飞燕草素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌的机制研究

为研究飞燕草素对乳腺癌MDA-MB-231细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。免疫组化检测裸鼠乳腺肿瘤组织和肺组织转移瘤Ki-67及乳腺肿瘤组织蛋白水解酶超家族基质金属蛋白酶-7(matrix metallopeptidase 7,MMP-7)的表达水平;Western blot检测移植瘤Wnt/β-catenin通路β-联蛋白(β-catenin)、磷酸糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)及通路下游细胞周期相关蛋白cyclinD1、原癌基因c-myc和MMP-7的蛋白水平表达,体内外实验发现飞燕草素不仅能抑制裸鼠异种移植瘤生长及乳腺癌肿瘤组织和肺组织转移瘤Ki-67表达还可以明显降低乳腺癌MDA-MB-231细胞Wnt/β-catenin信号通路β-catenin和p-GSK-3β下游靶基因c-myc、cyclin D1和MMP-7蛋白的表达。本研究证实飞燕草素能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,发挥抑制乳腺癌的作用。     

黄芩苷对结肠癌细胞凋亡的影响及作用机制

黄芩苷在多种肿瘤中具有较高的抗肿瘤活性,然而,其在结肠癌中的抗肿瘤作用尚不清楚。本研究考察了黄芩苷对人结肠癌细胞系RKO的增殖和凋亡的影响,并探讨了其相关作用机制。研究发现,黄芩苷可按照剂量依赖性方式和时间依赖性方式抑制结肠癌细胞增殖及集落形成能力。流式细胞术显示,与对照细胞相比,黄芩苷处理后的RKO细胞的凋亡率显著增加(5.6%vs 33.6%)。RT-PCR和Western blotting检测显示,黄芩苷处理可显著增加结肠癌RKO细胞中DKK1 (Wnt信号通路的关键负调节因子) mRNA和蛋白表达水平。相反,黄芩苷处理则显著抑制结肠癌RKO细胞中c-Myc和β-catenin (DKK1的下游靶基因)的m RNA和蛋白表达。敲低DKK1后明显阻断了黄芩苷诱导的结肠癌细胞中DKK1蛋白的上调。此外,敲低DKK1逆转了黄芩苷对其下游基因c-Myc和β-catenin的抑制作用。黄芩苷处理后,结肠癌细胞中miR-217的表达显著下调。RT-PCR和Western blotting结果显示,下调miR-217显著促进DKK1的mRNA和蛋白表达。综上所述,本研究表明黄芩苷可通过抑制结肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡来发挥其抗肿瘤作用,黄芩苷通过激活结肠癌细胞中DKK1来抑制Wnt信号通路。此外,黄芩苷通过下调结肠癌细胞中miR-217的表达来上调DKK1的表达,从而起到抗癌作用。     

红景天苷通过Wnt/β-catenin信号通路影响小鼠骨髓间充质干细胞向神经元细胞定向分化

目的:以小鼠骨髓间充质干细胞系D1细胞为研究对象,探讨Wnt/β-catenin信号通路介导的红景天苷诱导D1细胞向神经细胞的定向分化。方法:实验分为对照组(D/F12完全培养基)和红景天苷诱导组(100μg/mL+D/F12完全培养基).将细胞分别诱导12、24、48和72 h后,采用细胞免疫荧光化学染色方法检测β-catenin和Gsk-3β的阳性细胞率。利用红景天苷分别诱导MSCs 1,2,8,12,24,48和72 h后,利用实时PCR技术检测Wnt/β-catenin信号通路的关键信号分子wnt3a、Axin2、Lrp6和Gsk-3βmRNA的表达;采用Westernblot方法分析D1细胞诱导12、24、48和72 h后,β-catenin和Gsk-3β蛋白的表达;运用Wnt/β-catenin信号通路特异性阻断剂DKK1阻断Wnt/β-catenin信号通路,Western blot方法分析红景天苷对β-catenin和NSE蛋白表达的影响。结果:红景天苷诱导24 h时β-catenin的阳性率可达55.76%,与其他组和对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01),诱导24 h后Gsk-3β的阳性率与其他时间和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。实时PCR检测结果显示,红景天苷诱导MSCs不同时间能促进Wnt/β-catenin信号通路中关键信号分子Wnt3a、Ax-in2、Lrp6和Gsk-3βmRNA的表达,诱导不同时间Wnt3a、Axin2、Lrp6和Gsk-3βmRNA的表达不尽相同。Westernblot结果表明,红景天苷诱导D1细胞12 h和24 h时β-catenin蛋白的表达明显上调,且与其他组比较差异具有统计学意义(P<0.05);随着作用时间的延长,Gsk-3β蛋白的表达增加且差异具有统计学意义(P<0.05),阻断Wnt/β-catenin信号通路后,β-catenin和NSE蛋白的表达水平明显下调。结论:红景天苷能诱导D1细胞定向分化为神经元样细胞,红景天苷通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现其诱导MSCs向神经细胞定向分化。     

虎杖苷对类风湿关节炎大鼠的治疗机制探究

探讨虎杖苷对类风湿关节炎(RA)大鼠的治疗作用及其可能作用机制。采用大鼠右后足趾皮内注射0. 1 m L完全弗氏佐剂致炎制备RA模型,分别给予160、80、40 mg/kg的虎杖苷混悬液灌胃,每日1次,造模后第28 d,对RA大鼠关节炎评分和足爪肿胀评分进行评估,并观察大鼠踝关节的病理学变化。检测血清TNF-α、IL-1β水平及关节滑膜组织中的Bax、caspase-3、Bcl-2、Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA的表达及Wnt4、GSK-3β、β-catenin蛋白的表达。结果表明虎杖苷可显著降低RA大鼠的关节炎评分和足爪肿胀评分,改善关节腔炎症状态,降低血清TNF-α及IL-1β水平及FLS中的Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA和蛋白及Bcl-2 mRNA的表达,并升高FLS中Bax、caspase3 mRNA的表达。虎杖苷可有效抑制RA大鼠滑膜增殖,促进滑膜细胞凋亡,控制关节炎症状态,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

虎杖苷对类风湿关节炎大鼠的治疗机制探究北大核心CSCD

探讨虎杖苷对类风湿关节炎(RA)大鼠的治疗作用及其可能作用机制。采用大鼠右后足趾皮内注射0. 1 m L完全弗氏佐剂致炎制备RA模型,分别给予160、80、40 mg/kg的虎杖苷混悬液灌胃,每日1次,造模后第28 d,对RA大鼠关节炎评分和足爪肿胀评分进行评估,并观察大鼠踝关节的病理学变化。检测血清TNF-α、IL-1β水平及关节滑膜组织中的Bax、caspase-3、Bcl-2、Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA的表达及Wnt4、GSK-3β、β-catenin蛋白的表达。结果表明虎杖苷可显著降低RA大鼠的关节炎评分和足爪肿胀评分,改善关节腔炎症状态,降低血清TNF-α及IL-1β水平及FLS中的Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA和蛋白及Bcl-2 mRNA的表达,并升高FLS中Bax、caspase3 mRNA的表达。虎杖苷可有效抑制RA大鼠滑膜增殖,促进滑膜细胞凋亡,控制关节炎症状态,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

单功能烷化剂MNNG对人胃粘膜上皮GES-1细胞的损伤及其对Wnt/β-catenin信号通路的影响

本文旨在从Wnt/β-catenin信号通路的角度探讨单功能烷化剂MNNG诱导人胃粘膜上皮GES-1细胞损伤的机制。用MNNG(2×10-5 mol/L)处理GES-1细胞24 h,处理后第3天用倒置显微镜对GES-1细胞形态进行观察,用MTT法检测GES-1细胞活力,用流式细胞术检测GES-1细胞凋亡和周期变化,用q PCR检测GES-1细胞中β-catenin、GSK-3β、c-Met和MMP7m RNA表达情况,用Western blot检测β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β和c-Met蛋白表达情况。结果显示:MNNG能够明显损伤GES-1细胞,细胞形态变为不规则的长梭形;MNNG能够诱导GES-1细胞凋亡,明显阻滞细胞周期进程;MNNG能够上调β-catenin、GSK-3β、c-Met和MMP7 m RNA表达水平,并上调β-catenin、GSK-3β和p-GSK-3β蛋白表达水平。上述结果提示,MNNG对GES-1细胞的损伤可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活相关,这为胃粘膜损伤的细胞模型研究提供了参考。     

LY294002对CML急变期细胞中Wnt／β-catenin信号通路的影响及其效应

β-catening在慢性粒细胞白血病急变过程中发挥着重要作用,而其受BCR／ABLTL其下游信号通路调控的具体分子机制尚未完全阐明。该研究旨在探讨PI3K-AK聪号通路对慢粒急变期细胞的影响及其对Wnt／β-catenin信号通路的调控作用。采用P13K-AKT信号通路的靶向抑制剂LY294002作用于慢粒急变期K562细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,甲基纤维素克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,Western blot检测pAKT（Thr308）的表达变化,RT-PCR和Western blot分别检测β-catenin及其下游靶基因c—myc、cyclinD1的mRNA和蛋白表达情况。结果显示,10,20,40μmol/L的LY294002作用细胞24h后,抑制了K562细胞的增殖以及克隆形成能力。该效应呈浓度依赖的方式。3种浓度的LY294002处理细胞后,PI3K—AKT信号通路明显被抑制,pAKT（Thr308）的蛋白表达明显减少;β-catenin的mRNA表达无明显改变,但其蛋白水平依次减少;β-catenin的下游靶基因c-myc、cyclin D1的mRNA和蛋白水平均明显降低。综上所述,抑制PI3K-AKT信号通路可抑制白血病K562细胞的增殖和克隆形成能力,其机制可能与抑制Wnt／β-catenin信号通路相关。     

LncRNA MEG3通过抑制Wnt/β-catenin信号通路对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)人母系表达基因(Maternally expressed gene 3,MEG3)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:选取我院住院的OA患者和半月板损伤患者各40例,采用RT-PCR检测两组患者软骨组织和细胞中MEG3的表达。在OA软骨细胞中,转染si RNA-MEG3(si-MEG3)或过表达MEG3的慢病毒载体(LV-MEG3),采用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况,RT-PCR和western blot检测PCNA、Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达。结果:OA患者膝关节软骨组织中MEG3的表达水平明显低于半月板损伤患者软骨组织(P0.05),同时OA软骨细胞中MEG3的表达水平明显低于正常软骨细胞(P0.05)。OA软骨细胞转染siMEG3后,细胞增殖能力和PCNA表达明显下降(P均0.05),G0/G1期细胞比例明显升高(P0.05),S期细胞比例明显下降(P0.05),细胞凋亡率明显增加(P均0.05)。低表达MEG3能够显著降低Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达水平(P均0.05),增加GSK-3βm RNA和蛋白表达水平(P均0.05)。在OA软骨细胞转染LV-MEG3后,细胞增殖能力和PCNA表达明显升高(P均0.05),G0/G1期细胞比例明显下降(P0.05),S期细胞比例明显增加(P0.05),细胞凋亡率明显减少(P均0.05)。高表达MEG3能够显著增加OA软骨细胞中Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达水平(P均0.05),降低GSK-3βm RNA和蛋白表达(P均0.05)。同时,采用XAV939阻滞Wnt/β-catenin信号通路能够显著逆转过表达MEG3对OA软骨细胞增殖和凋亡的影响。结论:MEG3在OA患者和软骨细胞中均显著低表达,并能够通过阻滞Wnt/β-catenin信号通路激活影响OA软骨细胞增殖和凋亡。MEG3可能成为OA治疗的重要靶分子。     

Wnt/β-catenin信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨Wnt/β-catenin信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞（HKC）,分为正常糖组、甘露醇对照组及高糖组。采用免疫细胞化学观察β-连环蛋白（β-catenin）表达情况;Westernblot检测Wnt4、β-catenin、E-钙粘蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平;逆转录-聚合酶链反应检测Wnt4和β-cateninmRNA表达水平。结果高糖组较正常糖及渗透浓度对照组Wnt4蛋白及mRNA、α-SMA蛋白表达增高,E-cadherin表达降低,β-catenin总蛋白及mRNA水平无明显变化,细胞浆及核内蛋白表达增强。高糖刺激肾小管上皮细胞Wnt4及核β-catenin蛋白表达呈时间依赖性,于高糖刺激后12h增强,24h达到高峰。结论Wnt/β-catenin信号通路可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程。     

右归丸对鼠膝骨性关节炎的治疗作用及Wnt信号通路相关因子表达的影响

目的：分析右归丸对膝骨性关节炎（KOA）大鼠Wnt信号通路相关因子表达的影响,探讨右归丸对KOA大鼠的保护机制。方法：SPF级SD大鼠60只,按照体重法随机分为假手术组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组、右归丸高、中、低剂量组（n=10）。采用改良Hulth法复制膝骨关节炎大鼠模型。右归丸高中低剂量组分别按20、10、5 g/kg灌服相应的药物,硫酸氨基葡萄糖组按0.17 g/kg灌服硫酸氨基葡萄糖,假手术组和模型组灌服等体积的生理盐水,干预8周。末次给药后摘取膝关节,通过膝关节病理切片观察各组大鼠软骨组织病理改变;采用RT-PCR法对各组大鼠软骨组织DKK1、WISP1、Wnt1、β-catenin和LRP5 mRNA的表达水平进行对比分析;通过Western blot法检测各组大鼠软骨组织DKK1、WISP1、Wnt1、LRP5和β-catenin的蛋白质含量的变化。结果：与假手术组比较,模型组大鼠关节软骨受损严重,Mankin评分明显升高（P<0.05）;DKK1 mRNA表达水平和蛋白质表达水平明显降低（P<0.05）;WISP1、Wnt1、β-catenin、LRP5 mRNA表达水平及蛋白质表达水平明显升高（P<0.05）。与模型组比较,右归丸高剂量组和硫酸氨基葡萄糖组关节软骨病变明显减轻;Mankin评分明显减轻（P<0.05）;大鼠软骨组织中DKK1 mRNA表达水平和蛋白表达水平明显升高,WISP1、Wnt1、β-catenin、LRP5 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论：右归丸通过抑制Wnt信号通路中WISP1、Wnt1、β-catenin、LRP5的表达,促进DKK1细胞因子的表达,发挥对KOA的保护作用。     

跑台运动和饮食控制对去卵巢肥胖大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察跑台运动和饮食控制对去卵巢肥胖大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、磷酸化-GSK-3β和GSK-3β蛋白表达的影响。方法:将48只3月龄雌性未孕SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组、去卵巢组、去卵巢运动组和去卵巢控食组。去卵巢运动组大鼠在去卵巢手术后的第3周开始进行为期8周的跑台运动训练,去卵巢控食组在去卵巢后的第三周开始进行为期8周的控食干预。干预结束后,腹主动脉取血处死各组大鼠,用电子天平秤量大鼠心肌重量,用Western blot方法检测心肌β-catenin、磷酸化-GSK-3β和GSK-3β蛋白表达。结果:与假手术组大鼠比较,去卵巢组大鼠体重、心肌重量显著增加,而心肌重量指数、β-catenin、磷酸化GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著降低(P0.05);与去卵巢组大鼠比较,去卵巢运动组大鼠在最后两周时体重显著降低(P0.05),心肌组织β-catenin、p-GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著升高,而去卵巢控食组大鼠体重、心肌重量、心肌重量指数和GSK-3β表达差异均无统计学意义(P0.05),但心肌组织β-catenin、p-GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著升高(P0.05)。结论:跑台运动和控食干均预均能激活去卵巢大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路。     

二十二碳六烯酸增强MDA-MB-231细胞对5-FU敏感性的研究

目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)对5-FU诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与凋亡的作用及对Wnt/1β-Catenin信号传导通路的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT),测定DHA对5-FU诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;RT-PCR检测MDA-MB-231细胞β-catenin、GSK-3β基因的表达情况;Western blot检测MDA-MB-231细胞3-catenin、GSK-3β、磷酸化GSK-3β(Ser9)蛋白的表达情况;细胞免疫组化染色观察DHA及DHA联合Licl对3-Catenin蛋白细胞内表达及定位的影响.结果:20 μg/ml、40μg/ml的DHA分别与5-FU联合应用,可增强5-FU对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用.DHA(20 μg/ml)能促进5-FU增强MDA-MB-231细胞G0/G1期阻滞作用、降低细胞增殖指数及诱导细胞的凋亡.DHA作用于MDA-MB-231细胞后,β-catenin基因及蛋白表达水平下降(P＜0.05)、GSK-3β的基因及蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05),磷酸化GSK-3β(Ser9)蛋白表达水平下降(P＜o.05).结论:DHA能增强5-FU对MDA-MB-231细胞增殖抑制和诱导凋亡,起化疗增敏作用,可能与其通过抑制GSK-3β磷酸化来阻断Wnt/β-Catenin信号通路有关.     

Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白在胃癌组织中的表达和肿瘤转移的关系

目的:探讨了Wnt信号通路相关蛋白在胃癌组织中的表达及与肿瘤转移的关系。方法:选取2011年6月到2012年6月我院胃癌术后47例肿瘤标本作为研究对象,并选取同一患者的正常胃组织作为对照研究。采用实时荧光定量PCR和Western blot对胃癌组织和正常胃组织Wnt信号通路相关蛋白进行分析,并分析了肿瘤转移和非转移患者Wnt信号通路相关蛋白的变化。结果:与正常胃组织比较,胃癌组织中Wnt1、Wnt3、Wnt3a、β-catenin、CyclinD1和c-Myc等分子的mRNA水平明显上调,差异有显著统计学意义(P0.05)。胃癌组织中总β-catenin和核内β-catenin蛋白较正常胃组织明显增加,而磷酸化β-catenin较正常组明显下降、差异有显著统计学意义(P0.05)。与非转移组比较,转移组患者胃癌组织中Wnt1、Wnt3、Wnt3a等分子mRNA水平显著上调,差异有统计学意义(P0.05)。结论:Wnt信号通路异常激活在胃癌发生和癌细胞转移中发挥着重要的作用,为临床治疗提供了一定靶点。     

电针联合艾灸对胶原诱导性关节炎大鼠关节的保护作用

为了探讨电针联合艾灸对胶原诱导性关节炎大鼠关节的影响,本研究将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、DKK1组和观察组,每组10只。对模型组、DKK1组和观察组大鼠建立胶原诱导性关节炎模型,DKK1组给予Wnt阻断剂DKK1,观察组给予电针联合艾灸,观察各组关节炎指数评分(AI)、放射评分及组织病理表现。采用Western blotting和RT-PCR检测Wnt3a、Wnt5和β-catenin蛋白及mRNA表达。研究显示,观察组和DKK1组造模后21 d、28 d的AI均明显低于模型组(p0.05);观察组和DKK1组造模后28 d的放射评分分别为(2.67±0.87)分和(2.67±0.87)分,明显低于模型组(p0.05);DKK1组和观察组的滑膜肿胀、炎性细胞浸润和骨质破坏情况均轻于模型组;DKK1组和观察组的Wnt3和β-catenin蛋白及m RNA相对表达均明显低于模型组(p0.05);各组Wnt5a蛋白及mRNA相对表达比较差异无统计学意义(p0.05)。研究说明,电针联合艾灸对胶原诱导性关节炎大鼠有较好的关节保护作用,可能与其调节Wnt3a、β-catenin表达有关。     

LDH影像分级与DKK-1的负相关可能与Wnt信号通路的调控有关

本研究选择了100例腰椎间盘突出症(lumbar disk herniation, LDH)患者为观察组,以同期健康体检者20例为对照组,采用Western blotting法检测血清中Dickkopf相关蛋白1 (dickkopf-related protein 1, DKK-1)的表达水平,用ELISA法检测两组血清中DKK-1含量,试图分析血清中DKK-1与LDH影像学分级的相关性及其作用机理。研究结果显示,LDH患者的血清中DKK-1含量水平明显低于正常对照组。Western blotting法检测发现LDH患者影像分级与DKK-1的蛋白水平呈负相关;而ELISA法检测也证实LDH患者影像分级与DKK-1水平呈负相关。LDH患者影像分级与Wnt信号通路相关蛋白β-catenin呈正相关。本研究初步说明,腰椎间盘突出症影像分级与DKK-1水平呈负相关,而该相关性与Wnt信号通路的相关蛋白β-catenin调控有关。     

Wnt信号在年龄相关性黄斑变性组织和小鼠模型中的表达及作用

为了考察Wnt信号在年龄相关性黄斑变性组织和小鼠模型中的表达及作用,本研究采用免疫组织化学染色检测了10例干性年龄相关性黄斑变性病例和10例年龄相匹配的正常眼睛石蜡切片中LRP6和β-catenin的表达。通过氢醌诱导小鼠干性年龄相关性黄斑变性模型,然后应用Wnt信号通路抑制剂ICG001治疗模型小鼠4周。采用苏木精和曙红染色检测视网膜病理改变,并对小鼠进行视网膜病变评分。采用RT-PCR和Western blotting检测视网膜组织中Wnt信号及靶基因(LRP6,β-catenin, c-MYC, VEGF, ICAM-1,TNF-α和HIF-1)的表达。研究显示,与正常视网膜组织相比,干性年龄相关性黄斑变性患者视网膜组织中的LRP6、β-catenin、c-MYC、VEGF、ICAM-1、TNF-α和HIF-1的mRNA和蛋白表达显著升高。Wnt信号通路抑制剂ICG001显著减轻了小鼠的视网膜病变并降低了视网膜病变评分。与模型组相比,ICG001治疗组的小鼠视网膜组织中LRP6、β-catenin、c-MYC、VEGF、ICAM-1、TNF-α和HIF-1的表达均明显降低。本研究表明,在干性年龄相关性黄斑变性的患者和动物模型中Wnt信号被异常激活,靶向抑制Wnt信号可通过减弱氧化应激、抑制炎症反应、调节血管生成来改善视网膜的结构和功能。     

miRNA-26a靶向调控GSK-3β参与Wnt/β-catenin信号通路调节IgA肾病肾纤维化

目的:通过检测IgA肾病不同程度肾间质纤维化患者肾组织miRNA-26a、β-catenin、GSK-3β、α-SMA的表达,探究miRNA-26a通过靶向调控GSK-3β参与Wnt/β-catenin信号通路所致肾间质纤维化。方法:根据肾间质纤维化程度将46例IgA患者分为实验组(轻度组、中度组、重度组),对照组为7例肾脏肿瘤远离肿瘤组织的正常肾组织。采用RT-qPCR方法检测各实验组及正常对照组共53例IgA肾病患者肾组织miRNA-26a的表达水平,分析miRNA-26a与IgA肾病肾纤维化的关系。分别采用RT-qPCR技术及免疫组化技术检测各组肾组织β-catenin、GSK-3β、α-SMAmRNA及蛋白的表达水平,各组之间进行比较,并与miRNA-26a进行相关性分析。结果:(1)与正常对照组相比,IgA肾病患者肾活检组织miRNA-26a呈低表达,且随着肾间质病变程度加重,miRNA-26a表达水平显著降低,各组间差异具有统计学意义(P0.05);(2)与正常对照组比较,IgA肾病患者肾组织GSK-3β、β-catenin、α-SMAmRNA和蛋白的表达升高,且表达程度随着肾间质病变程度加重逐渐增强,各组间比较差异具有统计学意义(P0.05);(3)相关性分析:肾组织miRNA-26a与肾间质纤维化程度呈负相关(r=-0.943,P0.05),肾间质及肾小管GSK-3β、β-catenin、α-SMA的表达强度与肾间质纤维化程度正相关(r=0.917,P0.05;r=0.943,P0.05;r=0.926,P0.05),肾间质GSK-3β与β-catenin蛋白表达正相关(r=0.834,P0.05)。结论:miRNA-26a可通过靶向调控GSK-3β参与Wnt/β-catenin信号通路肾间质纤维化。     

两种Wnt 通路抑制剂对牙周膜干细胞作用的比较研究

目的:本实验主要探讨Wnt通路抑制剂XAV-939相比DKK1在牙周膜干细胞增殖及矿化中的作用差异。方法:酶消化法培养牙周膜干细胞,鉴定后,用CCK8试剂盒检测XAV-939和DKK1对牙周膜干细胞增殖能力的影响,茜素红染色及定量检测XAV-939和DKK1对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响,q RT-PCR检测DKK1和XAV-939对牙周膜干细胞Wnt通路相关基因GSK-3β和β-catenin及成骨分化相关基因ALP,DSPP,BSP,OCN,RUNX-2的影响。结果:XAV-939和DKK1都可以通过抑制Wnt通路来抑制牙周膜干细胞的增殖及成骨分化。当没有外源性Wnt蛋白刺激时,XAV-939作为Wnt通路抑制剂的抑制作用要强于DKK1,而加入外源性Wnt蛋白后,XAV-939与DKK1的作用效果相当。结论:XAV-939对比DKK1,具有更为广泛而稳定的抑制效果。XAV-939可以作为高效的Wnt通路抑制剂应用于未来关于牙周膜干细胞和Wnt通路相关实验研究中。     

骨桥蛋白及其受体整合素αvβ3在子痫前期患者胎盘中的表达及意义

本研究旨在考察骨桥蛋白及其受体整合素αvβ3在子痫前期患者胎盘中表达,及其在子痫前期发病机制中的可能作用。选取2017年3月至2018年9月期间在我院治疗的30例子痫前期产妇(子痫前期组)和30例正常妊娠产妇(对照组)的胎盘组织样本进行研究,采用免疫组化、Western blotting和RT-PCR检测了产妇胎盘组织中骨桥蛋白和整合素αvβ3的表达情况。免疫组化分析显示,对照组健康产妇和子痫前期产妇的胎盘组织中均可检测到骨桥蛋白和整合素αvβ3的阳性表达,子痫前期组的骨桥蛋白和整合素αvβ3的阳性率分别为64%和48%,而对照组分别为86%和68%,两组阳性率差异均具有统计学意义(p0.05)。Western blotting结果显示,子痫前期组的骨桥蛋白和整合素αvβ3蛋白相对表达量均显著低于对照组(0.73vs 1.54,0.81 vs 1.42,p0.05)。RT-PCR结果显示,子痫前期组的骨桥蛋白、αv和β3 mRNA相对表达量均显著低于对照组(0.62 vs 1.26,0.70 vs 1.18,0.76 vs 1.04,p0.05)。本研究证实骨桥蛋白及其受体整合素αvβ3在子痫前期患者胎盘组织中明显下调,可能通过影响滋养层细胞的侵袭性和母胎界面免疫来参与子痫前期的发生发展。     

DLX1过表达对骨肉瘤细胞MG63迁移、侵袭、凋亡和增殖的影响

前期经基因芯片筛选发现,同源盒基因1(distal-less homeobox 1,DLX1)低表达是导致骨肉瘤形成的关键基因。该研究在此基础上,拟通过过表达DLX1探讨其对骨肉瘤细胞MG63迁移和侵袭等生物学特征的影响,并初步揭示其作用途径。采用含DLX1基因的重组腺病毒Ad DLX1(adenovirus distal-less homeobox 1)和空载腺病毒Ad RFP(adenovirus red fl uorescence protein)分别感染人骨肉瘤细胞MG63,观察细胞荧光表达情况,并用RT-PCR和Western blot验证DLX1表达水平;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;DAPI染色和流式细胞术检测细胞凋亡水平;CCK-8检测细胞增殖能力;RT-PCR和Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin的表达。结果显示,与对照组(Ad RFP感染组)相比,Ad DLX1能显著增加MG63细胞中DLX1的表达,并导致细胞迁移和侵袭能力下降,但细胞增殖和凋亡情况无明显改变。DLX1过表达还可以上调Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin的表达。该研究表明,DLX1可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞MG63的迁移和侵袭。