精子头后部质膜融合蛋白fertilin的研究进展

精子头后部(或赤道区)表面fertilin糖蛋白由相关的两个跨膜亚基α和β构成异二体形式。这两个亚基前体均含有金属蛋白酶区(met-alloprotease domain)和整联蛋白配体区(disin-tegrin domain),属于ADAMs gene家族。α和β前体分别在睾丸和附睾中从上述两区域连接处水解后,得到成熟型亚基。受精时,穿过透明带的顶体反应后精子借助β亚基的disintegrin肽段与卵母细胞表面的整联蛋白结合,同时fertilin结构发生变化,暴露出α亚基上潜在的融合肽段(90—111aa),并介导精子与卵母细胞发生质膜融合,最终完成受精过程。     

小鼠和豚鼠精子在附睾成熟过程中Ca~(2 )分布变化规律的研究

小鼠附睾头精子,其头部Ca~(2 )在顶体前区顶体外膜内侧结合最多,Ca~(2 )沉淀反应颗粒于该处呈连续层状。附睾头豚鼠精子其头部结合Ca~(2 )含量很少,且主要结合于顶体前区腹面顶体外膜内侧。小鼠附睾体和附睾尾精子Ca~(2 )的分布特征基本上和附睾头精子相同。但豚鼠附睾尾精子顶体外膜内侧无Ca~(2 )结合。和附睾头、附睾尾的附睾液相比,附睾体附睾液基质内具有大量Ca~(2 )存在。附睾体柱状上皮细胞的微绒毛切面上也具有Ca~(2 )沉淀反应颗粒,微绒毛可能与附睾液Ca~(2 )含量的调节有关。精子尾部Ca~(2 )主要分布于线粒体内,在质膜内、外两侧和线粒体外膜外侧也结合有少量的Ca~(2 )。和小鼠精子相比,豚鼠精子尾部线粒体内具有大量的Ca~(2 )。     

小鼠附睾头精子获得与卵子质膜融合能力的物质基础研究

随着精子在附睾中的转运,它们与卵子质膜的融合能力逐渐增加。怩证明２附睾体和附睾尾的精子均具有相当高的膜融合能力,而附睾头中的精了奶少能与卵子质膜融合,这是还说明附睾头中的精子不具备与云透明带卵子融合的物质条件呢？利用附睾结扎留并延长体外获能时间,可使附睾头远端精子的融合能力明显地提高;在精子培养液中加入ＡＴＰ,并延长精卵共培养时间,也可使一少部分附睾头近端的精子获得与卵子质膜融合的能力。这表明附睾     

金鱼精子质膜和核膜的区域特异性

Combined SEM and TEM technique including thin sectioning, freeze-fracture and etching as well as cytochemical staining have been used for ultrastructural study on goldfish (Carassius auratus) sperm. It has been shown that primitive sperm plasma membrane and nuclear membrane are differentiated with regional specificity. The results from this study can be summarized as follows: 1. Intercalated protein particles are highly organized in the plasma membrane in the certain region of the head to form crystalline-like structure, in contrast rest of the area is rich in randomly or clustered particles. 2. Many vesicles in different size are often tightly packed in the head, neck and tail regions. Only these plasma membrane covering the vesicles contain almost no protein particles. 3. The vesicles can be densely stained cytochemically, suggesting the existence of glycoprotein. 4. Most of the nuclear membrane have no nuclear pores on it except the area near the neck part where many nuclear pores concentrate.     

棉酚甲酸对金鱼精子质膜的影响

利用冷冻断裂-蚀刻制样技术,在超微结构水平上研究了棉酚甲酸对金鱼精子质膜内蛋白颗粒排列图式(包括晶格区)的影响.结果表明,棉酚甲酸能够使金鱼精子质膜内蛋白颗粒分布不匀:或者颗粒聚集成团,或者质膜内出现无颗粒区域;并且还能使质膜内特定部位晶格区的颗粒排列发生混乱.这些变化表明棉酚甲酸能使精子质膜的有序性降低,也即增加了质膜的流动性.     

大鼠及羊精子在附睾成熟过程中ATP酶活力及其对棉酚敏感性的变化

大鼠及羊精子在附睾成熟过程中ATP酶活力发生明显下降,酶活力的变化形式存在着种间差异。大鼠附睾体及附睾尾精子的ATP酶相对活力分别为附睾头的55.7％及59.6％,而羊则为92.1％及59.8％。 大鼠及羊附睾各区域精子的ATP酶对棉酚抑制作用的敏感程度不同。在5μmol/L的低棉酚的浓度下,大鼠附睾头、体及尾部精子的ATP酶活力分别降至对照组的40.8％、62.7％及81.4％;当棉酚浓度增至40μmol/L时,羊附睾头、体、尾部精子的ATP酶活力才分别降至对照组的63.8％、83.7％及90.7％。作者提出如能使药物作用于附睾精子的敏感区域以干扰其成熟,可能是一条有发展前景的抗生育新途径。     

猪精子中与卵透明带糖蛋白ZP3结合的蛋白质

依次经ＰＳＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析柱和纤维素ＣＭ－５２离子交换层析柱,从猪精子的ＣＨＡＰＳ抽提液分离得４个蛋白质组分。用固相透明带精蛋白结合试验（ＩＺＰＧＢＡ）检测;表明精子蛋白ＳＰ１和ＳＰ２具有结合透明带糖蛋白ＺＰ３的活性,ＳＰ２并显示凝集血球的活性。精子蛋白ＳＰ１与卵预温育明显抑制精卵结合,抑制活性与加入的精子蛋白的浓度呈正相关。用生物素标记的ＺＰ３和蛋白质印迹技术,证明ＳＰ１中的６８ｋＤ精子蛋白与ＺＰ３结合,提示６８ｋＤ精子蛋白参与精卵结合。     

精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白抗原某些特性的研究

应用自制的抗牛精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白血清,对兔、人、小鼠和仓鼠精子进行了免疫细胞化学定位,结果各种动物精子均呈阳性反应,且以精子顶体区标记最强,与麦芽凝集素亲和细胞化学的标记结果相似。用抗血清处理地鼠精子,再与同种卵子进行体外结合试验,结果精子与卵于透明带的结合受到显著抑制、本实验的结果提示,牛精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白抗原具有种间交叉反应性,并可能在精子与卵子透明带结合过程中具有重要作用。     

小鼠精子表面SBA结合糖复合物的形成与变化

用ＨＲＰ标记的大豆凝集素（ＳＢＡ）对睾丸与附睾切片,以及取自附睾和子宫（交配后）内的精子进行了标记,旨在认识精子在发生、成熟和获能过程中表面糖复合物的形成与变化规律。在睾丸内,精母细胞和早期精子细胞胞质内有一强阳性颗粒,处于精子形成期的精子细胞呈弱阳性标记。附睾管内的精子团呈强阳性,附睾管上皮则仅在游离缘呈弱阳性。交配后１．５小时自子宫内洗出的精子,其顶体区的标记增至强阳性,但随着在子宫内存留时间的延长,标记强度逐渐减弱或消失。结果表明,１）精子表面的ＳＢＡ结合糖复合物出现于精子形成期;２）在成熟和获能过程中精子表面的ＳＢＡ结合糖复合物发生明显的变化     

小鼠卵母细胞成熟和受精过程中Ca^2＋分布变化的研究

用焦锑酸钾原位定位法、膜结合Ｃａ＾２＋荧光探针金霉素标记法,分别在电镜和光镜水平对小鼠卵成熟和卵受精过程中结合态Ｃａ＾２＋的分布及其变化进行了研究,发现：１）Ｃａ＾２＋分布于线粒体、胞质、内质网囊泡、微绒毛和透明带等部位,其中以线粒体基质中分布密度为最大;２）减数分裂Ｉ中、后期于纺锤体极区结合有较多的Ｃａ＾２＋;３）生发泡、纺锤体和原核内膜结合态Ｃａ＾２＋含量很少,但纺锤体和原核周围分布较多;４）     

小鼠精子表面Con A结合糖复合物的形成与变化

用辣根过氧化物酶标记的ＣｏｎＡ（伴刀豆素Ａ）对小鼠睾丸与附睾切片,以及对取自附睾和子宫（交配后）内的精子涂片进行了标记,旨在认识精子在发生、成熟和获能过程中表面糖复合物的形成与变化。本研究表明,睾丸内的生精细胞和支持细胞均呈ＣｏｎＡ标记阳性。附睾的输出小管和附睾管上皮细胞,ＣｏｎＡ标记呈中度至强阳性,有部位的差别。附睾头和附睾尾内精子表面的标记无明显差别,标记位置均主要在顶体区和尾部。精子在子宫内存留１．５小时后,顶体后区出现中度阳性标记,但存留３小时和６小时后,顶体和顶体后区的标记均减弱或消失。这些结果提示,（１）精子发生期即可合成ＣｏｎＡ结合糖复合物,（２）精子在附睾成熟过程中表面的ＣｏｎＡ结合糖复合物无明显变化,（３）精子获能后顶体后区出现的ＣｏｎＡ结合糖复合物可能与受精能力有关。     

离体培养小鼠神经细胞在有丝分裂过程中的膜电位变化(简报)

细胞分裂是个体生长和生命延续的基础,而且它还是理解肿瘤发生机制所不可缺少的理论基础,因此关于控制细胞有丝分裂基本机制的研究是很有意义的,受到广泛的重视。Grandin等证明了在胚胎细胞分裂时细胞内pH和钙离子都有相应的变化,虽然他们也同时记录了膜电位的变化,但未作详细的分析,而且上述研究都是在两栖类动物的卵母细胞上进行的,至今尚未见有关哺乳动物神经细胞在有丝分裂过程中膜电位变化的报道。     

不同生境下木麻黄脯氨酸含量和质膜ATPase活性的研究

采集生长于恶劣环境和中生环境的普通木麻黄(Casuarina)小枝,超速离心提取粗质膜制剂后,用两相系统法纯化得到质膜微囊,研究不同生境下木麻黄的质膜ATPase活性,并测定木麻黄小枝的游离脯氨酸含量。实验结果表明:同一生境中的木麻黄ATPase活性相对一致,而同一树种木麻黄不同生境下质膜微囊H~+-ATPase、Ca~(2+)-ATPase、K~+-ATPase活性有显著差异,表现出以渗透胁迫为主的恶劣环境下的木麻黄质膜微囊ATPase活性和木麻黄细胞内游离脯氨酸明显高于中生环境下生长的木麻黄。说明普通木麻黄在干旱和盐胁迫下能调整生理生化过程来提高其质膜ATPase活性和增加细胞内脯氨酸含量提高渗透调节能力以保证其在恶劣环境的正常生长。     

玉米根细胞质膜硝酸还原酶的研究

以水双相分配分离法从玉米（Ｚｅａ ｍ ａｙｓＬ．）根细胞中提取的高纯度正面向外和内面向外的质膜囊泡为材料,鉴定出质膜上存在有硝酸还原酶（ＮＲ）。通过缺氮和加氮培养,证明质膜ＮＲ具有诱导性。外源电子供体实验表明,质膜ＮＲ除了能利用ＮＡＤＨ 作为电子供体外, 也能直接或间接利用ＮＡＤＰＨ 作为电子供体。通过Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００, 结合胰蛋白酶及其抑制剂实验证明了质膜ＮＲ是偏于膜外侧的跨膜蛋白,它对胰蛋白酶具有特异的敏感性。讨论了质膜ＮＲ的功能     

百合生殖细胞分裂过程中微管分布的显微荧光观察

用抗微管蛋白抗体和荧光标记技术,观察了百合生殖细胞经有丝分裂形成精细胞过程中微管的变化。生殖细胞在分裂的前期,存在于核外围以及细胞两端胞质内的微管大都以微管束的形式沿细胞长轴方向平行排列。在靠近核的部位,有些微管有时会斜向排列。分裂进入中期后,染色体集中排列在赤道面。在染色体周围可以见到有多束与细胞长轴平行排列着的微管,但这些微管束是在分裂中期时新形成的或是在前期已存在,尚难以断定。这些微管束有一个特点,就是当它们延伸至赤道板部位时,在每一条微管束上都有一个无荧光的小圆区;这个小圆区可能代表着丝粒的位置。细胞分裂进入后期,姊妹染色单体分别向两极移动形成两组染色体。在它们之间近赤道板位置出现了一个具有强烈荧光的区域,显示在这一部位,微管相当浓密。从这一强烈荧光区向两极分别伸出多条微管束。因此,在这一强烈荧光区内可能有多个微管束重叠。到细胞分裂末期,在这一强烈的荧光区的中央出现了一条横向的无荧光区。这一区域有可能为胞质完成分裂后新形成的细胞板所在的部位。