提高胚胎移植中受体牛妊娠率的研究进展

胚胎的质量和受体牛的质量是影响胚胎移植受体牛妊娠率的两具非人为因素。近年来人们在提高胚胎的质量和建立旨在提高受体牛质量的受体牛选择标准方面做了大量的工作,使胚胎移植工作中受体牛的妊娠率有了很大提高。本文从超数排卵、体外受精两种胚胎生产方法中如何提高胚胎的质量以及受体牛质量控制等方面了有关研究概况和发展动态。     

两温度梯度多重PCR鉴别牛早期胚胎性别的技术研究

稳定、可靠和快速的牛胚胎性别鉴定方法在生产应用中具有重要意义。通过两温度梯度PCR方法对牛基因组、克隆胚胎、胚胎样品进行性别鉴别实验研究,建立了稳定、简便、快速的牛早期胚胎性别鉴别两温度梯度PCR方法,鉴定时间仅为57分钟。采用两温度梯度PCR方法对30枚奶牛胚胎进行了早期性别鉴别,并将鉴别的15枚胚胎（11枚为雌性,4枚为雄性）移植到同期处理的15头受体母牛体内。60天后妊娠检查,有7个受体成功受孕,5头受体怀孕晚期流产,流产犊牛全部为母犊。结果产下1公1母两头犊牛,流产个体与出生个体的性别与PCR鉴别结果完全相符。      

两温度梯度多重PCR鉴别牛早期胚胎性别的技术

稳定、可靠和快速的牛胚胎性别鉴定方法在生产应用中具有重要意义.通过两温度梯度PCR方法对牛基因组、克隆胚胎、胚胎样品进行性别鉴别实验研究,建立了稳定、简便、快速的牛早期胚胎性别鉴别两温度梯度PCR方法,鉴定时间仅为57分钟.采用两温度梯度PCR方法对30枚奶牛胚胎进行了早期性别鉴别,并将鉴别的15枚胚胎(11枚为雌性,4枚为雄性)移植到同期处理的15头受体母牛体内.60天后妊娠检查,有7个受体成功受孕,5头受体怀孕晚期流产,流产犊牛全部为母犊.结果产下1公1母两头犊牛,流产个体与出生个体的性别与PCR鉴别结果完全相符.     

牛卵核移植技术的应用

用去核的牛卵母细胞进行核移植,形成重构胚,胚胎移植后,可产生克隆牛。将克隆牛的肉和奶制成肉粉和奶粉饲喂大鼠,大鼠的生理功能不受影响。牛卵核移植技术为珍稀动物的保护提供了一条重要途径,对于细胞治疗的研究也具有重要意义。通过牛卵核移植技术,可构建异种克隆胚胎,用以研究核质相互作用。将牛卵核移植技术和体细胞基因修饰技术相结合,可生产转基因克隆牛。     

体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1克隆猪

转ω-3脂肪酸去饱和酶基因猪在优质猪培育及研究ω-3不饱和脂肪酸预防心血管和癌症疾病中的作用方面有着重大的应用．本研究首次通过体细胞核移植制备了转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1猪．将sFat—1基因转染到大白猪胎儿成纤维细胞,获得转基因阳性细胞克隆,然后以转基因细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎,胚胎体外培养或进行移植．先后移植了1889枚1-4细胞期克隆胚胎到10头受体母猪的输卵管内,28天B超检测9头受体母猪妊娠（90％）,7头妊娠足月（70％）分娩产下21头仔猪,体细胞克隆猪的效率为1．1％（出生仔猪／移植胚胎）．体细胞克隆猪效率的提高,主要是对克隆胚胎的移植环节进行了改进,比较了受体母猪排卵状况对胚胎移植效率的影响．当受体母猪卵泡发育处于即将排卵或正在排卵阶段,能够获得较高的妊娠率和妊娠足月率（100％）,而排卵后移植妊娠足月率为0％．对健康存活15头克隆猪进行了PCR和Southern检测,证实13头为转基因猪,转基因阳性率为87％．RT—PCR检测13头转基因猪,12头表达sFat—1基因．以上结果表明,利用优化的体细胞转基因结合核移植技术,可以成功地批量生产转sFat-1基因的克隆猪．     

牛冷冻试管胚胎性别鉴定的应用

利用双引物PCR技术对优质良种牛体外受精的冷冻胚胎进行性别鉴定。并对分割后的半胚分别进行PCR扩增和染色体分析,两种方法的判定结果相吻合,在本实验条件下,利用减少PCR体系中细胞的数量来确定最低的模板DNA的检出量,2－细胞不能检测,4－细胞检出率为62．5％,8－细胞为90％,16－细胞以上为100％。对23牧经过性别鉴定后的胚胎进行移植,获得5头纯种试管牛,产犊率为21．7％,与正常的胚胎移植 结果27．3％（3／11）无显著差异,预测性比为100％符合。     

云南省奶牛胚胎移植获得成功

胚胎移植技术对充分发掘和利用良种母畜的生产潜力,以加速良种的推广,具有重要的现实意义。现在,在奶牛和肉牛等家畜的改良和发展工作中,这一技术已在世界范围内广泛开发应用之中。我国目前已有不少省市正在展开这一工作。我们基于奶牛胚胎移植技术在云南省的开发应用和奶牛胚胎性别鉴别与性别控制研究的需要,于1988年5月份开展了奶牛的胚胎移植工作。现将结果报告如下。     

基于高密度SNP标记的肉牛人工选择痕迹筛查

近年来随着遗传改良工作的实施,人工选择大大提高了肉牛的生产性能并使其遗传基础发生巨大改变。文章基于Illumina BovineSNP50(54K)和BovineHD(770K)两款芯片数据,采用FST检验方法分析牛群的遗传分化,并筛查人工选择在牛的基因组留下的印记。通过全基因组范围内的扫描,共发现47 104个"离群"位点和3064个群体特异的人工选择"候选基因",如CLIC5、TG、CACNA2D1、FSHR等。通过基因注释对基因的生物学过程和分子功能进行富集分析。文章构建了我国肉牛的全基因组的选择信号图谱,为深入研究人工选择和理解生物进化提供线索,且研究结果也显示人工选择对基因组的影响在牛品种遗传改良中发挥了重要作用。     

牛体细胞核移植显微操作环节的优化

本研究从牛卵母细胞去核方法(纺锤体观测仪法&Hoechst33342染色法)、供体细胞核引入去核卵细胞质的方法(卵细胞质注射法和电融合法)和重构胚胎电融合(3组参数)等3个环节对牛体细胞核移植的显微操作过程及相关参数进行了筛选优化。以核移植胚胎的卵裂率、囊胚发育率作为检测指标,对不同的方法所获得的克隆胚胎的卵分裂率与囊胚发育率进行比较,最后筛选获得1个优化的牛体细胞核移植操作程序,即采用Spindle view系统对牛卵母细胞进行去核操作,将供核体细胞注射到卵周隙,然后通过电融合法将供体核引入去核卵细胞质(电融合参数为1.9kV/cm,脉冲时程10μs,方波2次间隔2s)。以此核移植程序进行牛体细胞核移植实验,自获得克隆胚胎中筛选80枚优质囊胚移植到33头受体牛子宫内,最后2头母牛产下2头克隆牛犊,结果表明利用该优化的显微操作环节进行牛体细胞核移植可以获得体细胞克隆牛犊。     

Demecolcine化学辅助去核技术在牛体细胞核移植中的初步研究

本实验目的是研究demecolcine辅助去核的卵母细胞能否支持牛的核移植胚胎的发育。通过化学药物demecolcine处理牛MII期卵母细胞来辅助去除牛卵母细胞核,并用去核的卵母细胞做受体,进行核移植的研究。实验结果显示,demecolcine辅助去核后的卵母细胞质膜有明显一个或二个突起,并且突起内都含有卵母细胞染色体组,显示去核效果较好（57.89%～73.3%）。药物处理一小时为最适时间,去核率可达73.3%。对demecolcine辅助去核的卵母细胞的核移植胚胎发育情况显示囊胚率较盲吸法核移植胚胎较好（12.5%VS10.2%）,但二者差异不显著(p>0.05)。Demecolcine药物处理后的卵母细胞能够支持核移植胚胎的发育。Demecolcine辅助去核可以在牛体细胞核移植中的到应用。     

封面及有关照片说明——切割牛胚胎得到孪生牛

美国科罗拉多州立大学的科学家发明了一种切割和移植胚胎的技术,从一个胚胎产生二头动物。用这种技术可以增加良种动物的繁殖率,并可得到用于实验室研究的遗传学上一致的孪生动物。上图1为武田哲夫博士在福特·克林斯学校胚胎移植实验室里演示这种技术。他正准备把一个中空的玻璃吸管(他手指所指示的)插到一个放置一周牛胚胎的培养皿中。上图2是通过显微镜听见到的情况。他固定着一个将被分割的胚胎。用左侧的吸管借助吸力固定着胚     

基因表达谱分析牛早期胚胎发育过程的调控机理

早期胚胎的死亡会给畜牧业的发展带来巨大的经济损失, 特别是对于母牛生产来说更是如此, 因此研究早期胚胎发育过程具有极为重要的价值。文章从公共数据库GEO中选取了关于牛早期胚胎发育过程的一套基因表达谱数据, 通过显著性分析及聚类分析来研究牛早期胚胎发育过程中不同时期的基因组表达模式。结果表明: 整个牛早期胚胎发育过程大致可划分为3组不同的基因组表达模式阶段; 同时, 差显基因在不同时期表达量的波动情况表明8-细胞期和16-细胞期在牛的整个早期胚胎发育过程的重要性。另外, 通过进一步的功能注释和通路分析表明在牛胚胎早期发育不同阶段时期存在着一些重要因子及相关通路。     

美国重组型疫苗——扑灭非洲牛瘟

牛群一旦染上了牛瘟,死亡率高达90％以上。非洲人的游牧生活更加剧了这种牛瘟疫的蔓延,牛瘟成了非洲家畜死亡的头号杀手,每年给非洲大陆国家的经济损失达10亿美元之巨。一头公牛在索马里价值50美元,类似科威特、沙特阿拉伯伊斯兰教国家这些牛肉传统市场,就因为索马里国内发生了牛瘟疫流行病,已停止从索马里进口肉牛。目前的情况是,牛要是注射过疫苗,牛价便会成2-5倍的上调。     

我国水牛胚胎研究创4项世界第一

由中国农业科学院水牛所研究员黄右军主持的“水牛胚胎体外生产与胚胎移植技术研究”日前通过专家鉴定。据悉 ,该研究成果创 4项世界第一 :世界最大的试管水牛群 (生产 2 2头全部成活 ) ;世界首例完全体外化冻胚试管水牛 ;世界第一例试管水牛双犊 ;世界首列利用先人工授精后胚胎移植生产的不同品种的水牛双犊。其卵母细胞成熟率、受精分裂率和囊胚率分别为71.6%、5 2 .8%和 2 7.2 %。鉴定委员会专家一致认为 ,该研究成果建立的水牛体外受精胚胎生产技术安全、重复性好 ,达到国际领先水平。据了解 ,此项技术的研究成功 ,为开展水牛活体采卵—…     

法国宣布首次用DNA探针鉴别牛胚胎的性别

据《Newswatch》报道,由30名法国科学家组成的一个特别工作小组宣布制造了一种测定一周龄牛胚胎性别的方法,这种方法是以雄性具有的 Y 染色体的 DNA 杂交为基础。据说,到目前为止还没有人发现牛胚胎在发育的第6天就能鉴别出性别的方法。用 DNA 探针鉴别牛胚胎性别的优点是:1.运输已知性别的冷冻胚胎通过国境时要经过管理运输方面的多项国际卫生法规的检查;2.将使牲畜的生产和销售更简单、便宜;3.畜群管理人员可以预先知道公牛数和母牛数;4.能够将两个雄性胚胎移植给一个受体母牛,     

体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1克隆猪

转ω-3脂肪酸去饱和酶基因猪在优质猪培育及研究ω-3不饱和脂肪酸预防心血管和癌症疾病中的作用方面有着重大的应用.本研究首次通过体细胞核移植制备了转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1猪.将sFat-1基因转染到大白猪胎儿成纤维细胞,获得转基因阳性细胞克隆,然后以转基因细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎,胚胎体外培养或进行移植.先后移植了1889枚1~4细胞期克隆胚胎到10头受体母猪的输卵管内,28天B超检测9头受体母猪妊娠(90%),7头妊娠足月(70%)分娩产下21头仔猪,体细胞克隆猪的效率为1.1%(出生仔猪/移植胚胎).体细胞克隆猪效率的提高,主要是对克隆胚胎的移植环节进行了改进,比较了受体母猪排卵状况对胚胎移植效率的影响.当受体母猪卵泡发育处于即将排卵或正在排卵阶段,能够获得较高的妊娠率和妊娠足月率(100%),而排卵后移植妊娠足月率为0%.对健康存活15头克隆猪进行了PCR和Southern检测,证实13头为转基因猪,转基因阳性率为87%.RT-PCR检测13头转基因猪,12头表达sFat-1基因.以上结果表明,利用优化的体细胞转基因结合核移植技术,可以成功地批量生产转sFa...     

牛卵母细胞及着床前胚胎发育的蛋白质组学研究进展

蛋白质组学作为一种能够全景式展示特定生物学过程的蛋白质表达谱的高通量研究手段,正被应用到越来越多的研究领域。牛的卵子发生以及着床前胚胎的生长发育都离不开蛋白质的一系列变化,通过蛋白质组学的研究手段可对牛卵母细胞成熟以及胚胎发育分子机制进行研究。前人通过构建成熟前后的卵母细胞或不同时期的着床前胚胎等的蛋白质组表达谱,来获得与卵母细胞成熟相关的标志蛋白,并对这些标志物进行验证和分析,将有利于理解牛卵母细胞成熟、体外受精及着床前胚胎发育的分子机制,为提高牛卵母细胞的成熟率以及胚胎的发育率及提高牛繁殖率等奠定基础。主要从双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、色谱技术以及质谱技术等蛋白质组学研究手段为切入点,对蛋白质组学在牛卵母细胞和着床前胚胎发育过程中的研究进展进行综述,为进一步研究牛卵母细胞及附植前胚胎提供参考。     

热烈祝贺《动物学报》创刊70周年——莱阳农学院动物胚胎工程中心科研成果简介

2001年11月3日和6日,中国首例和第二例健康成活的体细胞克隆牛“康康”和“双双”在山东莱阳农学院动物胚胎工程中心实验场诞生。该项目是由山东省教育厅重大科研项目“克隆牛技术的研究（J01H06）”和莱阳农学院“克隆牛技术的研究（Y0006）”课题资助,研究出的体细胞克隆牛技术与国际上其他克隆牛技术相比,其创新点是：     

牛超数排卵技术研究进展

超数排卵是获得牛胚胎移植研究与应用所需可移植胚胎的重要途径。由于影响供体牛超数排卵的因素众多、复杂,几十年来供体牛每次超数排卵所获得的平均可移植胚胎数几乎没有增加,因此,如何提高超排效果成为研究热点。综述了近年来牛超排的最新研究进展,以期为牛超排效果的改善和胚胎移植效率的提高提供参考。     

Leptin基因的PCR-SSCP与牛体重、体尺指标的相关性

利用PCR—SSCP技术研究了南阳牛、秦川牛、郏县红牛、西镇牛、鲁西牛和荷斯坦奶牛6个牛品种539个个体leptin基因的遗传多态性。结果表明,PCR扩增产物大小为330bp,PCR—SSCP分析表现出多态。南阳牛、秦川牛、郏县红牛、西镇牛、鲁西牛和荷斯坦奶牛的A等位基因频率分别为0．558,0．492,0．571,0．658,0．591,0．615;B等位基因频率分别为0．442,0．508,0．429,0．342,0．409,0．385。不同基因型与体重、体尺等生长性状指标相关性分析的结果表明：南阳牛群体内除12月龄的体高和日增重、18月龄的坐骨端宽和日增重外,BB型个体的六月龄、十二月龄、十八月龄、二十四月龄体斜长、胸围、体重、坐骨端宽、体高和日增重均显著的大于AB和AA型个体（P〈0．05）;秦川牛群体内BB基因型个体十字部高上显著高于群体AA、AB型个体（P〈0．05）,即BB〉AA、AB,可作为秦川牛体尺指标（十字部高）候选基因之一,但在体重、胸围、体长指标上均无显著差异（P〉0．05）,所以不宜作为体重、胸围、体长指标候选基因;郏县红牛群体内AB与BB基因型个体在十字部高和坐骨端宽上显著高于群体AA型个体（P〈0．05）,而群体内不同基因型在体重和体尺指标（体高、体斜长、胸围）上无显著差异（P〉0．05）。序列分析表明,leptin基因多态是第66位发生G→T、第67位发生A→C及299位发生新的单核苷酸突变C→T所造成。