我国部分地区土壤中的苏芸金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌

从云南、贵州、四川和陕西4省的土壤中分离到大量苏芸金芽孢杆菌(Bacillus thuringie—nsis)和球形芽孢杆菌(Bacillus sphaeticus)菌株。血清型分析表明,苏芸金芽孢杆菌分离株分属于23个血清型中的13个血清型,另有近20％的自凝型菌株及部分与所有标准菌抗血清无反应的菌株。对该两种昆虫病原细菌的生态分布规律进行了分析。研究了全部苏芸金芽孢杆菌分离株对鳞翅目、鞘翅目及双翅目的6种昆虫的毒力特性、伴孢晶体与芽孢的形态,以及晶体蛋白质成分。观察和测定了球形芽孢杆菌分离株的形态和毒力,并分析了部分菌株的晶体蛋白质成分。得到22株高效苏芸金芽孢杆菌和2株高效球形芽孢杆菌。证明苏芸金芽孢杆菌是典型的土壤微生物类群,我国西南地区土壤中的苏芸金芽孢杆菌资源十分丰富。     

几种苏芸金杆菌晶体的超微结构

观察了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)7个菌株晶体的超薄切片,不同来源的晶体内部超微结构有明显差异。 6种晶体具有晶格构造,但1897菌株的晶体内部具有非均一构造。无鞭毛菌株H0的晶体具有极易碎裂的特点。HD-1的晶体的镶嵌型构造进一步被证实。血清8型006菌株的晶体不具有任何蛋白质晶格结构。讨论了苏芸金杆菌晶体的超微结构与其对昆虫毒力的关系。     

诱变剂对苏芸金杆菌的影响

本文研究了五种诱变剂对苏芸金杆菌HD-1菌种的诱变效应,并获得了一些诱变菌。这些诱变菌所产生的伴孢晶体无论在大小,数量或形状比例方面都发生了一些变化。通过对家蚕(Bombyx mori)、菜青虫(Pierts rapae)、稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)的毒力试验,有的诱变菌提高了对某些昆虫的毒力。在五种诱变剂中以亚硝基胍(MNNG)和硫酸二乙酯(DES)的诱变效应最明显,获得的抗噬菌体菌株和产色素菌株都对某些害虫具有较高的杀虫活性     

杀鞘翅目苏云金芽孢杆菌新菌株及其杀虫剂的研究

从中国土壤中分离出2株杀鞘翅目昆虫的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) YM03及SHQ11-10。YM03的血清型为H8a8b,SHQ1110的H血清型未知。二菌株皆产近菱形的薄扁伴孢晶体,分别含68～70kD和65kD的晶体蛋白质。毒力生物测定证明对柳蓝叶甲(Plagiodera versicolora)及马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)有高毒效。发酵性能良好。YM03粉剂田间防治马铃薯甲虫有高效。稀释400倍喷雾,防治效果达94.6%。     

苏芸金杆菌天门变种——“7216”菌的研究

1972年从棉花红铃虫(Pectinophora gossypiella Saunders)中分离出一株能形成伴孢晶体的芽孢杆菌“7216”。该菌具有苏芸金杆菌(Bacillus tkuriniientis)的典型特征[1]。血清型属Hsasb,但培养特征、生化特性有别于H,中的阿莱变种和戈尔斯德变种,认为是苏芸金杆离的一个新变种,定名为苏芸金杆菌天门变种Bacillua thuriniensit var．Tianmentig(7216)。     

苏芸金杆菌的一个新变种——云南变种

113菌株是从罹病致死的斜纹夜娥(prodenia litura Fabrieius)幼虫体上分离出来的产晶体芽孢杆菌,其形态、生理、生化及血清学反应与现在已知的苏芸金杆菌的各个对比菌株有别,是一个新变种,定名为苏芸金杆菌云南变种(Bacillus thuringiensis Var·yunnanensis)。     

苏芸金芽孢杆菌的一个新亚种

由北京近郊温泉地区油松林间土壤中,分离到一株产生伴孢内含物的芽孢杆菌TW 20。该菌株具有苏芸金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的典型特征,但无鞭毛抗原(H),伴孢内含物与孢子常常不分开,位于孢子囊一端由数个不同形状的晶体组成．其生化反应特性及酯酶型与已知23个血清型30个亚种的标准菌株均不相同。对油松毛虫(Dendrolimus tabulaef-ormis)、午毒蛾(Lymautria dispar)、黄褐天幕毛虫(Malacosoma neustria testcea)、光肩星天牛(Anoplophora glabripennis)幼虫没有明显的致病性。根据上述特性,菌株TW20属于一个新的酯酶型亚种,定名为苏芸金芽孢杆菌温泉亚种——Bacillus thuringiensis subsp. Wequanen-sis。     

苏芸金杆菌晶体与芽孢分离的研究

用泛影葡胺(Urografin)等密度离心洼与液体双相法共分离了苏芸金杆菌九个菌株(分属六个变种)的晶体与芽饱。两种方法分离的晶体纯度最高均可达99％以上。后一方法有时在有的晶体制剂中尚混杂一些营养体或孢子囊的膜。将两种方法进行了比较。     

苏芸金杆菌的一个新血清型

苏芸金杆菌云南变种(Bacillus thurtngtensts subsp. Yunnanensis)113菌株的H-抗原和 H-抗血清均与已知苏芸金杆菌H一血清型l到19的所有参考标准菌株的H一抗血清和H一抗原不发生交叉凝集反应。113菌株的生化反应结果与所有参考标准菌株也不相同。此外,113菌株对致倦库蚊(Culex pipiens var. quinquefaseiatces)(双翅目)(Bombyx mori) (鳞翅目)幼虫均无毒性。 因此,113菌株是一个新血清型20,即苏芸金杆菌云南变种,血清型20(Bacillus thuringiensis subsp. Yunnanensis H20)。     

对蚊的高毒效菌株187的研究

对湖北省医学科学院疟疾室筛选的对蚊具有高毒效的菌株187的生物学特性和毒性进行了研究。此菌株的血清型、酯酶型和主要生化反应与参考菌株苏芸金杆菌以色列变种(Bacrillusthuringiensis var. israelensis)1897菌株相同,但在菌体大小、鞭毛、繖毛、运动性、菌落特征、晶体形态和生化特性等方面又有差异。因此认为此菌株属于苏芸金杆菌H。型的一个新品系。其菌披对白纹伊蚊,致乏库蚊和中华按蚊的毒力分别是1897菌株的3．32、2．82和2.48倍,晶体的毒力则分别为1897菌株的4．0·、7．03和1．28倍。     

苏芸金杆菌的一个新血清型

从土壤中分离出一株产生伴孢晶体的芽孢杆菌。该菌株具有苏芸金杆菌的典型特征,严生不规则型晶体,鞭毛抗原及生化反应与已知的苏芸金杆菌21个血清型不㈤,不产生β-外毒素。对棉铃虫、粘虫、大蜡螟及尖音库蚊幼虫均无毒性,是一个新血清型(H22),定名为苏芸金杆菌山东变种(Bacillus thuringiensis serovar shandongiensis, H22)。     

苏芸金杆菌的质粒检测及载晶体蛋白合成基因的质粒在不同菌株间的传递

分析了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)7个变种19个野生菌株及无晶体(sp+cr-)和无芽孢(sp-cr+)突变株的质粒图型,证实了苏芸金杆菌的质粒组成既有变种的特异性,亦有菌株的特异性。载有晶体蛋白质合成基因的质粒,B. thuringiensis var．Kurstaki HD-191 菌株可能为42和50Mdal,B．Thuringiensis var. aizawai HD-282菌株为47Mdal, B．Thuringiensis var．Israelensis IPS-82菌株为57Mdal的质粒,而B．Thuringiensis var. wuhanensis 140 菌株的此种基因则可能不在质粒上而在染色体中。HD-191载晶体蛋白合成基因的质粒以很高频率被传递给其无晶体突变株HD-1并在后者细胞中表达。B. thuringiensis var. israelensisIPS-82菌株和 B．Thuringiensis var. kurstaki 无晶体突变株HD—1之间载晶体蛋白合成基因质粒的传递未能成功,提示可能存在着不相容性的障碍。     

苏云金芽胞杆菌cryⅡ基因的克隆和表达

分离的苏云金芽胞杆菌(Bacillus-thuringiensis)YBT-791对鳞翅目小菜蛾(Plutellaxylostella)有毒力,将其质粒DNA提纯,经HindⅢ酶切后与杀虫晶体蛋白cryⅡ基因探针杂交,显示出分子量分别为5kb和9．4kb两条DNA阳性片段。把5kb的DNA阳性片段克隆到pUCl8的HindⅢ位点上并转化大肠杆菌TGl,经酶切和杂交检测,证明斑点杂交阳性克隆子中含有5kb的cryI片段。把这个含cryⅡ基因的5kbHindⅢ片段进行亚克隆,将4kb的BamHI－Pstl酶切片段插入穿梭载体pXl61中,并用电脉冲法克隆于苏云金杆菌不产伴胞晶体的突变株中,得到产生单一cry Ⅱ基因编码的杀虫晶体蛋白的克隆菌株M一5。经电镜观察,该克隆菌株能形成出发菌YBT－791多种形态伴胞晶体中的一种方形伴胞晶体;经免疫双扩试验,它只能与Cry Ⅱ晶体蛋白抗血清形成沉淀线;经SDS—PAGE电泳,克隆菌的伴胞晶体只含有一种65kDa的晶体蛋白。生物测定结果表明它既对鳞翅目小菜蛾(Piutella xylostella)有毒性,又对双翅目致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)有毒性。     

球孢白僵菌毒素的分离、毒力检测及结构鉴定

用吸附法从球孢白僵菌(Beauveria bassiana)1003-V的代谢产物中分离出导致昆虫患病的毒素粗提物(以下简称毒素),并对其进行了毒力检测.结果表明,该毒素对白纹伊蚊(Aedes albopictus)幼虫有明显毒性;对棉铃虫(Heliothis zea)幼虫口服毒性较弱,血腔注射毒性较强;仅对革兰氏阳性细菌有抑菌作用.对草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf-21细胞株的毒力测定结果表明,毒力回归方程为y=2.03+2.39x,半致死浓度是0.01751%,其95%可信极限为0.01517%~0.0202%.高压液相色谱和红外光谱分析表明,该毒素含有三种在结构和性质上非常相近的物质.     

土壤来源的五个苏云金芽孢杆菌新亚种的鉴定

从中国土壤中分离的大量苏云金芽孢杆菌菌株中鉴定出H42、H43、H56、H60及H62等5种新H血清型,并进行了形态、培养特征、生化反应、晶体蛋白质成分及毒力特性等项检测鉴定,鉴定了5个苏云金芽孢杆菌新亚种： Bacillus thuringiensis subsp. jinghongiensis (H42), B.thuringiensis subsp. guiyangiensis (H43),B.thuringiensis subsp. rongseni(H56),B.thuringiensis subsp. pingluonsis(H60)及B.thuringiensis subsp. zhaodongensis(H62) 。毒力生物测定证明5个新亚种的代表菌株对棉铃虫(Heliothis armigera)\,小菜蛾(Plutella xylostella)\,柳蓝叶甲(Plagiodera versicolora)幼虫均无毒力。H42、H43、H56、H60对埃及伊蚊(Aedes aegypti)\,斑须按蚊(Anopheles stephensi)及尖音库蚊(Culex pipiens)亦均无毒;H62对埃及伊蚊无毒,但对尖音库蚊与斑须按蚊有低毒。     

苏云金芽孢杆菌中华亚种CT-43菌株伴胞晶体蛋白的特性

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)为革兰氏阳性细菌,在其芽孢形成过程中可产生一种对鳞翅目、双翅目和鞘翅目幼虫有高毒力的蛋白质伴胞晶体,近来又发现它对动、植物寄生线虫以及扁形动物门的一些种类有毒,现已成为芽孢杆菌的第二大研究对象。     

亚硝基胍对苏芸金杆菌晶体和芽孢的影响

苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)作为高效、无公害农药用于防治农、林、果、蔬害虫取得了良好的效果。近年来,为了提高苏芸金杆菌对昆虫的致病力,国内外不少学者研究了苏芸金杆菌的伴孢晶体与杀虫毒力的密切关系,并通过自然筛选或遗传育种方法不断获     

苏芸金杆菌伴孢晶体的形态及抗原特性

结合苏芸金杆菌不同品系毒力差异,对伴孢晶体形态、血清学特性进行了比较研究。对分属于7个血清型的19个林系的伴孢晶体观察表明：晶体形态以品系而异与分类属性无关;晶体可归为五个类型：菱形、嵌合形、球形、立方形、不规则形。发现具有嵌合形多的菌株对鳞趔目幼虫毒力不仅高,且在有毒力的菌株中嵌合形并不罕见;不规则形无毒力。对毒力差异大的菌株采用密度梯度离心提纯了其伴孢晶体,进行双向琼脂糖免疫扩敞试验,证明了晶体形态与其对昆虫的毒力有关。     

苏芸金杆菌以色列变种在不同培养基上的产毒能力

苏芸金杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis)对蚊幼虫的杀虫活性,主要在于蛋白质晶体,而营养条件对晶体的合成有着重要影响。据研究,苏芸金杆菌不同血清型对培养基的要求各有差异。关于适合苏芸金杆菌以色列变种产生毒力的培养基,特别是     

苏芸金杆菌以色列变种产毒条件的研究

产毒条件对苏芸金杆菌以色列变种(Bacillus thurtngiensis var israelensis)产毒能力的影响试验表明:提高该菌产毒能力的各种适宜条件是,氮源以花生蛋白的促进作用最高,蛋白胨次之,尿素有显著的抑制作用;碳源以葡萄糖、麦芽糖,甘油及淀粉有促进作用;所试的6种生长素均能不同程度的提高产毒能力;Mg⁺⁺、Ca⁺⁺有明显的促进作用,Mn⁺⁺则有显著的抑制作用。最适pH为7.0—7.5,最适温度为28—32