基因标记、转化、表达与检测

921682木枪发醉菌树千毕赤醉母的遗传转化〔会,英〕/H。,N .W.Y.…了APpl。Bioehem.Bioteeh-nol一1991,25~29一369一s7e〔译自DBA,1901,10(21),91一12053」 发展了适用于树干毕赤酵母(尸￡。矶。。“娜t-￡。)CBS7126的质粒转化系统。将含有酿酒酵母2一声m复制源和卡那霉素抗性标记的质粒载体(如pUCKms,7.57kb)引导到酵母细胞中,并以染色体外因子的方式稳定遗传。含此载体的转化子能抗G418。从转化子中回收到相同的质粒,拷贝数很高。另外,在相同条件下,大肠杆菌一产阮假丝酵母(Ca:d玄da”‘感l玄s)穿梭载体pLCii(含有该假丝酵母的…     

组织与原生质体培养

924483链格抱原生质体释放和再生的最佳条件〔英〕/Car-y,J .W.…了Lett.Appl.Mierobiol一1992,14(3)一100一103〔译自DBA,1992,11 (11),92一06034〕 在含1.2M NaCI、MgCO‘或山梨醇的渗透介质(ZomM MgSO‘、iomM NaPO‘、pHS.s)中悬浮链格抱(AI￡e,:a,￡a alte,:a‘a)SRRC1109菌丝,以备生产原生质体。加入不同组合的水解酶后,将混合物在33℃下轻摇90分钟。从培养20小时的培养物中收集19湿菌丝,将之与Novozy-me234、Driselase和户葡糖普酸酶在1.2M KCI渗透介质中共同温育时结果最佳(4.56十/一。.33x10’原生质体/毫升)。优…     

其它药剂

862248用生物转化法生产抗坏血酸〔专,英〕/Roland,J.F.…了PCT Patent Appl.WO 55/017连5 .Pub.25.04.ss.Appl.US543975,filed 20.10.83〔译自CBA,1985,(7),2325〕 挪威假丝酵母(Ca,dida norve夕ensis)菌株MF一56,ATCCZo686和MF一78,ATCC 20732,和产阮假丝酵母(C.耐1115)菌株NRRLY一900在专门设计的培养基中可以产生L一抗坏血酸。本专利还披露了使这些微生物或L一半乳糖酸一1,4一氧化酶在某种基质如海藻酸钠中固定化的方法。(程克棣)862249生产一种光活性3一(3,4一二经苯)丝氮酸及其被保护的衍生物的生产方法仁专,英〕了Vm…     

DNA分析与扩增

924297降解2,4一二氯苯氧乙酸(2,4一O)的质粒pJP4的PCR和基因探针检测〔英〕/Neilson,J.W.一/Appl .Environ.Mierobiol一1992,55(4)一1271~1275[译自DBA,1992,11(11),92-06019〕 用PCR和DNA探针灵敏性检测2,4一D降解菌真养产碱菌(Azca不‘夕e,ese:t,o,hos)JMPi34(含质粒pJP4)。甩2个20一聚寡核普酸DNA引物扩增pJP 4 tfdB基因的Zosbp区,并优化扩增条件 (94℃变性1分30秒、72℃退火并延伸1分钟、72℃最后延伸7分钟,共进行25轮)。PCR和5产端标记DNA探针的杂交都是对含pJP4或其衍生质粒pRO103菌株专性的。检测灵敏性为30oocfu…     

响应面法优化产朊假丝酵母培养及干燥工艺

本研究旨在优化产朊假丝酵母液体培养参数及干燥保护剂配方,提高产朊假丝酵母液体培养数量,制备出高复苏率的活性干酵母。以装液量、转速、温度和培养时间为影响因素,设计单因素试验,并采用Box-Behnken试验设计及响应面分析法优化产朊假丝酵母液体培养方案。在此条件下培养酵母,以L-谷氨酸钠、乳糖、脱脂奶粉为影响因素进行单因素保护试验,并采用响应面分析法优化干燥保护剂的组合。结果表明,产朊假丝酵母最佳培养条件为装液量45 mL/250 m L,转速200 r/min,温度30℃,培养时间24 h。在此条件下,培养的产朊假丝酵母数量可以达到9.34×10~8CFU/mL;最佳保护剂组合1%L-谷氨酸钠、12%脱脂奶粉、6%乳糖,经干燥后,产朊假丝酵母复苏率达到81.9%。此时活菌数7.65×10~8CFU/g,比未加保护剂组提高了3.83倍。     

热带假丝酵母产生子囊孢子的条件及单倍体分离的研究

本文研究了诱导热带假丝酵母子囊孢子产生和子囊破壁的条件,以及单倍体分离和鉴别方法.结果表明:NaAc、KCl这两种成分即可满足热带假丝酵母的产孢营养要求,在含有NaAc 8.2 g/L、KCl 1.8 g/L的琼脂培养基中,28℃培养7 d,热带假丝酵母细胞的产孢率可达到47.5%;单纯使用蜗牛酶对破除热带假丝酵母子囊壁的效率甚低,酶解液加入适量的石英砂同时振荡处理4 h左右,可以显著提高对热带假丝酵母子囊破壁速率.用这种方法处理,绝大多数子囊壁均可破除.子囊破壁处理后再以52℃处理10 min杀死残余的营养体细胞,分离物的单倍体孢子比例可由灭活处理前的48%,提高到76%以上.     

抗生素和干扰素

931246定位于Laetoeoceu:lactis ATCC 11454染色体上的肚类抗生素乳酸链球菌肚前体的编码甚因〔俄〕/Rumer,L.M.…j Biotekhnologiya一1092,3一20~24〔译自DBA,1992,11(21),92一11798〕 通过接合作用将编码肤类抗生素乳酸链球菌肤的生物合成基因由Lae名oeoee翻s乙aet‘:ATCC11‘54转移到少质粒的 L.lac“s菌株(LMo23o、LPIT6)中。采用不同方法,从产乳酸链球菌肤的转接合体中分离出质粒的所有尝试均告失败。利用乳酸链球菌肚前体甚因的寡核普酸探针进行的印迹杂交实验表明,编码基因位于供体和转接合体的染色体上。(陶冶)931247卡那…     

组织与原生质体培养

921417马铃薯悬浮细胞再生植株表型和蛋白质的变异〔英〕/Lindeque,J.M.…厂Euphytiea一1991,54 (1)。一41~44〔译自DBA,1991,10(15),91一10501〕 由体外培养的马铃薯(召ola。。。t。吞e,o;。二)小植株茎节间切段诱导愈伤,并将愈伤培养在含3mg/12,4一D和0.2mg/l KN的改良MS培养基上。将易碎愈伤接到含1.5 mg/l2,4一D、0.5 mg/lNAA和0.25mg/1 KN的MS液体培养基中。继代3次后,将悬浮细胞过滤并植板于固体Lam培养基。变绿后3周,将其转到植物再生培养基上。小植株转到MS培养基上迸一步生长和生根。测定的27株植株中,3株生长不良、16株…     

基因标记、转化、表达与检测

再于72℃下放置2.5分钟;用2种BLB引物对共扩增时,94℃1分钟(第一次循环3.5粉爹钟),在65922074利用pCR检测牛淋巴瘤中的牛白血病病那〔英〕/Rasmussen,H.B.…了Bioteeh。ForumEur一2991,s(9)一527~519〔译自DBA,1901,10(23),91一13308〕 利用聚合酶链反应(PCR)从含30只雌牛淋巴瘤样品的材料中将由牛白血病病毒(BLV)引起的肿瘤与其它病因的肿瘤区分开。设计了两种扩增DNA BLV一专性片段的引物对,还设计了第三种识别牛K一酪蛋白基因启动子区的引物对,以控制模板的质量。利用Taq DNA一聚合酶扩增DNA(0 .25件g),条件如下:用1种BLV…     

植物生理学中常用的符号、单位和缩写

单位名词词头从兆价哟k千(10,)d分(10一1)e厘(10为。毫(10一a)料微(1O月。纳(10一吟P皮(10一”)浓度、体积、质量和时间等单位及有关名词a年人埃(0 .1她)atm大气,大气压A州。邪0 nm波长下吸光串.C摄氏度CD圆二色性Ci居里cprn每分钟计数(同位素脉冲)叮.栽培种云天D道尔顿dpm每分钟核蜕变数DW干重,V电子伏特FB远红光PW鲜重g克g/L每升克。L。气液色谱法h时五a·公顷HPL。高效液相色谱法IR红外线及.米氏常数L(l)升(常用时用L,复合名词中用l)lx勒〔克斯〕(光照度单位)。米爪in分mol摩[尔〕二oI/L摩〔尔〕浓度MW分子最(图、表中用)OD…     

农业其它

924227通过玻玻化低退保截苹果和梨的苗尖〔英〕/N iin。,T.…1 Plant Cell TissueorganCulture.一1992,25(3)一261~266〔译自DBA,1992-11(8),92一04541〕 经低温硬化(5℃、8五r光周期下3周)的若干种苹果和梨外植体的苗尖置于含。.7M蔗糖的MS培养基上,5℃、8 hr光周期下预培养1天。然后于25℃下将苗尖转到玻璃化溶液 PVSZ中,PVSZ为含30%甘油、15%乙烯乙二醇、15%二甲基亚矾的MS培养基(含。.4M蔗搪)。在25℃脱水80分钟后,将苗尖浸于液氮中。快速升温后,将芽尖投入含1.2M蔗糖的MS中,然后植板于MS上。在8周内产生直接的苗伸长。平…     

植物遗传工程

951765通i生徽弹蠢击悬浮细胞培井物和电漱原生质俸稳定转化除草拊抗性甘蔗】皇【伤[英]/Chowdhury,M.K.U.…,Plant Cell Rep.一1992,11(10).一494～498[译自DBA,1992,1l(23),92-13089~ 用高速微弹轰击悬浮细胞培养物或电激原生质体船稳定地转化甘蔗(疗口cc.j14r口m o,,icimale)杂交种CP72—121.O。用外被质粒pBARGUS的金粒轰击8日龄培养物。质粒含玉米醇脱氢酶基因启动子调控的声一葡糖苷酸酶报道基因,还含有CaMV355启动子调控的编码除草剂抗性的bar选择标记基因。转化成功率为每四次轰击后过滤获得一个除草削抗性集落。用电激抉…     

酿酒酵母和产朊假丝酵母原生质体的形成、再生及属间融合

使用由亚硝基胍诱变所得到的营养缺陷型作为单倍体融合亲株的核基因标记,同时也采用线粒体球红霉素抗性突变株的小菌落形式作为融合亲株的线粒体基因标记。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和产朊假丝酵母(Candida utilis)两亲株原生质体的制备是用对数生长早期的细胞在蜗牛酶和0.7M KCl及β-巯基乙醇或二巯基苏糖醇的作用下完成的。二者的原生质体的形成率在30—60分钟内达到90—99％。原生质体再生率,酿酒酵母最高为29—35％,产朊假丝酵母为7.5％。两亲株的原生质体在35％PEG(M.W.6,000),10mM CaCl_2条件下被诱导融合。在基础培养基上,长出以营养互补为标记的融合菌株。融合频率为10~(-5)—10~(-6)。试验表明,这些融合菌株具有杂种的性质。其中一株杂合子在同化D-木糖、纤维二糖等的能力上比亲株明显增强。     

酶和发酵工程

872026腺昔酸激酶及其生产过程〔专,英」/Imahori,K.…了US Patent US 4554272.Pub.22.04.86.APpl.JP 55一141405,川ed 09.10.50〔译自CBA,1986,(s)2991〕 通过培养一种杆菌产生抗热的腺昔酸激酶,在50℃下温育15分钟后,酶活性可保持80%。(高吉寅)872027发酵生产苯丙氨酸解氨酶的方法〔专,英〕/F inkelman,M.A…了US Pa-tent US 4584273.Pub.22.04.86.Appl.US 547239,filed 31.10.53〔译自CBA,1986,(8)·,2992」 一首先在促进有氧生长条件下,继而在厌氧静止条件下培养红酵母属(Rhodotorula)或红冬抱酵母属(RhodosPor‘d沁。)酵…     

核酸及蛋白质合成、提取、纯化

921196C产一甲甚一2’脱级核昔5尹三磷酸的合成及其在ONA聚合醉催化的ONA合成中的底物特性〔俄〕/Chid-geavadze,2.G.…了Bioorg.Khim一1901,17(5)、一6了s~654〔译自DBA,1991,10(15),91一10248〕 制备了C产一甲基一2产一脱氧核昔5尹三磷酸,并研究其在DNA聚合酶催化的DNA合成中的底物特性。在各种底物同系物存在下,采用一种14碱基引物、M13mp10DNA、逆转录酶和末端转移酶等,合成了DNA。在反转录反应中,同系物被加成到引物的3产端。三磷酸化合物本身却不能作反转录酶或末端转移酶的底物。在由牛胸腺DNA聚合酶一a和大肠杆菌DNA…     

食品上的应用

920754用季氏假丝醉母由O一木箱生产木精醉〔英万Meyr-ial,V.…厂Bioteehnol.Lett。一1991,13(4)。一251~256〔译自DBA,1991,10(12),91-06933〕 研究了在微需氧条件下季氏假丝酵母(C“-“dag即玄11哀e,劝。:d公云)NRC557s由木糖生产木糖醇,以及发酵个别的非木糖半纤维素衍生糖的能力。在30“C、搅拌速度15。印m和原始pH6的条件下进行发酵。木糖转化为木糖醇的转化率为。.63g/g,产生的乙醇量可忽略不计。季氏假丝醉母在原始搪浓超过1109/l的D一木糖培养基上培养时可获高转化率和木糖醇产率。由3009/lD一木糖获得的最终木糖醇浓度为221…     

质粒研究与载体构建

920009构睡能在AmyeolatoPsis mediterranei中盆御的杂交质较〔英〕/Lal,R.…/ApPI.Environ.Mierobiol一2991,57(3)一665~671[译自DBA,1991,10(9),91一94832〕 从A.仍e“‘e,,“。e‘DSM43387中分离到质粒pA387(29.6kb)。经原生质体化、澳乙咤或热处理可低频消除该质粒。该质粒属游离型,不整合到染色体中。将一个5.Ikb的pA38了片段擂人大肠杆菌载体质粒pDM10中,构建成杂交质粒pRLI。该质粒可被电激转化至A.仍。J“e,,a。。云及A。o,亏e:‘a乙妞s中。对前者,用i2.skV/em、10。6也sec条件,转化频率为22。。/拼9 DNA;对后者,用7.s…     

培养方式对富硒产朊假丝酵母性能的影响

在摇瓶和5 L发酵罐水平上分别考察亚硒酸钠浓度及其添加方式对高性能(高有机硒含量和高谷胱甘肽含量)富硒产朊假丝酵母制备的影响.结果表明:亚硒酸钠添加质量浓度为15 mg/L时,产朊假丝酵母具有较好的富硒效果,但一次性添加对酵母细胞有较大的毒害作用.采用分批次添加亚硒酸钠的方法获得了较好的制备高性能富硒产朊假丝酵母的培养方式:发酵起始添加L-蛋氨酸10 mmol/L,并在发酵过程的12和15 h分别添加亚硒酸钠10和5 mg/L.在此培养方式下,产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽和有机硒含量分别达到172.3 mg/L和1194 μg/g.     

染色体DNA转化原生质球构建解烃工程菌

用供体菌C_(20-11)和D_(36-3)染色体DNA转化受体菌T_3原生质球。采用5mg/ml溶菌酶,37℃水浴1小时制备原生质球。原生质球形成率为99％,再生率为72.5％。在30％、PEG6000和0.1MCaC1_2作用下,供体DNA转化受体原生质球。我们用上述条件构建了能够同时降解以下四种碳源:苯甲酸、萘、樟脑、十六烷的工程菌株TCD32-14-1。     

基因标记、转化、表达与检测

923225用含潮霉素B抗性基因的质粒转化尊麻青霉〔英〕/K iuehi,N.…了Agrie.Biol.Chem一1901,55(12)一3053一3057〔译自DBA,i,92,11(5),92一02401〕 尊麻青霉(pe介云e云乙l云“m ur乙云cae)Ji(ATCC48163)细胞经Novozym一234处理,制成原生质体,并以10%的频率获再生。转化体系采用了质粒pDH25MC及其衍生质粒pDH25MCi、pDH25MCZ、pDH25MC3、pDH25MC4及pDH25MCS,它们分别含有2.1、1.1、0.9、o。s、及。。skb的尊麻青霉基因组片段。其中,pDH25MC含有细菌潮霉素B抗性选择标记(h Ph)、构巢曲霉(A卜尹er夕￡11“S:‘dula”,)trp…