表明 :外源 Ca2 预处理能减轻热胁迫引起的细胞膜破坏 ,能够减少叶片中 GSH和 As A的破坏。热胁迫后 ,Ca2 具有从胞外转运到胞质内和叶绿体中的趋势 ;外施Ca2 预处理能够明显增加细胞间隙、液泡和叶绿体中的 Ca2 颗粒密度 ,能够稳定热胁迫下叶肉细胞膜和叶绿体的超微结构。结果表明 ,外施 Ca2 预处理可能通过改变细胞内外的 Ca2 分布 ,减轻热胁迫对叶肉细胞的伤害     

脉冲电场对鸡胚脑细胞Ca~(2 )和cAMP含量的影响

利用ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光方法和放射免疫方法分别研究了脉冲电场对１１天和１４天胚龄的悬浮鸡胚脑细胞内Ｃａ２＋和环腺苷酸（ｃＡＭＰ）含量的影响,并探讨了在脉冲电场作用下这两种信号物质变化的相关性。实验结果表明：当电激液中［Ｃａ２＋］为１ｍｍｏｌ／Ｌ时,在宽度为１００微秒．强度为０．５,１．０,２．０ｋＶ／ｃｍ的脉冲电场作用下,１１天胚龄的鸡胚脑细胞内钙离子浓度（以［Ｃａ２＋］ｉ表示）与对照相比显著上升,其升高值随着脉冲强度的增加而增加,而细胞内ｃＡＭＰ含量与对照相比显著降低;用ＥＧＴＡ络合电激液中游离Ｃａ２＋以后,虽然细胞内［Ｃａ２＋］ｉ显著上升,细胞内ｃＡＭＰ含量没有显著变化。１４天胚龄的鸡胚脑细胞内［Ｃａ２＋］ｉ在脉冲电场作用下显著上升,而细胞内ｃＡＭＰ含量没有显著变化。脉冲电场对１１天和１４天胚龄的鸡胚脑细胞膜和细胞内Ｃａ２＋库Ｃａ２＋转移系统的开放均有显著作用,此作用具有对脉冲强度的依赖性。为了解物理信号跨细胞膜传导的方式提供了初步的实验根据     

介质Ca2+和La3+对酿酒酵母生长的影响

采用正交实验研究了外加Ｃａ^２＋和Ｌａ^３＋对酿酒酵母生长的影响。结果表明：外加Ｃａ^２＋和Ｌａ^３＋对酿酒酵母的生长均有显著的影响,都呈现出低浓度时正效应和高浓度时负效应,当Ｃａ^２＋浓度为１ｍｍｏｌ／Ｌ及Ｌａ^３＋浓度为１５μｍｏｌ／Ｌ时酿酒酵母生长最好。     

Cln3缺失对酿酒酵母生长的影响

Cln3是酿酒酵母G1期周期蛋白中的一种,为了研究Cln3在细胞周期与形态发生中的作用,我们构建了酿酒酵母CLN3基因的缺失株,并对其表型进行了分析。结果显示,cln3缺失株对α信息素的敏感性增强,α信息素诱导的细胞周期停滞现象明显大于野生型菌株,这种增强作用不受Sgv1因子的影响。同时,与野生菌相比cln3缺失株的细胞形态也有明显变化,双倍体cln3缺失株细胞的顶端生长能力增强而单倍体细胞的侵入生长能力则受到抑制。结果表明,与酿酒酵母的另外两个G1期周期蛋白Cln1、Cln2不同,Cln3在形态发生中有其独特的功能与作用方式。     

嗜杀酿酒酵母毒素蛋白及其杀伤质粒的研究

Killer toxin from \%Saccharomyces cerevisiae\% SK was isolated by ultrafiltration of culture supernatants and purified by poly(ethylene glycol). The toxin migrates as one single protein band on SDS-PAGE and its molecular weight is 15kD. The SK toxin has the greatest lethal effect on the sensitive yeast strain in the lat lag phase. Extraction and purification of killer heretity factor(dsRNA) from SK found that M dsRNA plasmid and L dsRNA plasmid have different molecular lengths being 1.7kb and 4.0kb.     

酵母细胞自溶动力学研究

对啤酒酵母细胞自溶的动力学进行了研究,结果表明,在55℃、pH5.5条件下,酵母自溶诱导期约为1.85小时,细胞内贮糖原降解最快,t_(0.5)值仅为1.48小时,蛋白质次之,核酸降解速率最慢,t_(0.5)值为12.38小时.酵母细胞生物大分子的降解动力学存在显著的正协同效应.对不同生理状态酵母自溶液的氨基酸分析表明,生理状态对自溶液的氨基酸组份影响极显著(P<0.01).随着培养时间的延长,相应自溶液中的必需氨基酸、鲜味及苦味氨基酸的比例均显著增加,因而自溶液的鲜味增浓,营养效价提高,但苦味也上升.     

抗酸酵母遗传特性的初步研究

研究了酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）单倍体突变株YNN-27-24（a trp^-ura^-）对乳酸抗性产生原因及其遗传特性。结果表明,该突变株对乳酸的抗性不是由于对环境条件的适应,而是由基因突变所致。通过对A13-18（alys^-）和YNN-27-24进行杂交得到的30株杂交子代的遗传特性进行分析可以看出,YNNM-27-24突变株对乳酸和潮霉素B（HygromycinB）的抗性,均由单基因控制,并且     

吩噻嗪类钙调素抑制剂对芽殖酵母(Saccharomyces cerevisiae)和粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)细胞增殖的不同效应

低浓度的TFP、CPZ及FPZ能明显促进S．Pombe细胞的增殖,培养液中Ca2+浓度越低,TFP等的促进作用越显著,Ca2+与TFP具有协同促进S.pombe增殖的功能;但20μmol／LTFP能终止S．Cerevisiae细胞周期的运转。TFP的细胞膜通透性研究表明,20μmol／LTFP就能进入到S.cerevisiae细胞中,但不易穿过S．Pombe细胞膜却能明显促进Ca2+的内流,引起S.pombe胞内Ca2+总量的迅速增加。因此认为低度的TFP促进S.pombe细胞的增殖,不是因为TFP进入到胞内作为CaM的抑制剂而起的作用,而是通过促进胞外钙的内流从而促进S．Pombe细胞的增殖。     

固定化啤酒酵母废菌体吸附Pd2+的研究

用2％海藻酸钠与l％明胶混合为包埋剂固定啤酒酵母废菌体。SEM、X-射线能谱和TEN研究结果表明,该固定化啤酒酵母废菌体(ISCWB)颗粒中的菌体分布较均匀,ISCWB不仅能吸附Pd^2 ,而且能将Pd^2 还原成Pd^0。ISCWB吸附Pd^2 的最适pH值为3．5。在30℃～70℃范围内,吸附作用不受温度的影响。吸附作用是一个较快的过程,在最初的5min内吸附量可达最大吸附量的36％。吸附作用受ISCWB浓度、Pd^2 起始浓度和共存离子的影响。在起始Pd^2 浓度100mg/L,ISCWB浓度1．8g/L、pH3．5和30℃条件下振荡吸附90min,吸附量为40．6mg/g.以0．5mol／L盐酸作为解吸剂解吸率达98．7％。连续吸附与解吸附试验结果表明,ISCWB的最大饱和吸附量为46．3mg/g,解吸率为98％。     

酿酒酵母胞内无机焦磷酸酶的分离纯化及性质

An inorganic pyrophosphatase (EC3.6.1.1) from Saccharomyces cerevisiae was purified to PAGE homogeneity by sonication disruption. (NH4)2SO4 fractionation and DEAE-cellulose colunm chromatography. The optimum pH and temperature of the enzyme were 7.4～7. 8 and 60℃, respectively. The Km was 19.3 mmol / L. The enzyme required Mg2+ as a cofactor for hydrolysis of pyrophosphate and was inhibited by Ca2+, Hg2+, Pb2+, Mn2+.     

酵母菌类金属硫蛋白的分离、纯化及性质鉴定*

经过对酵母菌的金属抗性试验和培养条件试验,确定了高产类金属硫蛋白的酿酒酵母菌株Cu-21（Saccharomyces cerevisiae Cu-21）及其最佳培养条件。对该菌株的菌体蛋白进行SephadexG-100、DEAE-52结合的两次柱分离纯化,获得了类金属硫蛋白的三个亚型,蛋白性质鉴定结果表明含三个亚型、分子量小、富含半胱氨酸和金属元素,具有典型的巯基吸收特性。     

酿酒酵母BD101诱导产生的金属硫蛋白的分离纯化及鉴定

从酵母菌中分离出拮抗重金属、经铜诱导产生金属硫蛋白的酿酒酵母（Saccharo－mycescerevisiae）BD101。无细胞抽提液经SephadexG－50、DEAESepharoseCL－4B、SephadexG-25三次凝胶及阴离子交换柱层析分离纯化得到两个金属硫蛋白亚型。Mr约为7kD,由60个氨基酸组成,其中半胱氨酸含量占10％,每分子金属硫蛋白（Cu-MT）含6个分子Cys,可结合4个铜原子。