MNNG诱导转化的人胎儿皮肤成纤维细胞系的建立

用甲基硝基亚硝基胍处理正常人胎儿皮肤成纤维细胞４次（剂量前２次为４μｇ／ｍｌ,后２次６μｇ／ｍｌ,每次处理３天,间隔４－６天）,建立了可长期传代的ＨＦＴ８９细胞系。该细胞具有以下转化细胞特性;细胞呈梭形。排列紊具有以下转化细胞特性：细胞呈梭形,排列紊乱,密集时可重叠生长,核畸形明显,核质比大;饱和密度增高;在软琼脂内形成克隆;微丝束减少,紊乱;染色体异倍化;裸小鼠接种成肿瘤。     

大熊猫皮肤成纤维细胞系的建立和冷冻保存

简要介绍了大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）皮肤成纤维细胞的建系过程和冷冻保存。在研究中,采用200IU／ml的胶原蛋白酶Ⅰ酶在4℃下解离皮肤组织。在DME／Ham’sF12和M199两种培养液中添加100Iu,ml青链霉素、5pg,ml两性霉素B、5pg／ml M-Plasmocin^TM、2mmol／L L-Glu、10μg/ml的胰岛素、40ng/ml EGF和20％（原代）或10％（传代）FBS组成培养液,分别用于细胞的贴壁培养和植块培养,均获得培养成功。用PBS添加0．4％BSA、0．1mol／L蔗糖和10％DMSO组成的冷冻保存液对细胞进行冷冻保存,解冻后获得93．258％的活率,解冻细胞再次培养能正常生长。研究结果表明,大熊猫皮肤成纤维细胞建系和冷冻保存获得成功。     

c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞增殖的调节作用及机制

c-ski是成纤维细胞增殖的复杂调节子,它对中胚层来源的皮肤成纤维细胞增殖的作用还不清楚。在观察正常成纤维细胞周期c-ski表达的时相特点的基础上,通过体外转染c-ski,观察它对细胞增殖活性、细胞周期进展以及周期蛋白表达的影响。结果显示：c-ski mRNA表达在加入血清后开始升高,在细胞周期G,期的高峰期达到峰值,S期显著下降,在G2／M期维持在较低的水平：转染的c-ski可以以剂量依赖的方式增加细胞的增殖活性,并且可以逆转Smad3对细胞增殖活性的抑制作用;C-ski使成纤维细胞提前达到G0／G1期的最低点,进入S期：同时细胞G1期周期蛋白cyclinD的表达增加。这些结果表明：C-ski是皮肤成纤维细胞G1期的调节子,通过加快G1期进展促进增殖,抑制Smad3活性,促进cyclinD的表达可能与这一作用的分子机制有关。     

皮肤成纤维细胞永生化的研究进展

正常体细胞的生命周期都是有限的 ,经过一定数目的分裂后 ,会进入增殖抑制状态。永生化细胞是近年来生物科学探索较多的领域之一。因为它不仅能为细胞生物学的研究提供性状稳定的研究对象 ,还为人类实现器官再生开辟了新方向。所以皮肤成纤维细胞的永生化对于皮肤疾病以及皮肤组织工程的研究都具有非常深远的意义。就皮肤成纤维细胞的永生化的研究作一阐述 ,并讨论其应用前景和可能面临的问题     

自噬对过氧化氢诱导的2BS早衰细胞具有保护作用

过氧化氢诱导的2BS应激性早衰细胞后,自噬被发现增多.自噬特异抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA ）阻断年轻和早衰的2BS细胞的自噬作用36 h,用共聚焦显微镜,分析转染了自噬特异标志GFP-LC3融合质粒的年轻和早衰细胞,发现细胞自噬颗粒均明显减少,且GFP-LC3染色阳性/ 细胞数目也大大减少,说明3-MA有效地阻断了细胞的自噬过程.分别用流式细胞术和荧光显微镜分析年轻和早衰细胞的凋亡情况,发现年轻的2BS细胞自噬阻断后凋亡未见显著变化,而早衰的细胞凋亡明显增加,且有细胞坏死.由此推断,3-AM可使过氧化氢诱导的2BS早衰细胞自噬明显减少,而凋亡被诱导增多,提示自噬对过氧化氢诱导的早衰细胞具有避免凋亡和维持存活的保护作用.     

全身放射损伤对皮肤伤口成纤维细胞参与组织修复能力的影响

合并全身放射损伤的创伤（放创复合伤）是一种重要而有代表性的难愈性创伤,其难愈机制尚未完全阐明,成纤维细胞是最为重要的组织修复细胞,其辐射敏感性较低,为了明确放创复合伤时合并的放射损伤是否对伤口成纤维细胞有直接损伤作用,以及这些损伤作用对创伤愈合的影响,实验检测了分离,培养的放创复合伤和单纯创伤大鼠皮肤伤口成纤维细胞的增殖,凋亡及其他反映其参与组织修复能力的指标变化,结果发现,在去除全身因素和局部因素,特别是创伤局部细胞因子和细胞外基质对成纤维细胞的反馈作用后,放创复合伤组伤口成纤维细胞增殖力,贴壁力和粘附力均显著弱于单纯创伤组,而成纤维细胞的凋亡率则显著增加,这些细胞表明,全身放射损伤对伤口成纤维细胞有直接损伤作用,使其参与组织修复能力显著受抑,这是合并全身放射损伤时创伤难愈的重要原因。     

尖顶羊肚菌胞外多糖提取物对皮肤成纤维细胞增殖和衰老的影响

不同浓度尖顶羊肚菌胞外多糖提取物作用人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）,检测对HSF细胞形态、细胞增殖、衰老相关β-半乳糖苷酶活性、羟脯氨酸含量的影响,探究尖顶羊肚菌胞外多糖提取物对HSF增殖和衰老的影响。结果显示,125μg/mL尖顶羊肚菌胞外多糖提取物使HSF细胞活力增加了25.2%,羟脯氨酸含量增加了12.1%,β-半乳糖苷酶活性降低了48.1%。说明适宜浓度尖顶羊肚菌胞外多糖提取物具有促进HSF细胞增殖、胶原蛋白合成,延缓细胞衰老的作用。     

Caveolin-1 siRNA对与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞自噬体表达影响的研究

为了探索乳腺癌相关的人成纤维细胞中窖蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)与自噬体的相关性及其对乳腺癌细胞的作用,该研究采用si RNA技术干扰成纤维细胞株ESF表达Cav-1,q RTPCR和Western blot确定si RNA干扰Cav-1表达的效果;Transwell insert方法共培养乳腺癌细胞株BT474和ESF细胞,单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverin,MDC)染色、激光共聚焦显微镜观察Cav-1 si RNA对自噬体表达的影响;q RT-PCR和Western blot检测Cav-1 si RNA对微管相关蛋白1轻链3II(microtubule-associated protein 1 light chain 3 II,LC3II)表达的影响;CCK-8方法检测BT474细胞的增殖和活力。结果显示,靶向Cav-1的si RNA下调了ESF细胞中Cav-1的表达;Cav-1 si RNA促进ESF细胞自噬体和LC3II的表达,转染了Cav-1 si RNA的ESF细胞与BT474细胞共培养对自噬体和LC3II的作用更为显著;BT474细胞在ESFsi Cav-1(ESF cells transfected with Cav-1 si RNA)细胞共培养条件下增殖显著加快。研究表明,Cav-1 si RNA促进了与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞自噬体和LC3II的表达,同时加快了与成纤维细胞共培养的乳腺癌细胞的增殖。     

不同麻醉药对瑞芬太尼诱发术后痛觉超敏的影响

目的:评价不同麻醉药对瑞芬太尼诱发术后痛觉超敏的影响。方法:40只尾静脉置管成功的成年雄性SD大鼠,根据不同麻醉方式随机分为5组(n=8):七氟醚麻醉组(S组);七氟醚+瑞芬太尼复合麻醉组(S+R组);小剂量丙泊酚麻醉组(Pro组);小剂量丙泊酚+瑞芬太尼麻醉组(Pro+R组);大剂量丙泊酚+瑞芬太尼麻醉组(HPro+R组)。在不同麻醉方式下建立大鼠后足切割痛模型并维持麻醉一小时,于术前24小时以及停药后6小时,24小时,48小时测定双后足的机械痛阈(PWT)及观测以上不同时间点切割足的累积疼痛评分(CPS)。结果:S+R组与S组相比,停药后6小时切割足的CPS增加(P0.05)、24小时双后足的PWT均下降(P0.05)。HPro+R在停药后各时间点切割足的PWT均高于Pro组(P0.001)、Pro+R组(P0.01)。与Pro+R组相比,HPro+R组在停药后各时间点切割足的CPS均低于Pro+R组(P0.05)。结论:吸入麻醉药七氟醚可加剧瑞芬太尼导致的术后痛觉过敏,而大剂量丙泊酚可抑制瑞芬太尼诱发的术后痛觉过敏。     

N-乙酰葡萄糖胺对人皮肤成纤维细胞透明质酸合成的影响

目的:研究外源性N-乙酰葡萄糖胺(NAG)对人皮肤成纤维细胞(HSF)透明质酸(HA)合成的影响,探索其作为护肤品成分的可能性。方法:分别用MTT、ELISA、改良Schales法检测不同NAG浓度下HSF的增殖、HA合成和分泌、对NAG的吸收率,RT-PCR测定NAG对HSF细胞透明质酸合成酶(HAS)3种同工酶HAS1、HAS2和HAS3 mRNA的影响。结果:MTT和改良Schales法结果显示,随NAG浓度升高,HSF细胞的增殖受抑制程度增加,对NAG的吸收率降低;ELISA结果表明,HSF细胞HA的合成对NAG呈剂量依赖性促进,5mmol/L浓度最佳;RT-PCR结果显示,HAS3 mRNA的表达在NAG浓度为3mmol/L和5mmol/L出现上调。结论:NAG可促进HSF细胞HA的合成和分泌,可能机制是NAG作为原料或者通过上调HAS3 mRNA表达水平来增加HAS活性从而提高HA的合成,提示NAG作为护肤品成分的可能。     

碱性成纤维生长因子对大鼠成肌细胞氧化应激损伤的作用及其机制

目的：探讨碱性成纤维生长因子（bFGF）下调氧自由基水平在大鼠成肌细胞氧化应激中的保护作用。方法：采用对数生长期大鼠成肌细胞,随机分为四组（n=6）：正常对照组（control）,单纯bFGF组（bFGF）,氧化应激组（H₂O₂）,干预组（bFGF+H₂O₂）。氧化应激组采用含100μmol/L H₂O₂的培养基继续孵育4 h。免疫组化检测B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）阳性沉积颗粒;免疫荧光观察活性氧自由基（ROS）水平、Bcl-2、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白（Bax）及细胞色素C（Cyt.C）表达;Western blot检测Cyt.C、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）蛋白表达情况。结果：与正常组比较,氧化应激组成肌细胞Bcl-2表达降低,ROS、Cyt.C表达显著增加（P < 0.05）。与氧化应激组比较,bFGF干预后的成肌细胞Bcl-2表达增加,ROS及Cyt.C表达减少（P < 0.05）。结论：bFGF对成肌细胞氧化应激具有保护作用,其机制可能与bFGF下调氧自由基水平、Bcl-2蛋白增加、Cyt.C表达减少有关。     

大鼠皮肤切伤后成纤维细胞EGFR胶原基因表达的影响

４５只大鼠,分成７个生前损伤组,１个死后损伤组和１个正常对照组。每组５只,背部皮肤切口造创,生前伤组按伤后０、５、１０、１５、３０、６０、９０、１２０ｍｉｎ不同时间和死后在伤口缘取皮,进行切片和免疫组化实验,观察ＥＧＦＲ的基因表达。结果表明,正常和死后组不表达,生前伤组表达区沿表皮基底层和皮下组织分布,表达随时间而增强。表达率Ｐ与时间Ｔ的对数呈高度正相关（ｒ＝０．９８５）。随建立了回归方程。用回归方程计算出的表达率和时间,接近实测值。根据回归方程推导,时间是以２为底表达率为参数的指数函数。它可能提示,时间Ｔ与成纤维细胞的分裂增殖周期和数量有关。表达率作为特征参数,标志着细胞膜ＥＧＦＲ传递信息的特性。说明细胞膜ＥＧＦＲ在相互传递信息中,相互影响表达结果     

羧甲基壳聚糖膜对皮肤成纤维细胞相容性研究

通过玻璃流延法制备不同分子质量的壳聚糖及羧甲基壳聚糖膜,以体外培养的人皮肤成纤维细胞作为对象,利用膜的浸渍液培养及膜表面直接培养法研究比较了两种多糖膜的细胞相容性.实验发现两种多糖膜的浸渍液对细胞均无毒性效应,生物安全性是小分子质量膜好于大分子质量膜,羧甲基壳聚糖膜好于壳聚糖膜.皮肤成纤维细胞在壳聚糖膜上的生长受到抑制,生长一段时间后细胞有聚集和脱落现象,而羧甲基壳聚糖膜上细胞能很好地贴附、生长,没有聚集和脱落现象.结果表明羧甲基壳聚糖膜具有比壳聚糖膜更优越的细胞相容性.     

东方田鼠皮肤成纤维细胞的分离培养及生物学特性

目的探索和建立东方田鼠皮肤成纤维细胞体外分离、培养的技术方法并观察其生物学特性。方法采用含10%小牛血清的Dulbecco改良Eagle培养液(DMEM)和1640两种培养体系,运用组织块贴壁法和胰酶消化法,分别对出生后1、3 d和5 d的东方田鼠乳鼠皮肤成纤维细胞进行原代分离、培养。苏木素-伊红染色及倒置相差显微镜下观察成纤维细胞形态和生长特性。结果 0.25%胰酶消化分离出生后1 d和3 d东方田鼠乳鼠皮肤较出生后5 d组织可获得较多数量细胞,成纤维细胞在体外快速贴壁生长,一般6～7 d长满培养瓶,细胞纯度高,HE染色细胞呈长梭形,胞核明显;DMEM和1640两种培养液均可用于东方田鼠皮肤成纤维细胞的培养,但细胞传代后生长趋缓,只可传代2～3次。本实验运用组织块贴壁法未能培养出皮肤成纤维细胞。结论确定了有效分离东方田鼠皮肤成纤维细胞的日龄和方法,为进一步深入研究提供了技术方法和操作依据。     

游离脂肪酸对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨游离脂肪酸(FFAs)对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响,研究游离脂肪酸在代谢综合征患者牙周病发病机制中的作用。方法:选用在牙周组织修复中起主要作用的人牙周膜成纤维细胞进行体外培养,对照组加入不含胎牛血清的DMEM,实验组分别加入不同浓度的游离脂肪酸进行刺激,在刺激24h-72h后,采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测人牙周膜成纤维细胞的增殖情况。结果:与对照组相比,游离脂肪酸可以抑制人牙周膜成纤维细胞的生长增殖(P<0.01),并且这种抑制作用具有浓度和时间依赖性,以培养72h后抑制作用最为明显(P<0.01)。结论:游离脂肪酸可以抑制牙周膜成纤维细胞的增殖,降低代谢综合征患者牙周组织的的修复能力,从而导致或加重牙周病的发生或发展。     

低氘水对皮肤成纤维细胞及黑色素瘤细胞的影响

研究不同浓度的低氘水对正常皮肤成纤维细胞CCD-1095sk增殖和乳酸代谢的影响,及对B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑色素生成量的影响。同时,观察低氘水对紫外损伤细胞修复的作用。用MTT法检测25、50和105 ppm三种不同浓度的低氘水对CCD-1095sk细胞增殖的影响,并测定培养液中的乳酸含量;取对数生长期小鼠B16黑素瘤细胞,分别加入不同浓度的低氘水作用72 h后,测定黑素含量和酪氨酸酶活性;体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性;用不同浓度的低氘水作用经紫外辐射的皮肤成纤维细胞,测定细胞增殖率。在细胞培养初期,50 ppm和105 ppm低氘水可促进CCD-1095sk细胞生长,同时抑制乳酸代谢。体外生化实验表明,三种不同浓度的低氘水均能不同程度地抑制酪氨酸酶活性。细胞实验表明,作用72 h后,50 ppm和105 ppm低氘水能显著抑制酪氨酸酶活性,减少B16黑色素瘤细胞黑色素的生成量,差异具有统计学意义,P<0.05。紫外损伤实验表明,50 ppm低氘水能减轻紫外辐射对细胞增殖的抑制作用,差异具有统计学意义,P<0.05。低氘水在化妆品应用方面具有潜在的价值。     

创伤渗出液对创伤成纤维细胞增殖的影响

创伤后不同时期渗出液(wound fluid,WF)的质和量的变化,在很大程度上反映伤口组织的愈合进程.研究伤口不同天数的WF对小鼠伤口组织的成纤维细胞(mouse wound fibrolast,mWFb)体外增殖能力的影响,探讨伤口微环境WF在调控mWFb的增殖规律.用两种培养基进行检测：1640培养基-10% FCS(fetal calf serum 胎牛血清)-10% WF或1640-1% FCS-10% WF.发现第1、3、7天的WF能刺激mWFb增殖.在高浓度(10%)FCS条件下,9、11、15天WF对mWFb生长产生抑制作用.而同一WF在低浓度(1%)FCS时导致mWFb死亡.结果提示,在损伤后一周期间伤口微环境能刺激mWFb增殖,但伤后更长时间的WF使细胞生长受阻止.在创伤愈合晚期的微环境中可能存在一些生长抑制因子.     

原代成人皮肤真皮成纤维细胞系的构建

目的:对人皮肤成纤维细胞进行分离、纯化、培养及细胞鉴定,探讨优化的分离及纯化方法,为构建表皮-真皮皮肤模型提供种子细胞。方法:使用两步消化法提取人真皮层,酶消化法提取成纤维细胞后培养数代,对细胞进行形态学观察,HE染色,免疫细胞化学鉴定细胞标志物Vimentin,MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:利用倒置显微镜及HE染色,可见细胞为散在分布的壁细胞,细胞汇流时呈鱼群样或漩涡状排列,细胞在30代内形态保持不变;细胞增殖曲线大体呈S型,流式细胞仪测得细胞凋亡率分别为(8.15±0.618)%和(7.83±0.415)%。结论:优化提取真皮成纤维细胞的方法,构建2株不同年龄的真皮成纤维细胞系,为药妆研究以及重组皮肤模型的研究奠定了基础。     

亚砷酸钠对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞的毒作用分析

该研究将辽宁绒山羊作为一种新的砷染毒动物模型来探究亚砷酸钠对其皮肤成纤维细胞的毒性作用,为砷影响绒山羊皮肤成纤维细胞的毒性效应及毒理作用机制提供理论依据.实验中采用不同浓度(0～120 μmol/L)的亚砷酸钠对绒山羊皮肤成纤维细胞分别染毒24、48、72、96 h.通过MTT法检测各实验组亚砷酸钠对细胞增殖与抑制的影...     

皮肤成纤维细胞肌内注射表达外源基因的可行性

将分别带有报告基因lacZ和人凝血因子ⅨcDNA的兔原代皮肤成纤维细胞直接注射到兔肌肉组织后 ,皮肤成纤维细胞可以长期存活并持续表达外源基因 .其中β 半乳糖苷酶表达至少持续 3个月 ,人凝血因子Ⅸ蛋白表达持续 1个月 .研究结果将皮肤成纤维细胞的优点和肌肉组织途径的优势有机地结合起来 ,为血友病B及其他遗传病的体细胞基因治疗提供一条新的途径 .