南方鲇线粒体DNA物理图谱及分析

南方站（SilurusmeridionalisChen）是我国重要的淡水经济鱼类,广泛分布于长江和珠江流域。南方站与翎（Sasotus）形态结构相似,生态习性相近,两者曾长期混淆在一起,1987年成庆泰等将其定为一新种［’1。目前,对南方站的研究主要集中于生物学特性、生长发育、生理生化及营养成分分析、组织学及繁殖生物学等方面,有关其线粒体DNA（mitochondrialDNA）方面的研究还未见报道。为进一步开展南方翎的遗传育种研究工作,我们构建了南方都mtDNA的物理图谱并进行了初步分析。l材料和方法1．l材料来源南方站由湖北省水产科学研究所提供。1…     

鹅源腺病毒基因组DNA物理图谱的构建

将鹅源腺病毒Ｙ８１Ｇ４株全基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ酶切片段分别插入质粒ｐＵＣ１８,成功构建了全基因组ＤＮＡ文库。在此基础上,将重组质粒携带的插入片段切出、回收并分别用地高辛标记后作为探针,与经限制酶ＢａｍＨⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ、ＥｃｏＲⅤ消化的病毒基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ,杂交结果经比较综合后获得了该病毒基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ、Ｅｃ     

鹅源腺病毒基因组DNA物理图谱的构建

将鹅源腺病毒Y81G4株全基因组DNA的HindⅢ酶切片段分别插入质粒pUC18, 成功构建了全基因组DNA文库.在此基础上,将重组质粒携带的插入片段切出、回收并分别用地高辛标记后作为探针,与经限制酶BamHI、EcoRI、PstI、Eco RV消化的病毒基因组DNA进行Southern Blotting,杂交结果经比较综合后获得了该病毒基因组DNA的HindⅢ、Ba mH I、EcoR I、PstI、EcoR V限制性内切酶的物理图谱.利用已发表的含有鸡EDS76病毒AA-2 株基因组DNA右末端的重组质粒pBE42作为探针,与本病毒两末端重组质粒进行Southern Blo tting,根据同源性杂交结果确定了本病毒基因组DNA物理图谱与EDSVAA-2株相应的方向. 本病毒基础因组DNA物理图谱的精确构建,为进行基因组结构分析,筛选复制非必需区,构建禽腺病毒载体打下了基础.     

大熊猫线粒体DNA的九种限制酶图谱

本文用9种限制性内切酶（BamHⅠ,BglⅠ,BglⅡ,EcoRⅠ,EcoRⅤ,PstⅠ,PvuⅡ,SalⅠ,XhoⅠ）分析大熊猫的线粒体DNA（mtDNA）。构建其中5种酶（BamHⅠ,EcoRⅠ,EcoRⅤ,PstⅠ,PvuⅡ）的mtDNA物理图谱。大熊猫mtDNA的分子大小约为16.4 Kb,酶切位点是随机分布。我们的结果为进一步研究大熊猫mtDNA进化提供了基础资料。     

中国大陆若干群体的黑果蝇的线粒体DNA多态性研究

本文研究了果蝇Ｄ．ｖｉｒｉｌｉｓ种群Ｄ．ｖｉｒｉｌｉｓ线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ,ｍｔＤＮＡ）的多态性。用９种限制性内切酶ＸｂａⅠ,ＥｃｏＲⅠ,ＰｓｔⅠ,ＨｉｎｄⅢ,ＢｇｌⅡ,ＳａｃⅠ,ＳｃａⅠ,ＥｃｏＲＶ和ＰｕｖⅡ,对青岛、南京、上海、宁波与泉州５个Ｄ．ｖｉｒｉｌｉｓ群体的ｍｔＤＮＡ进行了限制性片段长度多态性（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｓｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＲＦＬＰ）的研究。在５群体中,发现５种不同的酶切图谱,它们彼此之间的遗传差异π为０．４６％－１．７６％,群体内遗传差异πｉｊ为０．００％－０．３３％,群体间的差异ｄｘｙ,为０．００％－０．８２％。分布于中国大陆的Ｄ．ｖｉｒｉｌｉｓ的群体间遗传差异在总遗传差异中所占比例γｓｔ值为２４．６２％。我们发现,Ｄ．ｖｉｒｉｌｉｓ的栖息环境对ｍｔＤＮＡ的遗传变异有十分明显的影响,而不同地理纬度的群体之间其遗传距离并无倾群（ｃｌｉｎｅ）表现。     

太湖新银鱼线粒体DNA物理图谱及分析

采用改进的碱裂解法制备太湖新银鱼线粒体DNA,构建其PvuⅡ、BamHI、X hoI、SalI、EcoRI和PstI等6种限制性内切酶的物理图谱。比较了鲑形目3种鱼的线粒体DNA物理图谱,根据限制性位点差异法计算它们之间的遗传距离, 利用UPGMA聚类分析法构建分子聚类图,结果表明:红点鲑属与大西洋鲑先聚在一起,再与太湖新银鱼相聚,前两者间遗传距离为12.33%,亲缘关系较近,太湖新银鱼与这两者间的遗传距离为21.36%,亲缘关系较远,表明银鱼科与鲑科分离较早。 Abstract:The mitochondrial DNA(mtDNA)from Neosalanx taihuensis Chen was prepared by the improved alkaline lysis procedure.The cleavage sites map of six kinds of restriction endonucleases(PvuII,BamHI,XhoI,EcoRI and PstI)was determined.The physical maps of mtDNAs from N.taihuensis Chen,Salvelinus taxa and Salmo salar were analyzed.Genetic distances between mtDNAs were calculated by the formula of Nei and Li(1979).Phylogenetic reconstruction method,UPGMA,was used to analyze the genetic relationships and the molecular dendrogram was established and revealed:the genetic distance between Salvelinus taxa and Salmo salar is 12.23% and that between N.taihuensis Chen and Salvelinus taxa-S.salar is 21.36%.Thisc indicates that Salangidae diverged from Salmoninae earlier.     

玉米CMS线粒体DNA R多型性分析及物理图谱构建

合成玉米CMS-S线粒体DNAR区域端点和orf77两端的特异引物,对Mo17、W23、77为核背景的N、C、T、S等4种胞质的的26个CMS材料的线粒体DNA进行了PCR扩增,结果表明orf77和R区域具有典型的胞质特异性：S组中有完整的R区域和orf77;T组中有部分R区域,可以扩增出orf77的的对应片段,但其核苷酸序列与S组orf77不同;正常胞质（N）中有部分R区域,但不包含完整的orf77;C胞质中不包含R区域,结果表明orf77是玉米S组CMS特异的胞质育性候选基因。在进行连锁群步移的基础上,建立了基于BAC文库、双酶切和Southern杂交的构建线粒体DNA物理图谱的体系,绘制Mo17CMS-J线粒体DNAR区的部分物理图谱。理论上,此法可以构建出覆盖线粒体基因组全长的物理图谱。     

滑鼠蛇肝线粒体DNA的限制酶图谱

用六种限制性内切酶BamHⅠ、EcoRⅠ、PstⅠ、BglⅠ、BglⅡ和SalⅠ对滑鼠蛇肝脏线粒体DNA(mtDNA)进行酶解。发现BglⅡ、PstⅠ、BamHⅠ、BglⅠ和EcoRⅠ在滑鼠蛇肝mtDNA上分别有1、2、3、3和4个切点。SalⅠ不能切割滑鼠蛇肝mtDNA。根据滑鼠蛇肝mtDNA的单酶、双酶完全酶解及部分酶解片段的数目和分子量,建立了滑鼠蛇肝mtDNA的限制酶图谱。     

西藏小型猪的线粒体DNA控制区分析

目的研究西藏小型猪的遗传标记以及与其他国内地方猪的亲缘关系。方法扩增102头西藏小型猪以及16头巴马小型猪、17头贵州香猪的线粒体DNA控制区,测序并与国内其他猪进行比较。结果西藏小型猪线粒体DNAD-loop区分三个区域。串联重复序列区处于中间位置,包含有15～29个10 bp的重复片段,分为A、B两种类型。D-loop 3′端340 bp,与国内其他猪的序列相同比较保守;5′端704 bp,共有22个变异位点。由22个变异位点中归纳出25个单倍型,其中有两种主要的单倍型,分别占34.4%和36.6%。根据三个转换位点：305、500、691,将西藏小型猪分成了两组,几乎与串联重复序列所分的A、B两组类型相对应。与西藏小型猪相比,巴马小型猪和贵州香猪D-loop 5′端变异位点较少,分别只有4种和2种单倍型,串联重复区也只有一个类型。结论西藏小型猪可能有两个母系祖先并且与我国西南地区的品种猪有较近的亲缘关系;不同的串联重复片段类型和5′端的变异位点可以联合组建西藏小型猪的遗传标记。     

洞庭青鲫与其他六个鲫鱼品系线粒体DNA控制区的比较分析

运用PCR扩增、克隆、测序等技术,在获得洞庭青鲫和彭泽鲫线粒体DNA控制区全序列的基础上,对洞庭青鲫、彭泽鲫、普通鲫、红鲫、白鲫、A系和D系银鲫等7个鲫鱼品系线粒体DNA控制区的碱基组成、变异情况、序列结构和系统进化进行了比较分析。结果表明,7个鲫鱼品系线粒体DNA控制区碱基的平均组成为A:(32.7±0.16)%,C:(20.4±0.37)%,G:(14.1±0.08)%,T:(32.8±0.36)%,序列分歧率为0—5.7%,其中红鲫和白鲫的分歧率最大(5.7%),彭泽鲫、A系和D系银鲫之间最小(0)。洞庭青鲫与白鲫的分歧率为5.6%,与彭泽鲫、A系和D系银鲫为2.2%,与红鲫和普通鲫分别为0.8%和0.7%。对比哺乳动物线粒体DNA控制区结构,并参照其他鱼类序列,将7个鲫鱼品系的控制区分为终止序列区、中央保守区和保守序列区三个区域。同时识别了7个鲫鱼品系中一系列保守序列,并给出了它们的一般形式。序列差异和系统进化分析表明,在7个鲫鱼品系中,洞庭青鲫与普通鲫和红鲫的亲缘关系最近,与彭泽鲫、A系和D系银鲫亲缘关系次之,与白鲫的亲缘关系最远,而彭泽鲫、A系和D系银鲫三者在线粒体DNA控制区的相似性和分歧率上则表现为是同一个鲫鱼品系。       

三个鲫品系DNA含量的比较研究

采用流式细胞术 (FCM)对红鲫、彭泽鲫、异育银鲫进行红血球DNA含量的检测分析比较 ,以鉴定它们的倍性。结果显示 ,红鲫红血球的DNA含量是 3 0pg ,彭泽鲫是 4 7pg ,异育银鲫是 4 8pg。显而易见 ,彭泽鲫的DNA含量是二倍体红鲫的 1 57倍 ,异育银鲫的DNA含量是红鲫的 1 6倍。采用肾细胞直接制作染色体的方法进行红鲫、彭泽鲫、异育银鲫的染色体倍性鉴定 ,结果红鲫的染色体数目是 10 0 ,为二倍体 (2n =10 0 ) ,彭泽鲫的染色体数目是 162 ,为三倍体 (3n =162 ) ,异育银鲫的染色体数目是 156— 162 ,为三倍体 (3n =156— 162 )。研究证明 :不同品系鲫的DNA含量高低与染色体的倍性有显著的正相关性     

不同地理区域鲫鱼染色体银染核仁组织者的比较研究

本文对不同地理区域的鲫鱼(Carassius auratus)—滇池高背鲫、低背鲫、方正银鲫(C.auratusgibelio)的核型及核仁组织者NORs进行了比较研究,并对高背鲫来源作些初步探讨,结果如下: 1.低背鲫Carassius auratus (back low type):2n=100,22m+30sm+48t.st,NORs=4,出现于第5—6对亚中着丝粒染色体短臂。 2.滇池高背鲫Carassius auratus(back high type):2n=156,30m+46sm+80t.st,NORs=6,出现于第5—7对亚中着丝粒染色体短臂。 3.方正银鲫C.auratus gibelio:2n=162,32m+52sm+78t.st NORs=4,出现于第5—6对亚中着粒染色体短臂。     

四个鲫鱼品系线粒体DNA的限制性酶切分析

用差速离心和核酸酶消化法从红鲫 (C auratusredvar .)、湘鲫 [F1hybridsofredcruciancarp (♀ )×commoncarp (♂ ) ]、野鲫 (C auratusauratus)和白鲫 (C auratuscuvieri)的肝组织及白鲫的卵巢中提取和纯化线粒体DNA。用 9种内切酶 (EcoRⅠ、HindⅢ、PstⅠ、BglⅡ、BamHⅠ、XhoⅠ、XbaⅠ、SalⅠ和KpnⅠ )进行单酶酶解 ,经琼脂糖凝胶电泳分析 ,检测出PstⅠ、KpnⅠ和BglⅡ 3种酶在品系间存在限制性片段长度多态性 ,但并未检测出品系内的限制性片段长度多态性。计算出红鲫、湘鲫、白鲫和野鲫的mtDNA大小分别约为 16 19、 16 0 2、 16 6 0和 16 0 6kb。根据限制性酶切片段共享度 ,计算出 4个品系间的遗传距离 ,结果表明存在直接亲缘关系的红鲫与湘鲫之间的遗传差异最小 ,证实了红鲫与子代湘鲫之间mtDNA遵循母系遗传的特性。     

鲫鱼(Carassius auratus)外周血细胞显微和亚显微结构的观察

本文记载了用光镜和电镜观察鲫鱼外周血细胞所得的结果。 用光镜观察以Wright氏染液染色的血涂片,可区分出下列各种类型的血细胞:红血细胞,淋巴细胞,血栓细胞,单核细胞,中性、嗜酸和嗜碱粒细胞。此外,在外周血液中还可以看到少量未成熟的红血细胞。 在外周血液中,嗜酸和嗜碱粒细胞的数量极少。但在头肾和脾等造血组织中这类细胞的数量较多。 鲫鱼外周血液中各种血细胞的超微结构,基本上和人类以及其他鱼类相应血细胞的超微结构相似。     

野生鲫和五个金鱼品种的判别分析和聚类分析

对野生鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ）和五个金鱼品种（Ｃａｒａｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｖａｒ．）的亲缘关系进行了比较研究。（１）两组判别分析表明,以１７个形态变异性状的指标衡量野生鲫鱼和金鱼以及金鱼各品种之间的差异,说明金鱼的种下分化是明显的（Ｆ〉〉Ｆ０．０１）。（２）对６个品种（包括鲫鱼）各２０尾鱼（计１２０个个体）进行１７个指标的聚类分析,结果大部分个体（占各品种的５０￣１００％）     

我国现有的金鱼品种的分类及其系统发育的探讨1)

一、引言 金鱼是我国广大人民乐于饲养的一种家养观赏鱼类。它是由野生红黄色鲫鱼演变而来的。明朝李时珍在《本草纲目》中记载:金鱼“述异记载晋桓冲游庐山,见湖中有赤鳞鱼,即此也。”他还写道:“自宋始有畜者,今则处处家养玩矣。”因此可以认为金鱼起源于我国晋朝(公元265—420年间)。至今已有一千多年的历史了。 李璞(1959)报道了我国的金鱼品种已有二十余个。徐金声等(1980)报道有143个之多。耶么迄今为止我国的金鱼品种究竟有多少呢?为了弄清我国的金鱼品种资源,作者曾在北京等十七个省市的各大公园和花木公司所属鱼场作了调查。在调查过程中,我们     

银鲫原肠胚差异表达基因的筛选

胚胎发育是基因组中各个基因在时间和空间上选择性表达的结果。为了鉴定参与鱼类早期胚胎发育和胚层分化的调控因了,分别构建了银鲫(Carassiusauratusgibelio)原肠胚和成熟卵子的SMARTcDNA文库,并采用差异筛选的方法,从银鲫原肠胚SMARTcDNA文库中筛选不同于成熟卵子的差异表达基因。通过菌斑和PCR产物的两轮斑点杂交,从大约1500个克隆中筛选出131个阳性克隆,从中选择58个克隆测序并将测得的序列进行了数据库比对分析,结果显示这些差异表达基因大部分为参与转录和翻译的调控因子和核糖体蛋白以及一些在胚胎早期大量表达的参与脂类代谢的脂蛋白和一些未知的新基因。接着采用RTPCR技术,对其中6个基因在胚胎发育不同阶段的表达特征进行了分析,进一步证实这些基因在胚胎发育过程中存在表达差异;研究还从分析的基因中揭示出4类不同的表达模式。通过本研究,已筛选出一批在银鲫胚胎发育早期开始表达的调控基因,为开展鱼类胚胎发育早期表达基因的功能研究奠定了前期工作基础。       

银鲫ZP3的表达特征和卵壳ZP3蛋白的分离

克隆得到银鲫(Carassius auratus gibelio)ZP3基因全长cDNA,在体外表达出银鲫的ZP3融合蛋白,并制备出多抗血清;通过免疫印迹和RT-PCR分析,研究了银鲫ZP3在卵子发生过程中的表达特征和在早期发育胚胎中的状态变化。研究结果表明,银鲫ZP3的转录发生在卵黄发生以前,而ZP3蛋白的翻译起始于卵黄形成阶段,且随着卵母细胞进一步成熟,其含量不断增加。ZP3蛋白的存在状态在受精后和早期胚胎发育过程中发生了明显变化。在受精后5-30min期间,抽提液中原始的ZP3蛋白带迅速消失,取而代之的是分子量大约为90KD以及更高分子量的蛋白带;而在受精后80min和8-16胞期的胚胎抽提液中,二聚体和多聚体复合体蛋白带也相继消失。这种状态变化意味着ZP3蛋白在卵子受精后有可能与自身或其他蛋白共价结合转变成了二聚体和多聚体。接着,用获得的ZP3抗体作为检测指标,通过卵壳蛋白的凝胶分离,从卵壳中分离纯化出银鲫ZP3蛋白。       

鲫鱼后鳃体结构与功能的研究

本文对鲫鱼后鳃体的形态结构及其功能进行了初步研究。结果表明,鲫鱼后鳃体是一种内分泌腺体。腺体由滤泡组成,滤泡上皮包括二种颗粒细胞(亮细胞和暗细胞)和一种支持细胞。对不同性腺期的鲫鱼后鳃体的观察表明,后鳃体滤泡细胞随性腺发育增加高度,滤泡增生,腺体体积增大。而性腺成熟后期,后鳃体滤泡上皮有崩溃现象。揭示后鳃体可能与性腺发育有关。用免疫组织化学的非标记过氧化物酶技术对鲫鱼后鳃体进行激素降钙素的定性定位研究,观察到滤泡上皮的颗粒细胞发生阳性反应,由此证明颗粒细胞可分泌降钙素。