球孢白僵菌对壳聚糖降解作用的研究

在含有1%壳聚糖的培养基中,接种球孢白僵菌017菌株,25℃,200r/min振荡培养3天后,壳聚糖发生剧烈的降解作用,培养至第7天时,培养基的增比粘度(ηa.s)由7.07下降至0.76。粘度稀释法测定壳聚糖的粘均分子量(Mv)由3.5×10⁵下降至8.8×10⁴,剩余的可溶性氨基糖含量为345μg/ml。Sephadex G-200凝胶层析证明,壳聚糖被球孢自僵菌降解后存在着主要的均一组分。培养基中添加KNO₃,牛肉膏、N-乙酰氨基葡萄     

球孢白僵菌胞外壳聚糖酶的纯化和性质

球孢白僵菌Beauveria bassiana 1316-V1的培养上清液经硫酸铵分级沉淀,SephadexG-75凝胶过滤,Chitosan-bead亲和层析,第二次SephadexG-75凝胶过滤,得到电泳纯的一种胞外壳聚糖酶,比活力达到45u/mg。此酶的分子量为36kD;最适酶反应温度为60℃;最适pH为4.0;最适离子强度为0.25mol/LNaCl;37℃以下,pH2.0-5.0之间稳定性好;Cu^2 ,Hg^2 ,Pb^2 ,Ni^2 对该酶有强烈抑制作用;Ag^ ,Mn^2 也有较强抑制作用;Fe^2 有轻微激活作用,该壳聚糖酶是一种糖蛋白,含糖约为12.6%。酶的最适底物为脱乙酰度为90%的胶体壳聚糖;也能轻微水解CMC、DEAE-Cellulose和胶体几丁质;但不能水解片状的壳聚糖和几丁质。     

关于做好“纸层析法分离氨基酸”实验的总结

分析了影响“纸层析法分离氨基酸”实验效果的关键操作,并提出相应的解决方案.     

球孢白僵菌单孢子分离株在继代培养过程中菌落局变的遗传分析

研究了球孢白僵菌Beauveria bassiana单孢株继代过程中的菌落局变现象,并通过AFLP分析了角变子与原菌株间在分子水平上的差异。结果表明,野生型出发菌株Bb13的单孢分离株13S5和13S8在继代培养过程中均发生生长速率加快和产孢量下降现象。13S5在前5代,13S8在前6代产孢量有所下降但不显著,至第10代时产孢量比第1代分别下降了81.7%和69.0%。菌株角变现象在继代培养5-6代后表现明显,而13S8角变子出现的频率更高。AFLP指纹图谱分析表明,用20个引物组扩增出的98个位点中,两个角变子与野生型菌株间有12条差异条带,变异率达12.2%。由此证明单孢子分离株在继代培养中发生菌落局变后遗传物质已产生了变异。     

球孢白僵菌胞内几丁质酶的分离纯化及性质

球孢白僵菌(Beauveria bassiana)突变株CH-1316细胞裂解液经(NH_4)_2SO_4沉淀,DEAE-纤维素层析及凝胶过滤,分离出一种几丁质酶,该酶的分子量为32000;最适pH为5.0;最适温度为40℃;最适离子强度为0.2mol/L NaCl;Hg²⁺、Fe²⁺是该酶的强抑制剂;该几丁质酶完全不水解纯的片状几丁质,脱矿几丁质也不是该酶的良好底物;该几丁质酶水解几丁寡糖,但不水解几丁二糖;对几丁五糖以上的寡糖水解速度较快,而对几丁三糖和四糖水解速度则慢得多。     

层析法从血浆分离静注人免疫球蛋白及其初步检定

目的：实验尝试采用多步柱层析的工艺取代乙醇低温沉淀的方法,能高效的从血浆中获得IVIG产品。方法：通过亲和层析、离子交换一套工艺纯化出IVIG产品,进而按照枟中华人民共和国药典枠对静注人免疫球蛋白（pH4）及其关键指标进行了检测。在此基础上还采用免疫浊度法等方法,对其纯度和非目的蛋白构成与国际产品进行比较。结果：工艺获得IVIG产品的关键性指标检测均达到枟中华人民共和国药典枠的要求,其质量不低于现有国际同类产品。结论：本工艺能以较高回收率获得高质量的IVIG产品。     

球孢白僵菌对温室蚜虫的侵染生物学

研究了球孢白僵菌在不同浓度、施菌方式、温度和相对湿度下对温室蚜虫的侵染力以及接种后对蚜虫的侵染速率。结果表明,高(109个孢子.mL-1)、中(108个孢子.mL-1)、低(107个孢子.mL-1)3个浓度剂量对蚜虫都有较强的致病力,且浓度越大,蚜虫的死亡率越高,死亡时间越提前。用浸渍法和孢子浴法接种蚜虫,6 d的累积死亡率分别为100%和31.1%。在测试的3个温度(22、26、30℃)中,26℃时蚜虫侵染力最强,第3天出现死亡高峰,第5天时累积死亡率就达到100%,明显高于22、30℃的处理。相对湿度越大,球孢白僵菌的致病力越强,蚜虫死亡速度越快。在温湿度组合中相对湿度为95%时,温度对白僵菌的侵染力几乎无影响,但影响发病速度,相对湿度低于95%时,26℃的侵染力始终高于22和30℃时的侵染力。通过接种后不同时间段用0.2%百菌清处理蚜虫测定该菌株的侵染速率,结果表明接种后24 h是该球孢白僵菌有效侵染蚜虫的关键时期。     

球孢白僵菌羧基转运蛋白基因BbJEN1及其上游序列的克隆与分析

在分析一株球孢白僵菌TDNA插入突变体T12的Tagging序列的基础上,根据与其具有高度同源性的一条金龟子绿僵菌EST序列（编号为AJ273226）设计简并引物,用YADE法从球孢白僵菌中扩增出该EST的同源序列及其延伸序列。序列分析表明,该片段与粗糙脉孢霉的羧基转运蛋白JEN1具有高度同源性,由此确定该序列为球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1基因的部分序列。然后利用YADE法延伸扩增该序列的上、下游序列,获得球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1的全长DNA序列,命名为GBbJEN1。利用3′RACE扩增出球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1的cDNA序列,命名为BbJEN1。BbJEN1全长1656bp,编码514个氨基酸的蛋白。推测蛋白分子量为55975.37Da,等电点9.32。氨基酸序列与金龟子绿僵菌、粗糙脉孢霉和酿酒酵母羧基转运蛋白JEN1的同源性分别为77%、66%和30%。序列分析表明,GBbJEN1含有2个内含子。Southern杂交表明,GBbJEN1基因在球孢白僵菌基因组中为单拷贝。利用RTPCR法对BbJEN1的表达特性进行了分析,结果发现BbJEN1基因的转录受蟑螂壳、蝉蜕等昆虫体壁的诱导,受葡萄糖的抑制。进一步利用YADE法获得了长为977bp的GBbJEN1上游序列,其中含有可能的葡萄糖抑制调控序列和压力反应元件。     

载荷壳聚糖微球的海藻酸钠水凝胶的制备

目的:在支架材料上引入具有控释行为的微球,旨在通过微球包裹生长因子,通过生长因子的缓慢释放从而促进种子细胞的生长分化。方法:本实验通过在海藻酸钠水凝胶中负载具有控释功能的壳聚糖微球,并通过在微球中包载溶菌酶从而达到控制壳聚糖降解速率的功效。实验研究了不同搅拌速度下壳聚糖微球的形貌及粒径大小,通过扫描电镜对壳聚糖微球及复合支架的形貌进行了观察,通过紫外光吸收法测试了微球的载药量及包封率,并研究了壳聚糖微球在体外的降解行为等。结果:制备的壳聚糖微球表面较光滑,溶菌酶的包封率在25.78%-41.89%之间,载药量在15.20%-24.44%之间。包封溶菌酶的微胶囊在降解9天后壳聚糖分子量下降了70.40%,载荷微球的复合凝胶孔洞增多,孔洞大小均匀。结论:此复合材料有望作为载荷软骨相关生长因子的支架模型,从而解决软骨组织工程中种子细胞匮乏的问题。     

载荷壳聚糖微球的海藻酸钠水凝胶的制备

目的：在支架材料上引入具有控释行为的微球,旨在通过微球包裹生长因子,通过生长因子的缓慢释放从而促进种子细胞的生长分化。方法：本实验通过在海藻酸钠水凝胶中负载具有控释功能的壳聚糖微球,并通过在微球中包栽溶茵酶从而达到控制壳聚糖降解速率的功效。实验研究了不同搅拌速度下壳聚糖微球的形貌及粒径大小,通过扫描电镜对壳聚糖微球及复合支架的形貌进行了观察,通过紫外光吸收法测试了微球的载药量及包封率,并研究了壳聚糖微球在体外的降解行为等。结果：制备的壳聚糖微球表面较光滑,溶菌酶的包封率在25．78％41．89％之间,载药量在15．20％-24．44％之间。包封溶茵酶的微胶囊在降解9天后壳聚糖分子量下降了70．40％,载荷微球的复合凝胶孔洞增多,孔洞大小均匀。结论：此复合材料有望作为栽荷软骨相关生长因子的支架模型,从而解决软骨组织工程中种子细胞匮乏的问题。     

球孢白僵菌不同分离株对西花蓟马的毒力测定

【背景】西花蓟马是我国重要的一种入侵性害虫,已对多种化学农药产生了抗性。【方法】采用孢子悬浮液喷雾处理生测法,研究了8个球孢白僵菌菌株BbKM030716、BbCG051229、BbJS080625、BbQJ031121、BbXW060615、BbSM090521、BbYY090613和BbMZ051230对西花蓟马成虫的毒力,并用＂时间—剂量—死亡率＂模型进行了分析。【结果】供试球孢白僵菌各菌株对西花蓟马成虫侵染致病的剂量效应参数值分别为1.43、0.87、0.93、0.98、1.23、0.92、1.07和0.86。用1.25×104～1.25×108个·mL-1孢子悬浮液接种后,连续10d内西花蓟马的校正死亡率分别为44.13%～98.49%、12.63%～78.90%、30.36%～96.92%、51.36%～98.74%、26.14%～98.59%、7.27%～78.71%、49.06%～98.74%和27.67%～87.36%。球孢白僵菌对西花蓟马成虫的致死剂量是时间的函数,各菌株对西花蓟马成虫的致死中时随孢子浓度的增大而逐渐减小。【结论与意义】球孢白僵菌菌株BbKM030716、BbJS080625、BbQJ031121和BbXW060615对西花蓟马成虫具有较强毒力,可作为西花蓟马生防制剂开发的潜力菌株。     

球孢白僵菌响应氧化胁迫的分子机制研究进展

球孢白僵菌作为模式丝状真菌,以分生孢子、菌丝体、虫菌体等多种形态存在,在真菌孢子发育、寄主与宿主互作的研究中具有重要意义。同时,球孢白僵菌又是一类广泛应用的真菌杀虫剂,对森林防护和农业生产具有实际应用价值。球孢白僵菌的相关基因被敲除后,突变体响应氧化胁迫,孢子发育和毒力会发生改变。本文综述了近年来球孢白僵菌在响应氧化胁迫方面的研究进展,为丝状真菌氧化胁迫信号途径的研究提供参考。     

球孢白僵菌对大豆蚜毒力的室内生物学测定

对来源于吉林省不同地区的15株球孢白僵菌Beauveria bassiana(Bals.)Vuill.菌种对大豆蚜Aphis glycines Matsumura毒力进行了室内生物学测定。所有供试菌株对大豆蚜虫均有一定的致病性,杀虫效率差异明显,杀虫效率与孢子浓度和作用时间均呈正相关。通过对大豆蚜毒力室内生物学测定结果的综合分析,菌株S14-X-1为毒力较高菌株,具有进一步研究应用价值。     

从松叶蜂分离的球孢白僵菌及其致病性

从东北伊通红松林采集的自然染病死亡的帕克阿扁松叶蜂Acantholyda 虫尸上分离获得一株球孢白僵菌,定名为FDB01。用该菌株孢子悬浮液感染油松阿扁叶蜂Acantholyda posticalis和落叶松叶蜂Pristiphora erichsonii幼虫,研究该菌株的致病情况。结果表明,用浓度为2×108孢子/mL的孢子悬浮液处理16d后,该菌株对油松阿扁叶蜂和落叶松叶蜂的致死率分别达到了94.4%和100%,说明该菌株对松叶蜂具有很强的致病力。     

以壳聚糖为载体金属螯合亲和层析法纯化猪红细胞Cu·Zn—SOD

从虾壳制备所得壳聚糖为基质合成金属螫合亲和吸附剂,用于纯化猪血铜锌超氧化物歧化酶(Cu·Zn-SOD),得到比活为4756U·mg-1的酶蛋白,收率为67%,纯化倍数为6.1.聚丙烯酰胺凝胶电泳及活性染色定位表明,经螯合层析纯化后的酶纯度基本均一.     

球孢白僵菌在棉铃虫表皮上萌发的研究

在扫描电子显微镜下,观察了球孢白僵菌三株不同毒力菌株的分生孢子在棉铃虫幼虫表皮表面的萌发,发现高、低毒力菌株的分生孢子都能在棉铃虫幼虫表皮上萌发和生长,但高毒力菌株的萌芽管伸长至分生孢子长径的1.5～2.5倍时能发生定向生长,垂直向里穿透表皮,低毒力菌株的萌芽管呈蔓延生长,极少有穿透表皮的发生,偶见极度伸长的菌丝穿透表皮。此外,还发现球孢白僵菌穿透菌丝穿透表皮的过程不是垂直向里一步完成的。