汉滩病毒感染体外培养神经元损伤及抗体对其保护作用

用体外培养的昆明小鼠胚胎脑皮质神经元,感染汉滩病毒后,　检测原癌基因ＦＯＳ的表达,加入ＨＦＲＳ病人恢复期血清,观察其对神经元的保护作用。将病毒　感染的神经元经免疫组化染色,检测原癌基因ＦＯＳ的快速表达;在病毒感染的神经元内加入Ｈ　ＦＲＳ病人恢复期血清,使用ＭＴＴ比色试验检测神经元存活情况。病毒感染的神经元ＦＯＳ表达明　显　增高,与对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．００１）;　ＨＦＲＳ病人恢复期血清保护病毒感染的神经元　组　与感染对照组神经元活性明显不同,有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。　ＨＴＮＶ感染体外培养的神经元　,会使细胞内产生ＦＯＳ的快速表达,ＨＦＲＳ病人恢复期血清对病毒感染的神经元有一定的保护　作用。     

腺病毒介导人肝细胞生长因子对大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的:探讨腺病毒介导人肝细胞生长因子(Ad-HGF)对体外无血清培养所致大鼠皮层神经元损伤的保护作用.方法:用流式细胞仪测定不同感染强度(MOI)条件下携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad-GFP)(25,50,100,200pfu/cell)对皮层神经元的转染效率,确定最佳MOI;ELISA测定Ad-HGF在最佳感染强度下皮层神经元中的表达规律;通过中性红染色和PI-Hoechst33342双染色法比较转染Ad-HGF组与对照组(转染Ad-GFP组和空白对照组)间无血清培养后6 h、12 h、24 h和48 h细胞的存活情况.结果:在感染强度为50 pfu/cell时,重组腺病毒对皮层神经元的转染率达99.3%,Ad-HGF能在皮层神经元中有效而持久地表达,接种后2 h转染Ad-HGF组的细胞死亡率和凋亡率在无血清培养后12 h明显低于两对照组(P＜0.05).结论:Ad-HGF对接种后2 h转染组无血清培养所致的损伤有显著的保护作用,对接种后第5 d转染的皮层神经元无血清所致的损伤虽亦具有一定的保护作用,但不明显.     

粒细胞集落刺激因子对氧糖剥夺后培养神经元的影响

目的:观察G-CSF时体外模拟脑缺血损伤神经元的影响,为其临床治疗脑缺血损伤提供理论的依据.方法:应用体外培养原代大脑皮质神经元氧糖剥夺模型模拟脑缺血损伤,氧糖剥夺4h,制作模型过程中加入不同浓度的G-CSF进行干预,通过观察细胞活性、死亡率、细胞色素C释放量判断G-CSF对神经元的保护作用.结果:G-CSF可明显降低氧糖剥夺神经元的死亡率,提高其生存活性,明显降低神经元由线粒体向胞浆内释放细胞色素C,与模型组比较有显著性差异(P＜0.01).结论:G-CSF对氧糖剥夺所致的神经元损伤发挥保护作用.     

Ⅰ组mGluRs反义寡核苷酸抗谷氨酸对小鼠大脑皮层神经元的兴奋毒作用

目的研究Ⅰ组代谢型谷氨酸受体(mGluRs)反义寡核苷酸对谷氨酸钠(Glu)引起的小鼠大脑皮层神经元损伤的保护作用.方法以细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出、光镜下细胞形态变化为指标,观察培养液中加入Glu引起的神经元损伤及mGluRl反义寡核苷酸或mGluR5反义寡核苷酸的保护作用;用免疫细胞化学检测神经元mGlulα仪和mGluR5表达.结果实验显示0.1 mmol·L-1的谷氨酸钠可明显造成神经元损伤,使LDH漏出增加(P＜0.01),mGluRl反义寡核苷酸或mGluR5反义寡核苷酸6 μmol·L-1和8μmol·L-1可明显拮抗Glu引起的神经元损伤,使LDH漏出显著减少(P＜0.01);免疫组化实验证实体外培养神经元mGluRlα和mGluR5阳性表达.结论mGluRl反义寡核苷酸和mGluR5反义寡核苷酸可对抗Glu引起的皮层神经元损伤.     

亚低温状态下冷诱导RNA结合蛋白调节氧化还原系统对海马神经元的保护作用

本文旨在探讨冷诱导RNA结合蛋白(cold inducible RNA-binding protein,CIRP)是否通过抑制氧自由基的生成而起到抑制神经元凋亡的作用。采用体外分离培养的原代大鼠海马神经元,随机分为5组:常温对照组(37℃)、空病毒感染组、CIRP过表达组、CIRP干扰组、亚低温32℃处理组。将后四组移入32℃含有5%CO2培养箱内培养。采用Annexin V-FITC/PI标记后用流式细胞术对海马神经元进行细胞凋亡检测、Western blot检测CIRP的表达,同时采用ELISA方法进行相关氧化还原指标(T-AOC,GSH-Px,SOD,MDA)检测。Western blot及流式凋亡检测结果显示:与常温对照组相比,单纯亚低温处理组及CIRP过表达组海马神经元中CIRP的表达量明显增加(P0.01),神经元的凋亡率明显下降;而干扰CIRP的表达后,与单纯亚低温处理组相比,细胞凋亡的数目则明显增加(P0.05)。相关氧化还原指标检测结果显示:亚低温32℃处理组、CIRP过表达组与常温对照组、CIRP干扰组、空病毒感染组相比均有显著差异(P0.05或P0.01)。以上结果表明:亚低温处理通过上调CIRP的表达,抑制细胞内氧自由基的生成,从而直接或间接地抑制了氧自由基诱导的神经元凋亡,进而起到海马神经元的保护作用。     

羌活地黄汤含药血清对兔关节软骨细胞增值及RANKL mRNA的影响

目的:观察羌活地黄汤含药血清对软骨细胞增值及RANKL mRNA(receptor activator nuclear factor kappa B ligand)表达的影响.方法:采用血清药理学和体外培养兔关节软骨细胞的方法,通过MTS/PMS系统检测羌活地黄汤含药血清对软骨细胞增殖的影响以及采用实时荧光定量PCR检测软骨细胞RANKL mRNA表达变化.结果:羌活地黄汤含药血清对体外培养的兔关节软骨细胞有促进增殖的作用,与实验对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),羌活地黄汤含药血清组RANKL mRNA表达量低于同一时间节点的实验时照组.结论:羌活地黄汤含药血清能促进体外培养的软骨细胞增殖,同时能抑制软骨细胞RANKLmRNA的表达.     

肺炎衣原体感染与急性心肌梗死关系的试验研究及初探

目的检测血清肺炎衣原体(TWAR)和白细胞介素-6 (IL-6)对急性心肌梗死(AMI)的诊断价值及血清脂质谱的变化,以期了解我国AMI患者TWAR的感染状况以及相关因子变化的临床意义.方法采用间接显微免疫荧光法检测53例急性心肌梗死病人和50例健康体验者血清肺炎衣原体IgG和IgM滴度,用ELISA法分别检测其血清白细胞介素-6(IL-6)的含量,同时检测两组血清脂质谱的含量.结果急性心肌梗死组肺炎衣原体既往感染率(73.6%)明显高于对照组(14%)(P ＜0.01),两组肺炎衣原体急性感染率差异无显著性(P＞0.05);两组血清中IL-6 含量超过正常上限值的阳性率差异有显著性,即对照组明显低于急性心肌梗死组(P＜0.0 1).发现急性心肌梗死组肺炎衣原体感染阳性者,其危险的血清脂质谱较对照组有明显的增加.结论肺炎衣原体感染与冠心病和急性心肌梗死的发生、疾病发展过程有密切关系 .     

β淀粉样蛋白膜内片段对APP表达的影响

MTT法和荧光分光光度计检测发现β淀粉样蛋白膜内片段(intramembranous fragments of amyloid-β,IF-Aβ)可以抑制β淀粉样蛋白42(amyloid-β,Aβ42)对体外培养神经元的毒性.通过体外检测IF-Aβ对淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)表达的影响,探索IF-Aβ对Aβ42的神经毒性抑制机制.分别从mRNA水平和蛋白质水平用RT-PCR方法和Western-blot方法检测IF-Aβ对体外培养神经元APP表达的影响.发现IF-Aβ加入原代培养的神经元后,APP从mRNA水平和蛋白质水平均表达下降,说明IF-Aβ通过抑制APP的表达,减少了Aβ生成,达到神经保护的作用.     

IL-18及γ-IFN与过敏性皮炎患者的相关性研究

目的:探讨血清IL-18和γ-IFN水平及IL-18编码基因-137G/C、-607C/A多态性与过敏性皮炎的相关性.方法:提取受试者白细胞DNA,等位基因特异性引物PCR技术检测28例过敏性皮炎病人和52例正常对照IL-18基因多态性;酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组IL-18和γ-IFN血清含量.结果:过敏性皮炎组与对照组比较,两者-137G/C、-607C/A基因型频率和等位基因频率均无显著性差异(P＞0.05).过敏性皮炎组的血清IL-18和γ-IFN水平明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.001).不同基因型皮炎组患者间的血清IL-18水平均无统计学差异(P＞0.05).结论:过敏性皮炎患者IL-18和γ-IFN的表达降低,提示过敏性皮炎的发生可能与本身血清IL-18和γ-IFN水平低下有关.     

益智仁对谷氨酸损伤的大鼠离体培养皮层神经元的保护作用研究

目的:通过观察单味中药(益智仁)对离体培养的大鼠皮层神经元谷氨酸损伤模型的保护作用,探讨中药益智仁益智作用的机理,以初步论证中药益智仁对人体的益智效果.方法:利用原代离体培养的大鼠皮层神经元,分为6组:空白对照组,损伤模型组,阳性对照组,益智仁高剂量组,益智仁中剂量组,益智仁低剂量组,制备离体培养皮层神经元的谷氨酸损伤模型,采用MTT法测定细胞存活率,并测定LDH漏出率.结果:MTT法检测结果显示,与空白对照组相比,损伤模型组皮层神经元OD值显著降低(P＜0.05);与损伤模型组相比,各治疗组皮层神经元OD值显著升高(P＜0.05).LDH漏出率检测结果显示,与空白对照组相比,损伤模型组皮层神经元LDH漏出率显著升高(P＜o.05);与损伤模型组相比,益智仁中、高剂量组皮层神经元LDH漏出率显著降低(P＜0.05);其他组皮层神经元与损伤模型组相比,LDH漏出率无显著性差异(P＞0.05).结论:益智仁能够有效的降低细胞的死亡,提示其对线粒体功能具有保护作用,并对初期和后期损伤细胞均有保护作用,但具体作用靶点还需后续实验进一步研究.     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

Principles of organization and evolution of systems of regulation of functions

Evolution of living organisms is closely connected with evolution of structure of the system of regulations and its mechanisms. The functional ground of regulations is chemical signalization. As early as in unicellular organisms there is a set of signal mechanisms providing their life activity and orientation in space and time. Subsequent evolution of ways of chemical signalization followed the way of development of delivery pathways of chemical signal and development of mechanisms of its regulation. The mechanism of chemical regulation of the signal interaction is discussed by the example of the specialized system of transduction of signal from neuron to neuron, of effect of hormone on the epithelial cell and modulation of this effect. These mechanisms are considered as the most important ways of the fine and precise adaptation of chemical signalization underlying functioning of physiological systems and organs of the living organism