槲皮素调节AMPK/SIRT1/NF-κB通路对乙型肝炎大鼠肝组织损伤的影响

摘要 目的：探究槲皮素调节AMPK/SIRT1/NF-κB通路对乙型肝炎（HB）大鼠肝组织损伤的影响。方法：采用随机数字表法将65只Wistar大鼠分为Ctrl组、HB组、槲皮素低剂量组（槲皮素L组,50 mg/kg）、槲皮素高剂量组（槲皮素H组,200 mg/kg）及槲皮素H+AMPK抑制剂组（200 mg/kg槲皮素+10 mg/kg Compound C）,每组各13只,采用尾静脉注射携带1.3拷贝HBV基因组的重组8型腺相关病毒（rAAV8-1.3HBV）法建立HB大鼠模型（Ctrl组除外）;酶联免疫吸附实验（Elisa）检测血清中HB表面抗原（HBsAg）、HB e抗原（HBeAg）、肝功能指标[谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）]水平及肝组织中炎性因子[白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）]水平;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测血清中HBV-DNA水平;苏木素-伊红（HE）染色、曼森氏（Masson）染色观察肝组织病理改变;免疫印迹法（WB）检测肝组织中AMPK/SIRT1/NF-κB通路蛋白表达水平。结果：与Ctrl组比较,HB组血清中HBsAg、HBeAg、HBV-DNA、ALT、AST、TBIL水平均升高（P<0.05）;肝组织可见肝静脉扩张、充血,肝细胞排列紊乱、水肿、坏死,同时发生明显纤维化;肝组织中AMPK磷酸化、SIRT1蛋白水平均降低,IL-1β、TNF-α水平及核NF-κB蛋白水平均升高;经槲皮素L、槲皮素H干预后上述情况均得到改善,且槲皮素H干预改善更明显（P<0.05）;而增加AMPK抑制剂干预后,槲皮素H干预的改善作用被削弱（P<0.05）。结论：槲皮素能够减轻HB大鼠肝组织损伤,保护其肝功能,其机制可能与调节AMPK/SIRT1/NF-κB通路有关。     

甜橙黄酮通过调节AMPK/mTOR信号通路改善呼吸道合胞病毒感染大鼠的肺组织损伤

摘要 目的：探讨甜橙黄酮通过AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对呼吸道合胞病毒（RSV）感染大鼠肺组织损伤的改善作用。方法：将30只雄性Wistar大鼠分为对照组、模型组、甜橙黄酮低剂量组（14 mg/kg）、甜橙黄酮中剂量组（28 mg/kg）、甜橙黄酮高剂量组（56 mg/kg）、甜橙黄酮高剂量+AICAR组（56 mg/kg+500 mg/kg的AMPK激活剂AICAR）,计算大鼠肺指数。实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）法测定肺组织RSV病毒载量,酶联免疫吸附（ELISA）法测定大鼠肺泡灌洗液炎症因子水平,HE染色测定肺组织病理,蛋白免疫印迹（Western blot）法测定AMPK/mTOR通路蛋白表达。结果：与对照组相比,模型组大鼠肺组织存在炎性浸润,排列松散,肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、mTORC1蛋白表达升高（P＜0.05）;与模型组相比,甜橙黄酮低剂量组、甜橙黄酮中剂量组、甜橙黄酮高剂量组大鼠肺组织损伤减轻,大鼠肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、mTORC1蛋白表达降低（P＜0.05）;与甜橙黄酮高剂量组相比,甜橙黄酮高剂量+AICAR组大鼠肺组织损伤加重,肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、MTORC1蛋白表达升高（P＜0.05）。结论：甜橙黄酮可能通过抑制AMPK/mTOR信号通路发挥对RSV诱导的大鼠抗炎、抗病毒、抗肺部损伤作用。     

紫檀芪调节Keap-1/Nrf2/HO-1信号通路对非酒精性脂肪肝大鼠氧化应激和细胞凋亡的影响

摘要 目的：研究紫檀芪调节Kelch样ECH关联蛋白1（Keap-1）/核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）信号通路对非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠氧化应激和细胞凋亡的影响。方法：将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、紫檀芪低剂量组（30 mg/kg）、紫檀芪高剂量组（60 mg/kg）、紫檀芪（60 mg/kg）+N-（4-（2,3-二氢-1-（2''-甲基苯甲酰）-1H-吲哚-5-基）-5-甲基-2-噻唑基）-1,3-苯并二氧唑-5-乙酰胺（ML385）（30 mg/kg）组，每组12只。模型组与药物干预组大鼠以高脂饲料饲养诱导NAFLD模型，对照组大鼠以普通饲料饲养，各组连续喂养12周。以紫檀芪和ML385分组处理14 d后（对照组以等剂量生理盐水处理），检测各组大鼠脂代谢指标[三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）及游离脂肪酸（FFA）水平]、肝指数、肝功能指标[谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）]水平、血清白细胞介素（IL）-17、IL-6、IL-10、氧化应激指标[丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及过氧化氢酶（CAT）]水平；原位末端标记法（TUNEL）染色检测各组大鼠肝细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法检测各组大鼠肝组织凋亡相关蛋白及Keap-1/Nrf2/HO-1通路相关蛋白表达。结果：与对照组相比，模型组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平显著降低（P＜0.05），TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Keap-1及Bax表达水平显著升高（P＜0.05）。与模型组相比，紫檀芪低、高剂量组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平均升高（P＜0.05），TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Keap-1、Bax表达水平均降低（P＜0.05）；与紫檀芪低剂量组相比，紫檀芪高剂量组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平升高（P＜0.05），TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Keap-1及Bax表达水平降低（P＜0.05）；与紫檀芪高剂量组相比，紫檀芪+ML385组大鼠血清IL-10、SOD及CAT水平、肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2表达水平降低（P＜0.05），TG、TC及FFA水平、肝指数、ALT及AST水平、血清IL-17、IL-6、MDA水平、肝细胞凋亡率、肝组织Bax表达水平升高（P＜0.05）。结论：紫檀芪可能通过激活Keap-1/Nrf2/HO-1信号通路，改善NAFLD大鼠脂代谢水平，调节炎症反应及氧化应激，减轻肝组织脂肪变性及细胞凋亡。     

香草醛对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用研究

摘要 目的：探讨香草醛对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBI)的神经保护作用及机制。方法：参考Rice-Vannucci方法建立HIBI大鼠模型。HIBI大鼠建模后立即腹腔注射20 mg/kg（HIBI+20Van组）或40 mg/kg（HIBI+40Van组）的香草醛,每隔12 h给药,连续7 d。然后评估大鼠的神经行为及脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平。对BV2小胶质细胞进行氧糖剥夺/复氧(OGD/R)处理,并用20 μM香草醛培养。通过Western blot及免疫荧光检测HMGB1、NF-κB p65、SIRT1、MyD88和TLR4的表达水平。通过乳酸脱氢酶（LDH）释放测定试剂盒测定用不同BV2细胞培养基处理的原代神经元的LDH释放。结果：与HIBI组比较,HIBI+20Van组和HIBI+50Van组新生大鼠的前肢悬吊时间和旷场得分均升高,脑组织中的IL-1β、IL-6和TNF-α的水平均降低。香草醛均升高了HIBI大鼠和OGD/R处理的BV2细胞质中的SIRT1的表达水平,降低了TLR4、MyD88和HMGB1的表达水平及细胞核中NF-κB p65的表达水平（P<0.05）。香草醛降低了原代神经元的LDH释放量（P<0.05）。结论：香草醛通过调节SIRT1/HMGB1/TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制HIBI引起的神经炎症,从而提高HIBI大鼠的神经功能。     

从干预SIRT1表达探究急性应激影响糖尿病小鼠葡萄糖代谢和脂肪代谢的机制

摘要 目的：从干预组蛋白去乙酰化酶（Sirtuin1, SIRT1）表达探究急性应激影响糖尿病小鼠葡萄糖代谢和脂肪代谢的机制。方法：以30只C57BL/6小鼠为研究对象,通过高脂饮食和链脲佐菌素腹腔注射诱导的T2DM 模型小鼠,然后随机分为对照组（正常小鼠+柠檬酸盐缓冲液灌胃）、糖尿病组（糖尿病小鼠+柠檬酸盐缓冲液注射）和SIRT1干预组（糖尿病小鼠+SRT1720的载体缓冲液灌胃）。通过血糖仪和胰岛素ELISA试剂盒分别检测小鼠空腹血糖、胰岛素水平。使用血液化学自动分析仪检测小鼠血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白（LDL）-胆固醇和高密度脂蛋白（HDL）-胆固醇水平。收集小鼠白色脂肪组织冲洗并称重比较。通过RT-PCR分析脂肪生成转录因子PPARγ和SREBP-1c、脂肪酸合成因子Fas和Ap2、脂肪酸分解因子Hsl的mRNA表达。通过蛋白印迹分析AMPK-SIRT1-PGC-1通路蛋白的表达。结果：糖尿病组较对照组空腹血糖、胰岛素水平升高（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组空腹血糖、胰岛素水平降低（P<0.05）。糖尿病组较对照组血清甘油三酯、总胆固醇、HDL-胆固醇和LDL-胆固醇升高（P<0.05）。糖尿病组较对照组附睾、腹膜后、肠系膜和腹股沟脂肪的重量升高（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组的白色脂肪重量降低（P<0.05）。SIRT1干预组较糖尿病组降低（P<0.05）。糖尿病组较对照组的血糖水平在30、60和120分钟时升高（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组各时间点血糖水平降低（P<0.05）。糖尿病组较对照组PPARγ、SREBP-1c、Fas、Ap2的mRNA表达升高（P<0.05）,HslmRNA降低（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病PPARγ、SREBP-1c、Fas、Ap2的mRNA表达升高,HslmRNA降低（P<0.05）。糖尿病组较对照磷酸化AMPK、SIRT1和PGC-1的表达降低（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组磷酸化AMPK、SIRT1和PGC-1的表达升高（P<0.05）。结论：调控SIRT1高表达可激活糖尿病小鼠AMPK/PGC-1α 信号通路,同时促进脂肪分解和抑制脂肪合成而表现出抗肥胖作用。     

富血小板纤维蛋白对人牙周膜细胞成骨能力、炎症因子表达和 Wnt/β-catenin信号通路的影响

摘要 目的：探究富血小板纤维蛋白（PRF）对人牙周膜细胞（hPDLCs）成骨能力、炎症因子表达和 Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路的影响。方法：通过刮取法、组织块法获取 2019年 1月至 2020年 1月期间我院口腔科收治的 10例正畸患者拔除健康阻生牙或正畸牙的牙周组织作为研究样本。将 hPDLCs细胞分为干预 1组、干预 2组、对照组、肿瘤细胞坏死因子 -α（TNF-α）组,各组均采用含有 10% FBSDMEM培养基培养,TNF-α 组加用 10 ng/mL TNF-α 诱导液,干预 1组加用 50% PRF培养,干预 2组加用 10 ng/mL TNF-α 诱导液和 50% PRF。对比各组的细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性、炎症因子、Wnt/β-catenin信号通路关键因子的表达差异。结果：（1）相比于其他 3组,干预 1组的吸光度值（OD）明显升高,相比于 TNF-α 组,干预 2组、对照组的 OD值均明显升高（P<0.05）;（2）和其他 3组相比,干预 1组的 ALP活性明显升高,相比于 TNF-α 组,干预 2组、对照组的 ALP活性均明显升高（P<0.05）;（3）和其他 3组相比,干预 1组的骨形态发生蛋白 2（BMP2）mRNA、runt相关转录因子 2（Runx2）mRNA、BMP2及 Runx2蛋白表达水平均明显升高,相比于 TNF-α 组,干预 2组、对照组的 BMP2 mRNA、Runx2 mRNA、BMP2及 Runx2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;（4）相比于干预 1组、对照组,干预 2组、TNF-α 组的 TNF-α mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;（5）和其他 3组相比,干预 1组的细胞周期蛋白 D1（CyclinD1）mRNA、β-catenin mRNA表达水平明显升高,相比于 TNF-α 组,干预 2组、对照组的 CyclinD1 mRNA、β-catenin mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）。结论：PRF可以促进 hPDLCs细胞增殖和成骨,并减少炎症因子表达,提升 ALP活性,其可能是通过激活 Wnt/β-catenin信号通路促进 CyclinD1、β-catenin mRNA表达加快hPDLCs细胞成骨。     

丹参多酚酸盐通过SIRT3/β-catenin-PPARγ信号通路对心肌梗死大鼠的作用及机制研究

摘要 目的：通过制备心肌梗死大鼠模型，基于SIRT3/β-catenin-PPARγ信号通路探讨丹参多酚酸盐对心肌梗死大鼠的作用及相关机制，为将丹参多酚酸盐应用于心肌梗死治疗积累理论基础。方法：选取SPF级健康SD大鼠60只，随机分为假手术组（A组）、模型组（B组）、丹参多酚酸注射低剂量组（C组）丹参多酚酸注射高剂量组（D组）。B、C、D组大鼠制备为心肌梗死模型，A组大鼠仅进行假手术操作。B、C、D三组大鼠均接受丹参多酚酸盐注射治疗，A组大鼠注射等量生理盐水。比较各组大鼠心动图指标、血流动力学参数、心肌损伤相关指标、SIRT3/β-catenin-PPARγ信号通路相关蛋白及mRNA相对表达量。结果：干预后，B、C、D组大鼠的LVEF、LVFS和dP/dt max、dP/dt min均下降，且C、D组高于B组，D组高于C组；同时B、C、D组大鼠LVEDD高于A组，C、D组低于B组且D组低于C组。B、C、D组大鼠CK、CK-MB、LDH水平均高于A组，同时C、D组均低于B组，且D组低于C组；干预后，B、C、D组大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平均高于A组，同时C、D组均低于B组，且D组低于C组；干预后，B、C、D组大鼠SIRT3、β-catenin蛋白表达量及mRNA表达量均高于A组，同时C、D组大鼠高于B组且D组高于C组；同时B、C、D组PPARγ蛋白表达量及mRNA表达量均高于A组，且C、D组低于B组，D组低于C组（P＜0.05）。结论：丹参多酚酸盐能够有效改善心肌梗死大鼠的心功能，缓解心肌损伤，其机制可能与调控SIRT3/β-catenin-PPARγ信号通路、下调炎性因子水平相关，且高剂量丹参多酚酸盐的治疗效果更优。     

紫草素调节IL-6/STAT3信号通路对牙髓炎大鼠牙髓组织损伤的影响

摘要 目的：探究紫草素（SHI）调节白细胞介素（IL）-6/信号转导子和转录激活子3（STAT3）信号通路对牙髓炎大鼠牙髓组织损伤的影响及机制。方法：建立牙髓炎大鼠模型。实验分为对照组（Control组）、模型组（Model组）、SHI低、中、高剂量组（SHI-L、SHI-M、SHI-H组,0.125 mg/kg/d、0.25 mg/kg/d、0.5 mg/kg/d SHI）、SHI高剂量+STAT3激动剂Colivelin组（SHI-H+Colivelin组,0.5 mg/kg/d SHI+1 mg/kg/d Colivelin）,每组18只。观察大鼠一般行为变化;酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、CXC趋化因子配体10（CXCL10）、血管内皮生长因子（VEGF）水平。苏木精-伊红（HE）染色观察牙髓组织病理变化;免疫组化法检测牙髓组织IL-6表达;免疫印迹法检测IL-6/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果：与Control组相比,Model组大鼠饮食减少,不敢咬食物,精神萎靡;牙髓组织出现坏死,牙本质细胞排列紊乱,炎性细胞浸润及纤维组织增加,根髓充血扩张;血清IL-6、IL-1β、TNF-α、CXCL10和VEGF水平,IL-6平均光密度及IL-6和JAK2蛋白水平、p-STAT3/STAT3水平显著增加（P<0.05）。与Model组相比,SHI-L、SHI-M和SHI-H组大鼠饮食较正常,精神状态较佳,牙髓组织病理变化减轻;血清IL-6、IL-1β、TNF-α、CXCL10和VEGF水平,IL-6平均光密度及IL-6和JAK2蛋白水平、p-STAT3/STAT3水平逐渐降低（P<0.05）。与SHI-H组相比,SHI-H+Colivelin组大鼠饮食较差,精神不佳,牙髓组织病变加重;血清IL-6、IL-1β、TNF-α、CXCL10和VEGF水平,IL-6平均光密度及IL-6和JAK2蛋白水平、p-STAT3/STAT3水平显著增加（P<0.05）。结论：SHI能抑制牙髓炎大鼠炎症水平,减轻牙髓组织损伤,其机制可能与抑制IL-6/STAT3信号通路有关。     

温补肾阳法治疗肾阳虚模型大鼠多尿症状的机制研究

摘要 目的：探讨温补肾阳法治疗肾阳虚模型大鼠多尿症状的作用机制。方法：90只雄性SD大鼠随机分成干预组、抑制剂组、空白组、模型组,干预组根据中药剂量分为高剂量组、中剂量组、低剂量组。模型组、干预组及抑制剂组接受肾阳虚模型制备,干预组在成模后每日接受7 g/kg、14 g/kg、28 g/kg剂量中药灌胃,连续灌胃14 d。抑制剂组大鼠接受尾静脉注射通路抑制剂H-89。干预结束后比较各组脏器指数、24 h尿量、24 h尿蛋白水平以及尿液钠离子（Na⁺）、钾离子（K⁺）、氯离子（Cl^-）浓度、肾脏病理变化、血清醛固酮（ALD）、乙醇脱氢酶（ADH）、促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）、大鼠促肾上腺皮质激素（ACTH）、大鼠皮质醇（CORT）、蛋白激酶A（PKA）、蛋白激酶A（cAMP）含量、肾脏组织水通道蛋白2（AQP-2）蛋白表达的变化。结果：温补肾阳法可明显减少肾阳虚模型大鼠尿量,改善临床症状,且具有一定的剂量依赖性（P<0.05）。经过中药干预后大鼠24 h尿蛋白、脏器指数、尿液Na⁺、Cl^-均下降,尿液K⁺、血清ALD、ADH、CRF、ACTH、CORT、PKA、cAMP含量、肾脏组织AQP-2蛋白表达上调（P<0.05）,且抑制剂H-89可阻断该作用。结论：温补肾阳法可明显改善肾阳虚模型大鼠多尿症状,其作用机制可能通过cAMP-PKA-AQP2通路介导。     

红景天苷调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对结肠癌SW480细胞裸鼠的肝脏损伤的影响

摘要 目的：探讨红景天苷（Sal）调节单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/Unc51样激酶1（ULK1）信号通路对结肠癌SW480细胞裸鼠肝脏损伤的影响。方法：通过皮下注射SW480细胞悬浮液建立肝转移裸鼠模型,将造模后的裸鼠随机分为模型组、Sal低剂量（Sal-L,50 mg/kg Sal）组、Sal中剂量（Sal-M,100 mg/kg Sal）组、Sal高剂量（Sal-H,200 mg/kg Sal）组,Sal-H+AMPK抑制剂（Compound C,200 mg/kg Sal+10 mg/kg Compound C）组,以未接种SW480细胞悬液的裸鼠作为对照组。腹部主动脉取血,检测裸鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（AST）、天冬氨酸氨基转移酶（ALT）水平;处死裸鼠,检测肝转移瘤数目及肝脏重量;HE染色观察肝脏组织病理变化;qRT-PCR检测肝脏组织中AMPK、mTOR、ULK1 mRNA表达水平;Western blot检测肝脏组织中自噬（Beclin1、p62）蛋白及通路相关蛋白表达。结果：与对照组相比,模型组裸鼠组织中出现肝转移瘤,肝脏重量、AST、ALT水平、mTORmRNA、ULK1 mRNA、p62表达显著增加（P<0.05）;Beclin1、AMPK mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.05）;与模型组相比,Sal-L、Sal-M、Sal-H组肝转移瘤数目、肝脏重量、AST、ALT水平、mTORmRNA、ULK1 mRNA、p62表达显著降低（P<0.05）;Beclin1、AMPK mRNA及蛋白表达显著增加（P<0.05）;与Sal-H组相比,Sal-H+Compound C组肝转移瘤数目、肝脏重量、AST、ALT水平、mTORmRNA、ULK1 mRNA、p62表达显著增加（P<0.05）;Beclin1、AMPK mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论：Sal可通过减少裸鼠肝转移瘤形成,保护裸鼠肝脏,其机制可能与激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路,促进肝脏自噬有关。     

A Bioartificial Renal Tubule Device Embedding Human Renal Stem/Progenitor Cells

We present a bio-inspired renal microdevice that resembles the in vivo structure of a kidney proximal tubule. For the first time, a population of tubular adult renal stem/progenitor cells (ARPCs) was embedded into a microsystem to create a bioengineered renal tubule. These cells have both multipotent differentiation abilities and an extraordinary capacity for injured renal cell regeneration. Therefore, ARPCs may be considered a promising tool for promoting regenerative processes in the kidney to treat acute and chronic renal injury. Here ARPCs were grown to confluence and exposed to a laminar fluid shear stress into the chip, in order to induce a functional cell polarization. Exposing ARPCs to fluid shear stress in the chip led the aquaporin-2 transporter to localize at their apical region and the Na⁺K⁺ATPase pump at their basolateral portion, in contrast to statically cultured ARPCs. A recovery of urea and creatinine of (20±5)% and (13±5)%, respectively, was obtained by the device. The microengineered biochip here-proposed might be an innovative “lab-on-a-chip” platform to investigate in vitro ARPCs behaviour or to test drugs for therapeutic and toxicological responses.     

Brazilian Red Propolis Attenuates Hypertension and Renal Damage in 5/6 Renal Ablation Model

The pathogenic role of inflammation and oxidative stress in chronic kidney disease (CKD) is well known. Anti-inflammatories and antioxidant drugs has demonstrated significant renoprotection in experimental nephropathies. Moreover, the inclusion of natural antioxidants derived from food and herbal extracts (such as polyphenols, curcumin and lycopene) as an adjuvant therapy for slowing CKD progression has been largely tested. Brazilian propolis is a honeybee product, whose anti-inflammatory, antimicrobial and antioxidant effects have been widely shown in models of sepsis, cancer, skin irritation and liver fibrosis. Furthermore, previous studies demonstrated that this compound promotes vasodilation and reduces hypertension. However, potential renoprotective effects of propolis in CKD have never been investigated. The aim of this study was to evaluate the effects of a subtype of Brazilian propolis, the Red Propolis (RP), in the 5/6 renal ablation model (Nx). Adult male Wistar rats underwent Nx and were divided into untreated (Nx) and RP-treated (Nx+RP) groups, after 30 days of surgery; when rats already exhibited marked hypertension and proteinuria. Animals were observed for 90 days from the surgery day, when Nx+RP group showed significant reduction of hypertension, proteinuria, serum creatinine retention, glomerulosclerosis, renal macrophage infiltration and oxidative stress, compared to age-matched untreated Nx rats, which worsened progressively over time. In conclusion, RP treatment attenuated hypertension and structural renal damage in Nx model. Reduction of renal inflammation and oxidative stress could be a plausible mechanism to explain this renoprotection.     

Prion Protein Protects against Renal Ischemia/Reperfusion Injury

The cellular prion protein (PrP^C), a protein most noted for its link to prion diseases, has been found to play a protective role in ischemic brain injury. To investigate the role of PrP^C in the kidney, an organ highly prone to ischemia/reperfusion (IR) injury, we examined wild-type (WT) and PrP^C knockout (KO) mice that were subjected to 30-min of renal ischemia followed by 1, 2, or 3 days of reperfusion. Renal dysfunction and structural damage was more severe in KO than in WT mice. While PrP was undetectable in KO kidneys, Western blotting revealed an increase in PrP in IR-injured WT kidneys compared to sham-treated kidneys. Compared to WT, KO kidneys exhibited increases in oxidative stress markers heme oxygenase-1, nitrotyrosine, and N^ε-(carboxymethyl)lysine, and decreases in mitochondrial complexes I and III. Notably, phosphorylated extracellular signal-regulated kinase (pERK) staining was predominantly observed in tubular cells from KO mice following 2 days of reperfusion, a time at which significant differences in renal dysfunction, histological changes, oxidative stress, and mitochondrial complexes between WT and KO mice were observed. Our study provides the first evidence that PrP^C may play a protective role in renal IR injury, likely through its effects on mitochondria and ERK signaling pathways.     

Clusterin/Apolipoprotein J Attenuates Angiotensin II-Induced Renal Fibrosis

The blockade of angiotensin II (Ang II) is a major therapeutic strategy for diabetic nephropathy. The main roles of Ang II in renal disease are mediated via the Ang type 1 receptor (AT1R). Upregulation of clusterin/apolipoprotein J has been reported in nephropathy models, suggesting it has a protective role in nephropathogenesis. Here, we studied how clusterin acts against Ang II-induced renal fibrosis. Levels of AT1R and fibrotic markers in clusterin-/- mice and Ang II infused rats transfected with an adenovirus encoding clusterin were evaluated by immunoblot analysis, real time RT-PCR, and immunohistochemical staining. The effect of clusterin on renal fibrosis was evaluated in NRK-52E cells, a cultured renal tubular epithelial cell line, using immunoblot analysis and real time RT-PCR. Nuclear localization of NF-κB was evaluated using immunofluorecence and co-immunoprecipitation. Renal fibrosis and expression of AT1R was higher in the kidneys of clusterin^-/- mice than in those of wild-type mice. Furthermore, loss of clusterin accelerated Ang II-stimulated renal fibrosis and AT1R expression. Overexpression of clusterin in proximal tubular epithelial cells decreased the levels of Ang II-stimulated fibrotic markers and AT1R. Moreover, intrarenal delivery of clusterin attenuated Ang II-mediated expression of fibrotic markers and AT1R in rats. Fluorescence microscopy and co-immunoprecipitation in conjunction with western blot revealed that clusterin inhibited Ang II-stimulated nuclear localization of p-NF-κB via a direct physical interaction and subsequently decreased the AT1R level in proximal tubular epithelial cells. These data suggest that clusterin attenuates Ang II-induced renal fibrosis by inhibition of NF-κB activation and subsequent downregulation of AT1R. This study raises the possibility that clusterin could be used as a therapeutic target for Ang II-induced renal diseases.     

血液净化治疗肾综合征出血热合并急性肾功能衰竭的疗效分析

目的:探讨血液净化治疗肾综合征出血热合并急性肾功能衰竭的疗效。方法:选取了60例肾综合征出血热合并急性肾功能衰竭患者,按住院单双号分为两组,观察组(31例)采用血液透析治疗,对照组(29例)采用连续性静脉-静脉血液滤过法治疗,观察并记录两组患者肾功能相关指标、血清离子、血常规相关指标及治疗期间不良反应情况,评估血液净化治疗肾综合征出血热合并急性肾功能衰竭的疗效。结果:治疗前两组K~+、HCO_3~-、血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)等指标无统计学差异(P0.05),治疗后两组K~+、BUN、Cr等指标均明显降低,且观察组上述指标低于对照组(P0.05);治疗后两组HCO_3~-水平升高,且观察组高于对照组(P0.05),治疗前,两组血红蛋白(Hb),红细胞压积(Hct),血小板(PLT)无统计学差异(P0.05),治疗后两组Hb,Hct,PLT均升高(P0.05),但组间比较没有统计学差异(P0.05),随访1年期间,观察组患者6个月和12个月生存率明显高于对照组(P0.05)。治疗期间,两组不良反应率无统计学差异(P0.05)。结论:血液透析对肾综合征出血热合急性肾功能衰竭具有较好的治疗效果,能调节体内电解质平衡,改善肾功能,提高生存率,改善血液状态的效果与连续性静脉-静脉血液滤过法相当。     

金钱豹肾的组织学和微血管铸型的观察

为探讨金钱豹(Panthera pardus)肾的组织结构和微血管构筑特点,利用生物显微技术与微血管铸型技术及扫描电镜对金钱豹肾的组织结构和肾小球微血管构筑进行了观察。结果显示,金钱豹的肾皮质与髓质厚度比为1∶(1.5~3),肾近端小管上皮为单层立方细胞,胞体较大,细胞排列紧密,分界不清楚,其腔面有刷状缘,胞质嗜酸性;远端小管无明显的刷状缘,胞质弱嗜酸性,胞核多位于中央;集合管细胞排列紧密,管腔较大,上皮细胞呈矮柱状,胞质弱嗜酸性。金钱豹的肾小球多呈球形或卵圆形,直径为99~142μm,入球小动脉管径13~15μm,出球小动脉管径9.5~11.5μm。     

Renal Ischemia/Reperfusion Injury in Soluble Epoxide Hydrolase-Deficient Mice

Aim

20-hydroxyeicosatetraenoic acid (20-HETE) and epoxyeicosatrienoic acids (EETs) are cytochrome P450 (CYP)-dependent eicosanoids that play opposite roles in the regulation of vascular tone, inflammation, and apoptosis. 20-HETE aggravates, whereas EETs ameliorate ischemia/reperfusion (I/R)-induced organ damage. EETs are rapidly metabolized to dihydroxyeicosatrienoic acids (DHETs) by the soluble epoxide hydrolase (sEH). We hypothesized that sEH gene (EPHX2) deletion would increase endogenous EET levels and thereby protect against I/R-induced acute kidney injury (AKI).

Methods

Kidney damage was evaluated in male wildtype (WT) and sEH-knockout (KO)-mice that underwent 22-min renal ischemia followed by two days of reperfusion. CYP-eicosanoids were analyzed by liquid chromatography tandem mass spectrometry.

Results

Contrary to our initial hypothesis, renal function declined more severely in sEH-KO mice as indicated by higher serum creatinine and urea levels. The sEH-KO-mice also featured stronger tubular lesion scores, tubular apoptosis, and inflammatory cell infiltration. Plasma and renal EET/DHET-ratios were higher in sEH-KO than WT mice, thus confirming the expected metabolic consequences of sEH deficiency. However, CYP-eicosanoid profiling also revealed that renal, but not plasma and hepatic, 20-HETE levels were significantly increased in sEH-KO compared to WT mice. In line with this finding, renal expression of Cyp4a12a, the murine 20-HETE-generating CYP-enzyme, was up-regulated both at the mRNA and protein level, and Cyp4a12a immunostaining was more intense in the renal arterioles of sEH-KO compared with WT mice.

Conclusion

These results indicate that the potential beneficial effects of reducing EET degradation were obliterated by a thus far unknown mechanism leading to kidney-specific up-regulation of 20-HETE formation in sEH-KO-mice.     

连续性肾脏替代治疗与间歇性血液透析对急性肾损伤的临床疗效比较

目的:比较连续性肾脏替代治疗与间歇性血液透析对急性肾损伤的临床疗效。方法:回顾性分析从2014年2月到2016年2月来我院治疗的急性肾损伤患者50例,按照治疗方法分为连续性肾脏替代治疗(Continuous renal replacement therapy,CRRT)组与间歇性血液透析(Intermittent hemodialysis,IHD)组,每组各25例。记录两组治疗前的基线数据,治疗前与治疗后的血清C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、血肌酐(Serum creatinine,SCr)含量以及尿量恢复时间、重症监护室(Intensive care unit,ICU)住院时间、心血管事件发生率。结果:CRRT组与IHD组治疗前的一般资料以及尿量、血清CRP、SCr水平比较差异均无统计学意义(P0.05)。治疗1周后,与IHD组相比,CRRT组血清CRP、SCr水平明显下降,尿量恢复时间、ICU住院时间均明显缩短,心血管发生率(32.0%vs.64.0%)明显下降,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:CRRT治疗急性肾损伤能有效改善患者肾功能,缩短ICU住院时间并提高治疗安全性。     

肾移植术后患者同型半胱氨酸、肾功能和血脂水平的变化及其相关性分析

目的:分析肾移植术后患者血清的同型半胱氨酸(Hcy)、肾功能和血脂水平的变化和相关性,探讨其在肾移植术后评价肾功能的应用价值。方法:将2013年10月~2016年9月就诊于我院确诊慢性肾衰并进行肾移植手术的300例术后随访患者作为观察组,选择同期健康志愿者100例作为对照组。检测并比较两组Hcy、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。根据观察组患者Hcy水平的不同将其分成Hcy正常组与Hcy异常组,并对比两组患者的血脂指标水平;测定半胱氨酸蛋白抑制剂C(CysC)的水平并计算肾小球滤过率(eGFR);对观察组血清Hcy与eGFR值、血脂指标水平进行相关性分析,并采用Logistic回归分析分析观察组肾移植术后eGFR下降的影响因素。结果:观察组患者的血清Hcy、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平均明显高于对照组(P0.05)。Hcy异常组血清LDL-C水平明显高于Hcy正常组,而HDL-C水平明显低于Hcy正常组(P0.05)。观察组患者血清Hcy与eGFR、HDL-C水平呈负相关关系(r=-0.573、-0.414,P0.05);与TG水平呈正相关(r=0.432,P0.05),与TC、LDL-C无相关(P0.05)。多元Logistic回归分析显示,Hcy、TG、LDL-C水平均与患者eGFR下降有关(P0.05)。结论:在肾移植术后,慢性肾衰患者的TG、LDL-C、Hcy水平均升高,且伴有eGFR水平的降低;肾移植术后肾功能的改变与血清TG、LDL-C、Hcy水平相关;检测肾移植患者血脂指标、Hcy的水平可以评估移植肾功能受损情况。