聚丙烯酰胺凝胶电泳的快速脱色方法

以牛血清白蛋白为材料进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),凝胶固定后,用考马斯亮蓝R-250染色后比较传统脱色液(冰乙酸-甲醇溶液)和不同盐溶液(NACL、KCL、CUCL2)的脱色效果的结果表明:PAGE和SDS-PAGE胶,0.25和0.5MOL·L-1NACL,在70℃(PAGE)、50℃(SDS-PAGE)下脱色,约2￣4H,效果好,灵敏度高,背景低。     

检测SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中家蝇蛋白的新方法——海波银染法

介绍一种检测SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中家蝇幼虫蛋白的新方法-海波银染法。该方法对传统银染方法中的试剂与步骤加以改进,省略了乙醇固定与洗涤步骤,只需20 min即可完成全部染色过程,且仅在国产分析纯试剂及普通操作条件下,灵敏度可达毫微克级水平。     

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳快速染色新方法的研究

通过几种金融盐溶液对SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳染色的实验表明,0.25mol/L的CaCl2和MgCl2溶液能够对蛋白质进行有效的染色,经这2种溶液染色的蛋白质都能够从凝胶中洗脱回收。尤其是CaCl2法灵敏度更高,而且蛋白质条带形成之后也十分稳定,所以在运用制备电泳纯化蛋白质时这种新的染色方法较适用。     

一种改进的蛋白质超薄凝胶电泳方法

介绍了一种将聚丙烯酰胺凝胶固定在电泳夹板上的蛋白质电泳方法.通过此方法蛋白质电泳可以在0.4 mm厚的聚丙烯酰胺凝胶上进行.实验证明,经此方法处理的玻板结合凝胶非常牢固,在电泳后的所有处理步骤中都不会发生凝胶脱落现象.     

微波在蛋白质电泳染色和脱色中的应用

经过实验摸索和实践 ,我们发现一种利用微波处理在10ｍｉｎ内可使聚丙烯酰胺凝胶染色及脱色完成的方法 .ａ 将电泳后的凝胶 (厚度 0 75ｍｍ)取出 ,置于培养皿中用蒸馏水冲去残留缓冲液 .ｂ 加入染色液将凝胶完全浸泡其中 ,放入微波炉内高火档照射 2 0ｓ,停留 1ｍｉｎ ,再照射 10ｓ.ｃ 取出染色液 (回收还可再用 2次 ) ,用蒸馏水冲去凝胶上残留染色液 .ｄ 加入脱色液 ,高火档照射 2 0ｓ ,取出脱色液 ,然后加入新鲜脱色液再照射 2 0ｓ,重复5～ 6次 ,直至背景清晰透明 .实践中我们认为应注意以下几点 :ａ 盛试剂的培养皿上面应盖一稍大的培养…     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的一种辅助辨型方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是实验室常用的基本鉴定方法之一.但由于做胶方式以及各实验室仪器设备良莠不齐,经过一系列纷繁复杂的操作,电泳结果未必尽如人意.其中凝胶带型的判断就是一个较为困惑的问题,一般的聚丙烯酰胺胶跑出的条带总体上都有弧度,越是靠近凝胶两侧越是严重.在本实验中,我们设计了一种较为简单易行的方案,即将难以区分的条带样品做成混合样marker来辅助辨型,通过调整电压和凝胶浓度来达到区分条带的目的.我们用该方案可以将相差0～3 bp大小的条带区分开来.     

初学者做好蛋白质SDS—PAGE需要注意的一些问题

针对初学者在做蛋白质SDS—PAGE时经常遇到的一些问题提出了一些切实可行的解决办法。     

一种α—半乳糖苷酶的凝胶电泳活性染色方法

介绍一种快速、简便鉴定α－半乳糖苷酶凝胶电泳带的坚固蓝Ｂ活性染色方法。采用此方法可直接将粗酶制品上样进行凝胶电泳。电泳完成人需将凝胶放在反应液中浸泡５ｍｉｎ,然后再在ｐＨ为７．８,温度为４℃的条件下染色１ｍｉｎ,即可将凝胶中的酶分子定位带显示出来。这种坚固蓝Ｂ的活性染色方法与孝马斯亮蓝染色相比,节省了大量时间。     

双向聚丙烯酰胺凝胶电泳中的问题及其解决方法

0’Farred”位立的双向聚丙烯酸胺凝胶电泳（简称双向电泳）方法,已被广泛地应用于动物、植物和微生物蛋白质的分析和制备。双向电泳中的第一向等电聚焦和第二向聚丙烯酸胺凝胶电泳均是复杂的化学和物理学的变化过程。目前虽能用两性电解质、胶的孔径和电场变化解释上述部分过程＊,”,但仍有许多细节不清楚,在实验中,常会遇到一些实际问题。Duncan等［’增讨论了第一向的电极缓冲液对双向电泳结果的影响。XIWkwootl等［’j简单讨论了蛋白质样品液中的核酸、盐和脂等杂质对蛋白质电泳行为的影响。但至今尚没有系统地讨论在双向电泳实…     

细菌蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定

细菌蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定华西医科大学口腔医学院口腔生物医学工程重点实验室成都６１００４１黄毅早在１９０８年,电泳现象就已被发现,Ｔｉｓｅｌｉｕｓ于１９３７年对电泳仪器作了重大改进,随后电泳技术才日益普及并成为鉴定生物大分子的基本工具。Ｆｏｗｌ...     

多倍体麦类作物Wx蛋白检测的SDS-PAGE方法

本文通过对小麦蜡质蛋白的实验和研究,详细论述了蜡质蛋白的特性、提取 原理、电泳原理和检验原理。对多倍体麦类作物Wx蛋白亚基的检测,提出了应用效果良好的电泳系统,并就提取方法、凝胶配方和操作步骤进行了描述。本文还列出了部分麦类作物蜡质蛋白亚基基本模式示意图和实验例证,具有很好的参考价值。 Abstract:The waxy protein property,principles of its extraction,electrophoresis and detection were discussed in detail in this paper.According to the detection of polyploid wheat waxy subunits,an effective electrophoresis system was given with the extraction method,gel composition and operating steps listed.The basic iso-form patterns of wheat and related species as well as an application example were also showed in the paper.It is recommended that this paper is valuable both as reference and in application.     

检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的3种染色方法比较

用考马斯亮蓝染色、银染色、铜染色等 3种方法对同一种蛋白质染色的灵敏度、快速性进行比较 ,得出 3种蛋白质染色方法的优缺点 ,为蛋白质电泳染色合理选用不同方法提供依据     

A Rapid Silver Staining and Destaining Technique for the Nucleolus Organizer Region

Silver staining of nucleolar organizing regions (NOR) is common, but a standard protocol is lacking. A modification of a rapid silver nitrate staining technique for NORs is presented here. Advantages of the modified technique include reliability, speed, cost and the fact that it can be carried out in the light.     

SDS-PAGE分析肝癌细胞和正常肝细胞膜蛋白

目的:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法获得肝癌细胞株HepG2和人正常肝细胞株L-02蛋白质表达谱,期待找到与肝癌细胞相关的差异蛋白。方法:体外培养肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株L-02,分离提取细胞膜蛋白,用SDS-PAGE分析细胞膜蛋白。结果:2种细胞膜蛋白的疏水相和亲水相蛋白区带位置基本相同,但肝癌细胞株HepG2膜蛋白在相对分子质量66×103处有较清晰的异常蛋白区带。结论:肝癌细胞HepG2除了具有与正常肝细胞相同的组成物质外,还有自己独特的蛋白质表达谱,这一实验可为癌症的研究提供一定的参考。     

一种简便经济的凝胶电泳同工酶特异染色方法

介绍一种简单、经济的同工酶染色方法：用熔化的0．4％琼脂糖处理滤纸备用,染色前将滤纸浸于同工酶染色液中,染色时将滤纸盖在聚丙烯酸胺胶上,然后将胶放在有盖塑料盒中保温染色,染色时间要比普通方法略长。染色后将胶和滤纸移入固定液中用镊子除去滤纸．     

SDS-PAGE法测定His-tag融合蛋白分子量产生偏差的原因

Ｈｉｓｔａｇ／ＮｉＮＴＡ系统是新发展起来的一个亲和纯化重组蛋白的有用工具,现常用于基因编码产物的特性研究中。ＳＤＳＰＡＧＥ是实验室测定蛋白质分子量通常采用的方法,而许多实验室用此方法检测Ｈｉｓｔａｇ融合蛋白时却常发现测得的分子量偏大,产生偏差的原因尚未阐明。为弄清这一问题,本实验室在研究一个Ｈｉｓｔａｇ融合蛋白Ｐ７３Ｈｉｓ时,首先用ＳＤＳＰＡＧＥ法测得其分子量确实比理论计算值大,然后对其进行Ｃ末端氨基酸顺序测定、电喷雾质谱分析,结果证实其实际分子量与理论值一致。酶切去除包括Ｈｉｓｔａｇ在内的部分肽段使ＳＤＳＰＡＧＥ法测量蛋白分子量的偏差大大降低,证实Ｈｉｓｔａｇ确实是造成偏差的原因之一。推测由于Ｈｉｓｔａｇ中的碱性氨基酸的作用造成蛋白在ＳＤＳＰＡＧＥ中迁移变慢,而导致偏差。这一现象值得引起有关研究者的注意。     

Protein patterns obtained from support-bound gels by combining the images at different stages of destaining

A more informative method for the visualization of proteins on thin-layer gels, based on combining the images of the gel at different stages of destaining, is presented. It is useful whenever important information seems to be lost after prolonged destaining. The method, which makes it unnecessary to run different loads in different channels, has been developed utilizing isoelectric focusing on polyester film-bound agarose gels. The strongly destained gel is superimposed on a negative image of the same gel made at an earlier phase of destaining, thus showing white spots on a gray background for minor components and dark bands in a white field surrounded by the grey background for the abundant ones. In general, the method may be applied to gel images obtained by different staining procedures.     

小麦高分子量麦谷蛋白亚基分离方法的研究

小麦高分子量麦谷蛋白亚基（ＨＭＷ－ＧＳ）与小麦面包烘烤质量和面粉的加工特性密切相关,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ是其常用的分离方法之一。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方法一般分为２类：第一类采用１１％和５％浓度的胶,后者用于分离２亚基和２＾＊亚基,该种方法常使用碱性提取液,需要２次电泳过程,且在５％浓度的胶中ＨＭＷ－ＧＳ易于和麦醇蛋白混淆;另外一类ＳＤＳ－ＰＡＧＥ采用梯度胶,配合使用银染方法,制梯度胶则使用梯度仪及磁力搅拌     

Improved Phos-tag SDS-PAGE under neutral pH conditions for advanced protein phosphorylation profiling

We describe an improved Phos-tag SDS-PAGE (Zn(2+)-Phos-tag SDS-PAGE) using a dizinc(II) complex of Phos-tag acrylamide in conjunction with a Bis-tris-buffered neutral-pH gel system to detect shifts in the mobility of phosphoproteins. An existing technique (Mn(2+)-Phos-tag SDS-PAGE) using a polyacrylamide-bound Mn(2+)-Phos-tag and a conventional Laemmli's buffer system under alkaline pH conditions has limitations for separating certain phosphoproteins. The major improvements were demonstrated by visualizing novel up-shifted bands of commercially available pepsin, recombinant Tau treated in vitro with tyrosine kinases, and endogeneous β-catenin in whole-cell lysates. Additionally, the Zn(2+)-Phos-tag SDS-PAGE gels showed better long-term stability than the Mn(2+)-Phos-tag SDS-PAGE gels. We can therefore provide a simple, convenient, and more reliable homemade gel system for phosphate-affinity SDS-PAGE.