染色体显微切割与DOP—PCR结合对赤麂Sry基因克隆，测序及初步定位

应用显微切割技术获得赤麂1号,Y1,Y2染色体,通过DOP－PCR增加模板DNA拷贝数,然后用人的性别决定基因（Sex-tetermininig Region of the Chromosome Y,SRY)中HMG框内设计1对引物,对DOP－PCR产物进行扩增,在雄性赤麂Y2染色体DOP－PCR产物中扩增出与人SRY基因同源的Sry基因片段,克隆,测序,首次在分子水平上证明赤麂Y2染色体是真正的Y染色体,同时对赤麂Syr基因进行了初步定位。     

荧光原位杂交技术(FISH)在鱼类遗传学研究中的应用及前景

荧光原位杂交技术（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）是一种在分子水平上进行了细胞遗传学研究的得力工具,本文综述了近年来ＦＩＳＨ技术在鱼类的基因定位,性别鉴定,染色体变异及种间杂交等研究中的应用;并将此技术在鱼类的基因定位,早期性别鉴定,染色体重排与进化,染色体鉴别与分类及杂交鉴定等方面的应用前景作一展望。     

Y连锁遗传的通径分析

在XX-XY型生物中,限雄遗传性状即只能 由父亲传至儿子的性状,完全由Y染色体传 递(1]。人类中,属于Y连锁的性状,已知有辜丸 决定因子（TDF）和Y组织相容性抗原（HY抗 原）,可能还包括毛耳等少数几个性状131。鉴于 Y染色体仅载有少数几个基因,不像X染色体 携带着大量基因,因而至今关于伴性遗传的群 体遗传分析几乎只以X染色体为对象,很少对 Y连锁遗传进行分析。今后随着实验手段等的 发展,Y染色体上的基因肯定会逐渐地增加,因 此有必要对此加以讨论。     

人类基因定位

基因定位的工作可以向前追溯到本世纪的初期,某些遗传性状或遗传疾病是性连锁遗传,特别是与X染色体相连锁。所以,通过家系调查可以积累证据,确定它们的基因位于X染色体上。关于Y染色体上的基因,除了决定睾丸和H-Y抗原的位点外,基本上还是一无所知。最近十几年来,特别是近5年来,由于体细胞杂交和其它一些新技术的发展,基因定位工作有了较大的发展,人们不仅能对性染色体上的基因定位,而且也能对常染色体上的基因进行定位。人的结构基因(指决定特定蛋白质多肽链上的氨基酸顺序的DNA片段,     

雄性学研究(2)

Y染色体为男性特有,因此其与男性特有的遗传性密切相关。根据Y染色体特性和功能特点,可将Y染色体分区,为基因的定位打下了基础。其中位于Y染色体短臂上的性别决定基因(Sex region of Y chromosome,人类以SRY、小鼠以Sty表示)的研究进展是近几年来人类在性别决定、性别分化研究中获得的最大的突破性成果。20世纪50年代以前还象谜团一般有关性别决定、性别分化的问题,随着细胞、分子生物学技术迅速发展,被逐步剥去层层神秘色彩,在染色体、DNA水平上得以阐明。     

人类性染色体与遗传病

人体细胞内有46条染色体,其中44条常染色体为男女共有,两条性染色体,男女有别,正常女性有两条X染色体,核型为46,XX;正常男性有一条X染色体和一条Y染色体,核型为46,XY。按人类染色体命名的国际体制,人类的46条染色体两两相配成23对,分7组,X染色体属C组,具亚中着丝粒,Y染色体属G组,有近端着丝粒。随着基因定位技术的不断发展,人们已将三千多个基因     

胃癌差异表达基因在染色体上的定位及其功能分析

利用标准化的Affymetrix公司生产的U133A基因芯片检测胃癌（T）与切缘正常胃黏膜（C）基因表达谱差异,并利用生物信息学方法对检测结果进行差异基因在染色体定位和功能分析。结果表明：胃癌与正常胃黏膜比较差异8倍以上共有270个基因,其中表达上调[信号比的对数值（SLR）≥3]有157个,表达下调（SLR≤-3）有113个。从表达差异的基因在染色体定位分析,发现除4个基因未知其定位外,其余所有差异表达基因散在分布和各条染色体上,但以1号染色体为最多,有26个（占9．8％）,其次是11和19号染色体上分别有24个（各占9．1％）。而差异表达的基因发生在染色体短臂（q）上有173个（占65％）。从表达差异的基因功能分类看,属于酶和酶调控子基因最多（67个,24．8占％）,其次是信号传导基因（43个,占15．9％）,第3类是核酸结合基因（17个,占6．3％）,第4类是转运子基因（15个,占5．5％）,第5类是蛋白结合基因（12个,占4．4％）,还有功能未知的基因有50个,占18．5％。以上5大类共占基因总数56．9％。胃癌差异表达基因散在分布在各条染色体上,但以1、11、19号染色体差异表达基因居多。这5大类（酶和酶调控子、信号传导、核酸结合、转运子、蛋白结合）相关基因异常是今后研究胃癌的重要基因。     

基于基因组重测序的藏羚Y染色体多态性遗传位点筛选

藏羚Pantholops hodgsonii是藏羚属Pantholops现存的唯一物种,由于Y染色体基因较保守,基于近缘物种的Y染色体多态性遗传位点筛选受到了很大的限制。本研究对15份藏羚新鲜组织样品进行基因组重测序,生物信息分析筛选出Y染色体雄性特异区（MSY）对应的scaffolds,对部分SNP及SSR位点进行多态性验证。共比对出44个scaffolds,以其中序列最长、候选变异位点最多且最完整的KE113803.1为参考,对其中190个SNP变异位点设计引物进行验证,共获得45条MSY DNA序列,其中15对引物扩增到的11 898 bp DNA序列中检测到27个SNP位点;同时对KE113803.1中除单核苷酸重复以外的134个SSR位点设计引物并验证多态性,筛选出56个Y-SSR位点,其中5个具有多态性。本研究结果为后续分析藏羚Y染色体遗传多样性及父系遗传奠定了良好基础。     

用染色体畸变品系对果蝇调控基因E（w^a）的定位

在果蝇中,杏黄色眼基因w^a和它的野生型白眼等位基因w的区别在于前者的转录单位中插入了反转录病毒样转座因子copia。半显性突变基因E（w^a)以反式方式降低w^a的活性,对多余翅脉基因px,E（wa)和翅腋具黑点基因sp 的遗传重组分析进一步确定了E（w^a)与sp的重组图距为0．2图距单位,并将E（w^a)定位于第二染色体右臂的2－106．8处,为了对E（w^a)进行细胞学的基因定位,4个Y;2易位品系,1个1;2易位品系和3个2R缺失品系与适当的E（w^a)品系进行杂交,并对其雄性子代进行复眼眼色和翅黑点的检查,结果表明E（w^a)位于第二染色体右臂60B的端粒端。我们用γ射诱变获得了一个E（w^a)突变体和两个sp 的突变体,并检查了它们的唾腺染色体,前者为E（w^a)的回复子,一段来源是有的染色体片段插入在60B5－13的位置,很可能在60B8－9的位置上,这个位置就是E（w^α）的座位,后者在60C1－2的位置上都看到了染色体的断裂点,表明该位置为sp 的基因座位。综合细胞学基因定位和遗传重组基因定位的资料,E(w α）被定位于60B5－13的位置,很可能在60B8－9的位置,它位于sp基因的左侧,二者相距很近。     

男性不育与Y染色体

目的：观察精子数目异常与小Y染色体及内分泌性腺激素水平。方法：对262名少精及无精症患者检测染色体,并对其中11例小Y染色体及随机抽取的15例Y染色体正常的患者运用磁性分离酶免疫测定法分别检测性腺激素。结果：小Y染色体检出率为4.19％（11／262）,其内分泌性腺激素均呈高卵泡刺激素、高黄体生成素和低睾酮水平,与Y染色体正常的无精及少精症患者相比较．差异有显著性（P〈0．05）。而小Y染色体不同精子数组各内分泌性腺激素比较,差异无显著性（P〉0．05）。结论：精子数目畀常可能与小Y染色体有关,小Y染色体基因改变可能是导致其内分泌性腺激素的变化因素。     

高低转移卵巢癌细胞株差异表达基因在染色体定位及其功能

用基因芯片技术研究高（H）、低（L）转移卵巢癌细胞株（HO-8910PM和HO-8910）和正常卵巢上皮（C）基因表达谱差异,筛选与卵巢癌转移相关的基因,并利用生物信息学方法对检测结果进行差异基因在染色体定位和功能分析。结果：高、低转移卵巢癌细胞株比较表达差异2倍以上共有409个基因,其中表达上调（信号比的对数值[SLR]≥1）有271个,表达下调（SLR≤-1）有138个。从表达差异的基因在染色体定位分析,发现除1个基因未知其定位外,其余所有差异表达基因散在分布于各条染色体上,但以1号染色体最多有43个（占10．7％）。其次是6号染色体有39个（占9．6％）,第三是2号染色体有29个（占7．1％）。第四是17号染色体有28个（占6．9％）。第五是3号染色体有25个（占6．2％）。第6是5号和11号染色体各有24个（各占5．9％）。而差异表达的基因发生在染色体短臂（q）的有264个（占64．7％）,在13,14,15,21和22号仅发现在q都有异常表达。从表达差异基因的分子功能分类看,属于酶和酶调控子基因为最多（104个,占25．4％）,其次是信号传导基因（43个,占10．5％）。第3类是核酸结合基因（42个,占10．3％）。第4类是蛋白结合基因（34个,占8．3％）。以上4大类共占基因总数54．5％。还有功能未知的基因有76个,占18．6％。高、低转移卵巢癌细胞株差异表达基因散在分布在各条染色体上,但以1、6、2、17、3、5和11号染色体差异表达基因居多。肿瘤的转移是多基因共同作用的结果。4大类（酶和酶调控子、信号传导、核酸结合和蛋白结合）相关基因异常是我们今后研究卵巢癌转移的重要基因。     

水稻光敏素基因(phyA)和-1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因(rbcS)的染色体定位

以生物素标记的水稻单拷贝光敏素基因（ｐｈｙＡ） 和１ ,５二磷酸核酮糖羧化酶／ 加氧酶小亚基基因（ｒｂｃＳ） 的基因组克隆为探针,其大小分别为６ ．６ 和１ ．１ ｋｂ ,通过原位杂交技术将它们分别定位到水稻染色体上。ｐｈｙＡ 和ｒｂｃＳ基因的检出率分别为２９ ．７９ ％ 和２１ ．５６ ％ 。ｐｈｙＡ在第３ 染色体上有３ 个座位：长臂近着丝粒、短臂末端、长臂中部。ｒｂｃＳ分别定位于第７ 染色体长臂近着丝粒（８ ．６２ ％ ） 、第５ 染色体长臂末端、第６ 染色体长臂距着丝粒近２／３ 处。此外,对信号转导相关基因定位的意义,水稻染色体的准确识别、功能基因在染色体上的分布及位置意义等也进行了讨论。     

Y基因组分化及其进化意义

在同倍体（homoploid）植物杂交－分化的物种形成（speciation）过程中,杂交后代与亲本之间的有效生殖隔离是新物种形成的关键。杂种与亲本在时间、空间、生态环境和基因水平上的隔离,保证了杂种后代的分化和稳定,并逐渐形成新物种。为了研究披碱草属（Elymus）含S_tY基因组四倍体物种的系统演化关系,本文对来自亚洲不同地理分布区的26种披碱草属植物进行了大规模的种间杂交和杂种F₁减数分裂染色体配对行为的分析。结果表明各物种之间有不同程度的杂交亲合力,杂交结实率在各杂交组合之间有较大的变异（在4.8%-100%之间）;但各物种之间的杂种F₁完全不育。证明各物种之间形成了明显的生殖隔离。种间杂种F₁减数分裂中期-I染色体配对分析的结果进一步表明,S_tY基因组随各披碱草属物种地理分布的不同而有不同程度的分化。来自同一分布区（如东亚或西亚分布区之内）物种的S_tY基因组分化程度较低,但来自不同分布区（如东亚和西亚）物种之间相同的S_tY基因组具有显著的分化。表明地理隔离对含S_tY基因组物种的分化起到了十分重要的作用。通过对种间和种内杂种F₁的减数分裂异常现象和染色体配对频率变化规律的分析,作者认为细胞学水平的变化,如基因组同源性的分化和染色体结构的变异等都在杂种后代与亲本之间产生生殖隔离并逐渐形成新物种的进化过程中起到了积极的作用。     

用原位杂交法定位猪乳铁蛋白基因于染色体2q^12

本研究以非放射性标记的猪乳铁蛋白（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｌｉａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ简称ＰＬＦ）ｃＤＮＡ为探针,通过染色体原位杂交法,对ＰＬＦ基因了染色体进行了染色体定位。实验中采用金胶抗体技术并结合使用银增强系统,提高了方法的灵敏度。利用染色体的组型分析,对杂交点的分布进行了统计学分析。５２％（２６／５０）的分裂相在第２号染色体具银粒分布,实验结果表明：ＰＬＦ基因定位于猪２号染色体２ｑ＾１２区域。     

水稻籽粒锌含量的QTL定位

锌元素的营养失衡已成为影响人类健康的最重要因素之一,籽粒锌含量的QTL（quantitative trait loci）定位对研究富锌水稻的遗传育种具有重要的意义。以水稻（Oryzasativa L．）亲本奉新红米和明恢100杂交的145个株系的F2群体为实验材料,利用92个SSR（simple sequence repeat）标记对水稻籽粒锌含量进行了QTL定位,共检测到3个QTLs,分别定位于第3、6和11染色体上,对表型变异的贡献率分别为4．97％、12．75％和7．74％。其中位于第3染色体上的分子标记RM186和RM168之间的QZN3对表型变异的贡献率最大,其增效等位基因来自亲本明恢100,表现为部分显性。3个QTLs的联合贡献率为25．46％。具有基因累加效应。该研究结果有利于深入理解水稻锌含量的遗传基础,为锌含量的QTL精细定位、基因克隆和分子标记辅助选择提供依据。     

YRRM基因表达的初步研究

发现和确认无精子症因子(azoospermia factor,AZF)基因,是研究特异控制精子发育基因研究领域的热点。随着细胞遗传和分子遗传学的发展,逐步认识到相关的基因位于Y染色体长臂。1993年,英国学者Ma K,首次分离和克隆了一个DNA片段,证实它们是睾丸特异表达,定位于Y染色体长臂,并在无精子病人中发现涉及了该片段的缺失,认为这一基因片段是AZF基因的有力候选基因,由于这一片段     

黑麂Y染色体的鉴别和Sry基因的克隆及定位

以流式细胞仪分离小麂(Muntiacus reevesi)Y染色体和黑麂(Muntiacus crinifrons)Y1,Y2,X+4和1号染色体,利用DOP-PCR技术富集了分离的各单条染色体。然后,将小麂的Y染色体的DOP-PCR产物经Cy3标记后直接作为涂染探针,应用染色体涂染技术与雌雄黑麂的核型标本进行杂交,确认了黑麂真正的Y染色体为Y2染色体。再以黑麂的Y1,Y2,X+4和1号染色体的DOP-PCR产物为模板,用人的特异性的SRY（sex determining region of the Y chromosome）基因引物对其进行扩增,结果表明黑麂只有Y2染色体出现了SRY扩增片段。然后扩增产物克隆和测序,比较它与人的同源性,初步把黑麂的Sry基因定位在Y2染色体上。最后提取雄性黑麂的基因组DNA,并用同一对引物对其进行扩增,亦得到Sry基因的片段,对此扩增片段进行克隆,测序,结果表明其与Y2染色体得到的Sry基因片段完全一样,与人SRY基因的同源性均为83%。 Abstract：The single Y chromosome of Muntiacus reevesi and Y1,Y2 ,X+4,1 chromosome of Muntiacus crinifrons were obtained by flow-sorting ,then they were amplified through DOP-PCR . After that, the metaphase karyotype of Muntiacus crinifrons were painted by using the product of the DOP-PCR of the Y chromosome of Muntiacus reevesi as a special probe and the result showed that Y2 chromosome was the real Y chromosome of Muntiacus crinifrons. Secondly the product of the DOP-PCR of Y1,Y2,X+4,1 chromosome of Muntiacus crinifrons were used as the templates of the next amplification using the special primer devised according to the human SRY gene .One band was obtained only from Y2 chromosome, then it was cloned to the T-vector and sequenced. The Sry gene sequence of Muntiacus crinifrons was acquired and the conclution was that there are 83% homology between the human and Muntiacus crinifrons. It was testified that in all mammal Sry gene is consertive. On the other side the Sry gene was located to the Y2 chromosome of the Muntiacus crinifrons.     

HIV－1共受体基因定位

ＨＩＶ－１共受体基因定位美国国立癌症研究所米歇尔·迪安及其同事已将ＨＩＶ－１共受体（Ｆｕｓｉｎ和ＣＫＲ－５）的基因定位。Ｆｕｓｉｎ基因定位在染色体２ｑ２１止,靠近ＩＬ－８Ｒ（ＩＬ－８ＲＡ和ＩＬ８ＲＢ）基因;ＣＫＲ５基因定位在染色体３Ｐ２１上,非常接近...     

植物细胞遗传图及其应用

细胞遗传图（cytogenetic map）综合了来自遗传图（genetic map）和细胞学图（cytological map）两方面的信息,它既能反映基因或DNA标记之间在染色体上的真实距离,又能显示它们与染色体的细胞学结构间确切的位置关系。构建植物细胞遗传图的宗旨是将遗传图上的诸多标记与其在染色体的具体位置联系起来。目前主要有两种方法用于细胞遗传图的构建。较广泛使用的一种方法是借助染色体断点来确定遗传标记在染色体上的位置,另一种方法是利用荧光原位杂交（FISH）直接把DNA序列定位到染色体上。此外,利用RN-cM图也可以把遗传标记定位于粗线期染色体。从细胞遗传图可以看出,染色体两臂的远端有较高的基因密度和重组频率。细胞遗传图在比较近缘植物基因组的同线性、揭示植物的进化关系、研究基因定位克隆等方面都有重要意义.     

水稻R基因同源序列与遗传学上已知抗病基因的共定位(英文)

植物抗病（R）基因结构上的高度保守性,为利用基于PCR的方法快速分离R基因同源序列提供了基础。采用这种方法,我们曾从水稻中分离到8个R基因候选同源序列（Rgenecandidates,RGCs）。为了研究RGCs与遗传学上已知的R基因的关系,对它们进行了限制性片段长度多态性（RFLP）分析和染色体定位。DNA杂交结果显示RGCs都属于多基因家族（Fig．1）。6个RGCs（Osh359－1、Osh359－2、Osh359－3、Osh359－5、Os8558－3、Os8558－14）在两个籼稻品种H359和Acc8558中检测出多态性,并定位在水稻染色体上（Fig．2）。它们分别检测出了1、1、4、1、2和1个座位,共10个座位,其中9个定位在第11号染色体的3个区域上,即RFLP标记G181和C82之间（由Osh359－2、Osh359－3、Osh359－5和Os8558－3检测的6个座位）,G1465与C50之间（Osh359－3检测出的一个座位）,和C496附近（由Osh359－1和Os8558－14检测出的两个紧密连锁的座位）另有一个由Os8558－3检测出的座位定位到第8号染色体上,位于L457和G1082B之间。这些染色体区域包含近一半的遗传学上已知的抗病基因,如Xa-3、Xa－10、Pi－a和xa－13。这一结果表明RGCs与已知的抗病基因位于相同的染色体区域。此外,RGCs定位的结果表明,它们在水稻基因组中呈簇状分布,表现出