CD47基因对食道癌细胞增殖的影响

本研究将CD47-si RNA转染至食道癌细胞,采用蛋白免疫印迹检测食道癌细胞中CD47蛋白的表达,MTT法检测CD47-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)食道癌细胞增殖状态,蛋白免疫印迹检测CD47-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)食道癌细胞中PCNA蛋白表达,DCFDA染色流式细胞仪检测食道癌细胞CD47-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)中ROS水平,以探究CD47基因对食道癌发生发展的影响。研究结果表明,CD47-si RNA转染组食道癌细胞中CD47蛋白明显低于对照组;CD47-siRNA转染组食道癌细胞增殖率显著低于对照组(p<0.05);CD47-siRNA转染组细胞增殖相关蛋白PCNA低于对照组(p<0.01);CD47-siRNA转染组食道癌细胞中ROS水平明显高于对照组(p<0.05)。本研究初步认为:CD47-siRNA可降低食道癌细胞中CD47蛋白表达,抑制食道癌细胞的增殖并增加食道癌细胞中ROS水平。     

PTEN基因通过调控ROS抑制结肠癌细胞增殖

为了探讨PTEN基因在结肠癌中的作用以及其机制研究,MTT法检测结肠癌细胞细胞增殖;蛋白免疫印迹检测结肠癌细胞中Ki67蛋白的表达;DCFDA染色流式细胞仪检测结肠癌细胞中ROS水平。结果表明PTEN基因能明显抑制结肠癌细胞细胞增殖;PTEN基因能显著降低结肠癌细胞中Ki67蛋白的表达;细胞内ROS水平在PTEN基因处理组中明显高于空质粒结肠癌细胞组;NAC预处理可明显抑制PTEN基因抑制的细胞增殖;NAC预处理可显著抑制PTEN基因对结肠癌细胞Ki67蛋白的降低作用。PTEN基因能够抑制结肠癌细胞增殖并上调结肠癌细胞内ROS水平。     

雌激素受体α基因多态性及其表达与子宫内膜增生的关系

目的:探讨子宫内膜增生症雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)基因多态性及其与表达的关系.方法:选择江西地区150例子宫内膜增生症患者为实验组,100例子宫内膜正常妇女为对照组.应用分子生物学的方法分析ERα基因Xba Ⅰ和PvuⅡ限制性片段长度多态性,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分析ERα表达.结果:(1)X等位基因频率的变化与子宫内膜增生程度具有相关性P＜0.01,不典型增生组中XX型频率是正常组的4倍.随着子宫内膜增生程度的增加,P等位基因频率减少,人群中PP基因型频率逐渐减少;(2)单纯性增生、复杂性增生ERαmRNA和蛋白表达均比正常组高(P＜0.01),而不典型增生ERαmRNA和蛋白质表达均比单纯增生、复杂增生低(P＜0.01).结论:ERα基因多态性与子宫内膜增生发生及增生程度存在相关性.ERα表达的下调与子宫内膜不典型增生的发生有关.     

C-myc对子宫内膜细胞增殖和凋亡的影响

为了通过子宫内膜细胞实验检测原癌基因C-myc对子宫内膜癌发生发展的影响,本研究用蛋白免疫印迹法分别检测C-myc转染组和空白对照组中C-myc蛋白的表达情况;细胞计数盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法分别检测C-myc转染组和空载体转染组的子宫内膜细胞活力;蛋白免疫印迹法分别检测C-myc转染组和空载体转染组的子宫内膜细胞增殖相关蛋白Ki67、凋亡相关蛋白Bax以及Bcl-2的变化;Annexin/PI流式分别检测C-myc转染组和空载体转染组的子宫内膜细胞凋亡率的变化。C-myc转染子宫内膜细胞后,细胞中C-myc蛋白表达明显高于空白对照组;C-myc转染子宫内膜细胞后,细胞活力显著低于空载体转染组(p0.05),Ki67蛋白的表达明显高于空载体转染组(p0.05);C-myc转染子宫内膜细胞后,促凋亡相关蛋白Bax的的表达显著高于空载体转染组(p0.05)以及抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显低于空载体转染组(p0.05);C-myc转染子宫内膜细胞后,细胞凋亡率明显高于空载体转染组(p0.05)。本研究表明,C-myc能够促进子宫内膜细胞增殖并诱导细胞凋亡,子宫内膜细胞的增殖过度和凋亡失衡在子宫内膜癌的发生发展中具有重要意义。     

催产素受体基因沉默的大鼠子宫平滑肌原代细胞模型的构建及鉴定

目的建立催产素受体(oxytocin receptor,OXTR)基因沉默的细胞模型,为催产素受体相关的研究提供技术基础。方法设计3个阳性RNA干扰(RNA interference, RNAi)序列(Oxtr-RNAi-1、Oxtr-RNAi-2、Oxtr-RNAi-3)及一个阴性序列(con-RNAi),合成短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰片段用于实验。以慢病毒为载体,构建绿色荧光蛋白(green-fluorescent protein,GFP)标记的Oxtr干扰体系。将Oxtr-RNAi慢病毒感染原代大鼠子宫平滑肌细胞,通过观察GFP荧光表达比较各组的转染效率,并用Western blot和荧光定量PCR分别检测OXTR蛋白和m RNA表达水平,来比较各组的干扰效率。结果慢病毒感染5d后,感染Oxtr-RNAi-1病毒的细胞GFP荧光表达细胞比例最高,OXTR蛋白和m RNA水平最低。结论成功构建了沉默Oxtr的子宫平滑肌细胞,为进一步研究催产素受体相关的分子机制奠定实验基础。     

雌激素受体β基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型的建立

目的建立雌激素受体β基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型,为进一步研究雌激素受体β基因在子宫内膜异位症发生发展过程中的作用提供平台。方法用外科手术方法对16只β基因敲除小鼠进行自体子宫移植,术后14d、21d取病灶组织进行光镜观察分析。结果建模成功率达95．8％,可形成明显囊肿,内含囊液,囊肿内壁有子宫内膜上皮细胞生长。结论应用本方法可建立稳定的子宫内膜异位症转基因小鼠模型,便于研究雌激素受体β亚型及其相关基因、蛋白在子宫内膜异位症发生发展过程中的作用机制。     

PTEN蛋白的异常表达与卵巢子宫内膜异位症恶变的关系

目的:探讨PTEN蛋白表达与与卵巢子宫内膜异位症(内异症)恶变的关系.方法:应用免疫组化方法检测21例子宫内膜异位症相关卵巢癌(内异症相关卵巢癌),10例不典型卵巢子宫内膜异位症(不典型内异症)及23例内异位症中PTEN蛋白表达.结果:PTEN在内异症和不典型内异症组阳性表达率分别为82.61%和60.00%,内异症相关卵巢癌组中PTEN蛋白阳性表达率为42.86%.内异症相关卵巢癌组PTEN蛋白表达与内异症组相比差异有显著性(p＜0.05). PTEN蛋白表达与内异症相关卵巢癌患者的年龄、病理类型无相关性(p＞0.05),与分化程度、临床分期相关(p＜0.05),在内异症相关卵巢癌中,临床分期早,分化程度高的PTEN表达显著高于分期晚,分化差的.结论:PTEN蛋白表达缺失可能参与了卵巢子宫内膜异位症恶变,有可能成为一个很有潜力的诊断指标及新的治疗靶点而应用于临床.     

诱导子宫内膜异位症患者子宫内膜上皮细胞调亡研究

目的:研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRHα)对子宫内膜异位症(EMs)患者在位内膜蛋白表达的影响,为EMs的治疗提供依据。方法:94例EMs患者随机分为两组,每组47例,均实施腹腔镜手术治疗,对照组未给予药物治疗,观察组给予曲普瑞林皮下注射,28日/次,注射3次,术中及治疗三个月后观察组分别用取内膜器取少量子宫内膜组织标本,采用免疫组化法法、TUNEL染色法和Western blot检测组织内Bcl-2、Caspase3、GRP78等表达情况,并观察治疗效果。结果:治疗后观察组疼痛视觉模拟评分(VAS)为(2.13±0.69)分,低于对照组的(2.62±0.71)分(P0.05);观察组1年内妊娠率及总妊娠率分别为38.30%、51.06%,均高于对照组的19.15%、29.79%(P0.05);治疗后观察组Bcl-2、Caspase3表达量分别为(1.54±0.28)、(3.20±0.65),均高于对照组的(1.38±0.15)、(1.24±0.27)(P0.05);治疗后观察组GRP78表达量为(0.46±0.17),低于对照组的(0.61±0.24)(P0.05)。结论:GnRHα可缓解EMs患者下腹痛、痛经、性交痛等症状,提高妊娠率,其机制可能与GnRHα调控上皮细胞Bcl-2、Caspase3、GRP78等的表达有关。     

TGF-β1-509(C/T)基因多态性与子宫内膜异位症相关性的研究

目的:研究转化生长因子(TGF-β1)-509(C/T)基因多态性与子宫内膜异位症易感性的关系。方法:采用PCR-RFLP法和PCR产物直接测序法,检测80例子宫内膜异位症和80例正常对照组TGF-β1-509(C/T)基因型及等位基因分布。结果:子宫内膜异位症组TGF-β1-509CC、CT、TT基因型频率分别为20%、35%、45%,C和T等位基因频率分别为37.5%和62.5%;对照组中TGF-β1-509CC、CT、TT基因型频率分别为30%、32.5%、37.5%,C和T等位基因频率分别为46.25%和53.75%。基因型频率和等位基因频率在两组之间无显著性差异(P>0.05、P>0.05)。结论:TGF-β1-509(C/T)基因多态性与子宫内膜异位症无关联。     

原因不明子宫内膜薄雌激素受体α基因多态性及其表达

旨在探讨原因不明子宫内膜薄雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)基因多态性及其与表达的关系。选择120名原因不明子宫内膜薄患者为试验组,120名子宫内膜正常人群作为对照组。应用分子生物学的方法分析ERα基因PvuⅡ,XbaⅠ限制性片段长度多态性。通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法分析ERα表达。结果显示,P基因型频率试验组为47.1%,对照组为30.0%,OR值:2.076。试验组X基因型频率为20.8%,对照组为30.4%,OR值:0.602。Pvu II和Xba I限制性片段长度多态性在两组中均呈多态性分布。试验组ERα的mRNA和蛋白质表达均比对照组降低(P0.05)。由此得出,ERα基因多态性与原因不明子宫内膜薄有关,P等位基因可能是其危险因素,X等位基因可能是其保护因素。ERα在子宫内膜中原因不明子宫内膜薄中的表达低于子宫内膜厚度正常子宫内膜。     

TIMP-1基因缄默削弱SH-SY5Y细胞的增殖潜能并诱导其凋亡增强

前期研究发现,人基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)在唐氏综合征（Down’s syndrome ,DS)胎儿脑组织内表达下调．为了探讨TIMP-1表达下调参与DS脑病变发生的可能机制,本研究以人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）为模型,观察TIMP-1基因沉默后对其增殖和凋亡的影响．应用LipofectaminTM2000将TIMP-1特异性短发卡 RNA( short hairpin RNA,shRNA)导入SH-SY5Y细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达TIMP-1-shRNA细胞株;应用RT-PCR、real-time PCR和Western 印迹对干扰效率进行鉴定：与SH-SY5Y细胞相比,无论在mRNA水平还是蛋白水平,SH-SY5Y-TIMP-1-shRNA细胞中TIMP-1的表达显著下调（下调率接近100%）．结果显示,已成功构建了TIMP-1基因沉默的SH-SY5Y细胞模型．在此基础上,通过MTT检测发现,TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞增殖减慢;流式细胞仪和荧光显微镜凋亡检测显示,TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞凋亡明显增加．这些研究结果表明,TIMP-1基因沉默能削弱SH-SY5Y细胞的增殖能力并增强SH-SY5Y的凋亡效应,提示TIMP-1可能是通过影响神经细胞的增殖和凋亡参与DS智力低下的发病过程．     

毒毛花苷通过Nrf2抑制子宫内膜癌细胞增殖活性

摘要 目的：通过研究毒毛花苷对核因子2相关因子2 (nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)的抑制作用,深入探讨其抑制子宫内膜癌细胞增殖的作用机制。方法：（1）采用细胞增殖实验观察不同浓度的毒毛花苷对Ishikawa细胞增殖的影响;（2）通过克隆形成实验观察毒毛花苷对Ishikawa细胞增殖的作用;（3）采用蛋白免疫印迹法检测经毒毛花苷处理后,Ishikawa细胞Nrf2蛋白表达水平的变化。结果：经毒毛花苷处理后,Ishikawa细胞增殖受到显著抑制且呈剂量依赖性。Nrf2蛋白表达下调。结论：毒毛花苷可能通过下调Nrf2蛋白水平,从而抑制子宫内膜癌的恶性生物学行为。     

Antagonizing TGF-beta induced liver fibrosis by a retinoic acid derivative through regulation of ROS and calcium influx

Transforming growth factor-beta1 (TGF-β1) mediates the regulation of extracellular matrix via reactive oxygen species (ROS) and calcium influx, both are activators of hepatic stellate cells (HSC) which play a critical role in hepatic fibrogenesis. Hence one can use ROS assay as the main screening tool for molecules that might antagonize the process of liver fibrosis. A retinoic acid derivative isolated from the mycelium of Phellinus linteus that down-regulates ROS generation and calcium influx in HSC-T6 cells was thus obtained in our screening process. The retinoic acid derivative also reverses an early liver fibrosis, as assayed by liver contents of hydroxyproline, α-smooth muscle actin (α-SMA), and collagen 1A2, in an early liver fibrosis model we established previously where an inducible expression vector containing a TGF-β gene was hydrodynamically transferred into a testing animal. Retinoic acid derivative thus acts both in vitro and in vivo to prevent liver fibrosis at an early phase.     

Neuroprotective potential of combination of resveratrol and 4-amino 1,8 naphthalimide in experimental diabetic neuropathy: Focus on functional,sensorimotor and biochemical changes

The present study investigated whether combination of resveratrol and 4-amino 1,8 naphthalimide (4-ANI) is effective in the development of diabetic neuropathy (DN). After 6 weeks of diabetes induction, rats were treated for 2 weeks with resveratrol and 4-amino 1,8 naphthalimide (4-ANI) either alone or in combination. Experimental end points included functional, behavioural and biochemical parameters along with PAR immunohistochemistry and were performed at the end of treatment. Combination of resveratrol (10 mg/kg) and 4-ANI (3 mg/kg) attenuated conduction and nerve blood flow deficits and resulted in amelioration of diabetic neuropathic pain. Significant reversal of biochemical alterations (peroxynitrite, MDA and NAD levels) were also observed, as well as PAR accumulation in the sciatic nerve. This study suggests the beneficial effect of combining resveratrol and 4-ANI in experimental diabetic neuropathy.     

Immunomodulation of macrophages by methylglyoxal conjugated with chitosan nanoparticles against Sarcoma-180 tumor in mice

Methylglyoxal (MG), the potent anticancer agent has been conjugated to a nontoxic, biocompatible polymer, chitosan, to protect it from in vivo enzymatic degradation. This polymeric complex, ‘Nano-MG’ shows remarkable antitumor property and elicits macrophage-mediated immunity in tumor bearing mice on intravenous (0.4 mg/kg body wt/day) treatment more efficiently than MG (20 mg/kg body wt/day). These activated macrophages appear more in numbers in the peritoneum and produce more superoxide and nitrite. Moreover, immunomodulatory cytokines and surface receptors of these macrophages like iNOS, IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-6, M-CSF, TLR-4 and TLR-9 also exhibit marked up-regulation in Sarcoma-180 tumor bearing mice after Nano-MG treatment compared to untreated tumor bearing counterpart. Hence, Nano-MG acts as an immunostimulant in tumor bearing mice to combat cancer at conspicuously lower dose, probably due to its longer circulation time in blood.     

壳寡糖可降低阿尔茨海默症模型细胞内活性氧水平

用荧光显微成像测量了两种阿尔茨海默症（Alzheimer's disease,AD）模型细胞即swe型N2a细胞和Δ9/swe型N2a细胞中活性氧的水平。培养液中适当浓度的壳寡糖降低了两种模型细胞中的活性氧水平,这一抑制作用随壳寡糖浓度的变化而变化。壳寡糖对两种模型细胞作用存在差别,提示壳寡糖抑制AD模型细胞内活性氧可能有不同的途径。     

在肝癌细胞SK-Hep1中沉默STAT3基因增强sorafenib疗效的初步研究

目的:研究STAT3在肝癌细胞SK-Hep1对sorafenib抗性中的作用,并探讨STAT3基因沉默在增强sorafenib肝癌疗效中的作用。方法:应用基于shRNA的基因沉默技术在肝癌细胞SKHep1中敲减STAT3;用CCK8法检测细胞的生长情况与对sorafenib的敏感性;蛋白印迹法(Western blot)检测STAT3、p-STAT3(Y705)、p-STAT3(S727)以及其下游蛋白的表达变化。结果:成功构建了STAT3敲减的细胞株SK-Hep1-sh STAT3。该细胞中STAT3蛋白表达降低,细胞增殖明显受到抑制。Sorafenib的处理下调了STAT3的磷酸化水平及其下游蛋白Mcl-1和Cyclin D1的表达。STAT3基因敲减的SK-Hep1细胞,对sorafenib的敏感性增强。结论:基于shRNA的STAT3基因沉默能明显抑制SK-Hep1细胞增殖,提高细胞对sorafenib的敏感性,有望成为提高sorafenib抗肝癌疗效的一种新手段。     

镉胁迫引起烟草悬浮细胞程序性死亡

镉胁迫会造成烟草悬浮细胞大规模死亡。通过TUNEL技术和琼脂糖凝胶电泳技术的检测发现,这种细胞死亡伴随有典型的DNA“梯形带”出现,表明这种由Cd胁迫引起的细胞死亡是一种程序性死亡。受胁迫细胞氧化性增强及细胞中丙二醛(MDA)水平升高,说明Cd胁迫时会在细胞中造成大量活性氧(ROS),暗示烟草细胞的程序性死亡可能与ROS有关。