一株产生EB病毒的狨猴淋巴细胞株的建立

用Ｂ９５８细胞株产生的ＥＢ病毒,转化棉顶狨猴外周血淋巴细胞,获得ＫＭＴ３细胞株。该细胞株能产生高滴度的ＥＢ病毒。含ＥＢ病毒衣壳抗原的自然阳性细胞率为３～５％,激活后达５０～６０％,其培养上清液可直接转化人淋巴细胞得到传代细胞系。ＫＭＴ３细胞染色体数２ｎ＝４６条     

Epstein—Barr病毒膜抗原基因免疫的研究

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因,插入含有ＣＭＶ启动子的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３下游ＢａｍＨＩ位点,构建成真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＭＡ。将纯化的ＤＮＡ注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗ＥＢ病毒ＭＡ特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ）,特异性Ｔ淋巴细胞增生性反应及细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤作用。基因免疫与基因－蛋白     

Epstein-Barr病毒膜抗原基因免疫的研究

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因,插入含有ＣＭＶ启动子的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３下游ＢａｍＨＩ位点,构建成真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＭＡ。将纯化的ＤＮＡ注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗ＥＢ病毒ＭＡ特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ）,特异性Ｔ淋巴细胞增生性反应及细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤作用。基因免疫与基因－蛋白联合免疫效果相似。不同启动子控制下的ＭＡ基因,诱发小鼠免疫应答无明显差异。     

对鼻咽癌恶性转化基因Tx表达的初步研究

运用杂交组化及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ法,对中国人鼻咽癌细胞株恶性转化基因Ｔｘ的表达进行了初步研究。结果表明该基因在鼻咽癌细胞株中表达１．３ｋｂｍＲＮＡ,但表达强度较低,在ＨＰＶ阳性或阴性人宫颈癌细胞中均无表达,ＥＢＶ阴性的Ｂ淋巴细胞系及ＨＴＬＶ－１阳性的Ｔ细胞系中为阴性,而在ＥＢＶ阳性的Ｂ９５－８及Ｒａｊｉ细胞中Ｔｘ基因表达强烈,从而提示ＨＰＶ及ＨＴＬＶ－１不增强Ｔｘ的表达水平,而ＥＢＶ可能使Ｔｘ基因活化．这为进一步研究ＥＢＶ与Ｔｘ等瘤基因协同作用提供了新的依据。     

在昆虫细胞中同时表达蓝舌病毒VP3与VP7蛋白可装配成核心样颗粒

将蓝舌病毒（ＢＴＶ）１３型Ｓ７与Ｌ３基因同时插入杆状病毒双表达载体ｐＥａｓｔＢａｃＤｕａｌ,获得重组杆状病毒ｒｖＢａｃＢＴＶＰ３７。该病毒在昆虫细胞中同时高水平表达ＢＴＶ１３ ＶＰ３与ＶＰ７蛋白,可以高效自动装配出２０面体的６０￣７０ｎｍ空心颗粒。分析表明,所获颗粒为空心的ＢＴＶ核心样颗粒（ＣＬＰ）,其成分为ＶＰ３与ＶＰ７,不含ＢＴＶ其它任何蛋白与核酸。这种装配需要ＶＰ３与ＶＰ７的共同参与,二者缺     

EB病毒与促癌物协同作用诱发人鼻咽恶性淋巴瘤和未分化癌的研究

将ＥＢ病毒感染的人胎儿鼻咽粘膜移植于２２只Ｂａｌｂ／ｃ裸鼠皮下,每周一次皮下注射丁酸和佛波醇二酯（ＴＰＡ）,约１０天后肿物逐渐增大,１５周内行病理学检查,诊断为恶性淋巴瘤４例（其中Ｔ淋巴细胞型３例）,未分化癌３例,ＰＣＲ和原位杂交显示,两种肿瘤组织和细胞中均含有ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因,核苷酸序列分析表明,与Ｂ９５－８细胞ＬＭＰ１基因相应序列的同源性约为９６％和９９％,说明ＥＢ病毒感染人胎儿新鲜鼻咽上     

利用聚乙二醇(PEG8000)纯化小球藻病毒FJ-1

为了提取小球藻病毒基因组ＤＮＡ,探索利用３％￣１０％的ＰＥＧ８０００加３％￣７％的ＮａＣｌ沉淀病毒。其中以７％的ＰＥＧ和４％的ＮａＣｌ沉淀效果最好,但其沉淀效率较低。     

快速检测支气管肺泡灌洗液T细胞的研究

目的建立一种简便、快速检测支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中Ｔ淋巴细胞总数的方法。方法用改良的α－醋酸萘酯酶（ＡＮＡＥ）染色法鉴别和计数ＢＡＬＦ中Ｔ淋巴细胞。用本法共检测２２７例大鼠ＢＡＬＦ,并采用两样本均数比较的ｔ检验分析３批动物实验的测定结果。结果大鼠ＢＡＬＦ细胞涂片ＡＮＡＥ染色效果满意,Ｔ淋巴细胞容易鉴别。测得１１０只正常大鼠ＢＡＬＦ中Ｔ淋巴细胞比值的正常值为（６９．３６±１１．４７）％。各个实验组与相应对照组比较,ＢＡＬＦ中Ｔ淋巴细胞比值均出现不同程度的变化。结论本方法简便易行,能准确地显示ＢＡＬＦ中Ｔ淋巴细胞数值的变化。本研究是国内首次报道,为实验和临床研究肺局部细胞免疫状况提供了一种简便的方法及其应用的实验依据。     

中国疫苗株鸡痘病毒插入载体的构建与MDV糖蛋白B的表达

在对中国鸡痘病毒疫苗株２８２Ｅ４基因组ＤＮＡ进行克隆与亚克隆的基础上,进一步插入Ｐ１１－ＬａｃＺ标记基因,根据蓝斑选择原理筛选出３个病毒在细胞培养物上生长所不必需的片段,为了便于外源基因的插入,特将Ｐ７．５－Ｐ１１－ＬａｃＺ基因框转移至ＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴＳＫＭ１３－的Ａｐａｌ将ＭＣＳ－Ｐ７．５－Ｐ１１－ＬａｃＺ框切下,置入一个亚克隆的非必需片段中,构建成中国鸡痘病毒插入载体ｐＦＧ１１７５－１,以     

用核酸免疫技术制备抗丙肝病毒C区单克隆抗体

用丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１区真核表达质粒ｐｃＤＮＡ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１按４００ｕｇ／只剂量免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,１４周后同一剂量再加强免疫一次。加强免疫后２周,在５０％ＰＥＧ１４５０介导下将脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞（５１）融合。实验结果融合率达５４．３％（３１３／５７６）。阳性率为５．４％（１７”３１３）。克隆化后得到６株稳定分泌抗丙肝病毒Ｃ区单克隆抗体杂交瘤细胞株。这６株杂交瘤均产生ＩｇＭ抗体,接种ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后产生腹水的效价为１６４－１３２０（ＥＬＩＳＡ）。     

正常的和转化的C3H小鼠胚胎成纤维细胞neu基因结构的初步研究

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术并结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交从基因水平对正常和￣３Ｈ－ＴｄＲ恶性转化小鼠胚胎成纤维细胞ＮＣ３Ｈ１０和ＴＣ３Ｈ１０中ｎｅｕ基因进行研究。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交结果表明恶性转化的ＴＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因出现重排和扩增,ＳＳＣＰ分析未发现ＴＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因跨膜区突变。上述结果说明ＴＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因结构异常可能在跨膜区外,ｎｅｕ基因异常在￣３Ｈ－ＴｄＲ诱导的细胞恶性转化过程中可能有重要的作用,ＥＧＦ可促进ｎｅｕ基因表达增高,研究发现在ＥＧＦ持续作用下,ＮＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因甲基化水平无显著变化,说明ＥＧＦ可能是通过其它途径调控ｎｅｕ基因表达增高的,排除了ＥＧＦ通过改变ｎｅｕ基因甲基化水平而调控ｎｅｕ基因表达的可能性。     

建立海南黎族永生细胞库

采用ＥＢ病毒转化外周血Ｂ淋巴细胞加环胞霉素Ａ 法,建立了含５４ 株海南黎族永生细胞库（男性５６％ ,女性４４％ ）,有亲缘关系者占１３％ 。供血者身体健康,三代无与其他民族或支系通婚史。     

家蚕核型多角体病毒中国株和日本株vp39基因的比较研究

以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒的核衣壳蛋白基因ｖｐ３９设计引物,用ＰＣＲ技术扩增了家蚕核型多角体病毒中国株（ＢｍＮＰＶ－Ｃｈ）－１．３ｋｂ片段并测定了其全序列长１２３０ｂｐ。推导的氨基酸３５１个,其与ＢｍＮＰＶ日本株（ＢｍＮＰＶ－Ｊａ）ｖｐ３９基因核苷酸序列同源性达９７．５％,氨基酸同源性达９７．１％。该片段在Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１中诱导表达能产生分子量约为３８ｋＤ的特征性蛋白带,证明所扩增片段为Ｂｍ     

同时表达蓝舌病毒四个主要结构蛋白可装配成病毒样颗粒

为研制蓝舌病毒（ｂｌｕｅｔｏｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ,ＢＴＶ）基因工程疫苗和进一步研究ＢＴＶ结构与功能的关系,对ＢＴＶ病毒样颗粒（ＶＬＰ）的装配进行了研究。同时在昆虫细胞中表达ＢＴＶ主要结构蛋白ＶＰ７、ＶＰ３、ＶＰ２与ＶＰ５,将细胞裂解液超速离心纯化后,发现主要存在两 形态的颗粒：一种与前文报道的病毒核心颗粒（ＣＬＰ）相同,直径约为６０ｎｍ￣７０ｎｍ,蛋白壳厚１０ｎｍ￣１５ｎｍ;另一种大小为７０ｎｍ￣     

人胸腺上皮细胞培养上清液促进鼠胸腺细胞和细胞株增殖的研究(英文)

胸腺是细胞分化发育的场所,源于骨髓的前Ｔ细胞。在以胸腺上皮细胞为主体的基质细胞作用下,增殖、分化、成为成熟Ｔ细胞,迁移至外周。胸腺基质细胞通过细胞与细胞之间的直接接触和分泌细胞因子影响细胞分化发育的各个阶段。本文探讨了人胸腺上皮细胞培养上清液（ＴＥＣＳＮ）对鼠胸腺细胞、８５、Ｂｅ１３、ＨＤＭａｒ、Ｍｏｌｔ４、Ｒｅｈ以及Ｊｕｒｋａｔ细胞株增殖的影响。取人胸腺组织,用０．１５％的胰酶消化组织块后,将其接种到培养瓶中进行培养,收集上清液。将ＴＥＣＳＮ加到鼠胸腺细胞悬液中,２ｈ后加３ＨＴｄＲ,观察鼠胸腺细胞自发性掺入３ＨＴｄＲ有无改变。同时将ＴＥＣＳＮ＋ＣｏｎＡ加入鼠胸腺细胞悬液中培养４８ｈ,收获细胞前１８ｈ加入３ＨＴｄＲ,测定ＣＰＭ值。此外,ＴＥＣＳＮ加入８５细胞株及其它细胞株悬液中,观察ＴＥＣＳＮ对这些细胞株增殖的影响。上述各实验均设有对照组（Ｔａｂ．１）。结果表明：ＴＥＣＳＮ本身能增强鼠胸腺细胞３ＨＴｄＲ自发掺入,其３ＨＴｄＲＣＰＭ值明显大于对照组（Ｆｉｇ．１）。ＴＥＣＳＮ单独使用不影响胸腺细胞增殖,ＣｏｎＡ单独作用能促进鼠胸腺细胞增殖反应,而ＴＥＣＳＮ与ＣｏｎＡ共同使用,胸腺     

农杆菌转化获得转B.t.基因水稻及其生物学鉴定

以水稻主栽品种“秀水１１”和“春江１１”预培养４ｄ未成熟胚为转化受体,经农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＧＢＩ４Ａ２Ｂ（含Ｂ．ｔ．基因）感染后,筛选出抗性愈伤组织并获得转化植株。其中抗性愈伤组织产生频率达４４％￣７０％,转化植株产生频率达２７％￣６４％。转基因植物总ＤＮＡ经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分子杂交试验表明,Ｔ－ＤＮＡ上的外源基因已整合到水稻的基因组里。对转Ｂ．ｔ．基因水稻植株进行了两种水     

新型生长抑肽对成纤维细胞的DNA合成及某些癌基因表达的影响

从细胞水平和基国水平研究了新型生长抑肽（ＥＰＰ）的生物学作用，研究表明：ＥＰＰ对ＮＣ３Ｈ１０及ＴＣ３Ｈ１０细胞的ＤＮＡ合成均有抑制作用，当ＥＰＰ与ｃＡＭＰ的位点选择必类似物８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ共同作用时，其对ＮＣ３Ｈ１０细胞的ＤＮＡ合成的抑制作用消失，而对ＴＣ３Ｈ１０仍具有抑制作用；核酸杂交分析表明，ＥＰＰ可以抑制ｃ－ｆｏｓ，ｎｅｕ，ｋｉ－ｒａｓ三类癌基因在转化中的表达，证明了ＥＰＰ对转化细胞的生长     

伪狂犬病病毒Fa株胸苷激酶基因缺失株的构建

采用外切除缺失法对已克隆于ｐＢＲ３２２中包含伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）胸苷激酶（ＴＫ）基因的ＢａｍＨＩ－１１片段（ｐＰＢ１１）进行改建,经筛选获得４株ＴＫ基因缺失重组质粒（ｐＤＴＫ３－１．ｐＤＴＫ３－６,ｐｄＴＫ３－８和ｐＤＴＫ５－６）对其进行酶切鉴定和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交,结果其１１片段迁移率均发生改变,缺失的碱基数分别约１２５０,１１００,１２５０和２００ｂｐ,用ＰＲＶＦａ－ＤＮＡ或ＰＲＶＦａ     

带有逆转录病毒的恶性T淋巴细胞株的建立

从一例患神经系统疾病病人的外周血淋巴细胞中建立了一株恶性Ｔ淋巴细胞株ＣＭ－１并研究了它的生物学特性。用过滤的ＣＭ－１细胞的培养上清,可命名多发性血管硬化症病人的淋巴细胞转化恶性Ｔ淋巴细胞,由此建立ＣＭ－２细胞株。用ＣＭ－１和ＣＭ－２细胞皮下接种裸鼠,都能使裸鼠产生弥漫性恶性淋巴瘤。电镜下见到了类似于Ｃ型逆转录病毒的颗粒,逆转酶活性检测阳性。血清学和基因检测表明ＣＭ－１和ＣＭ－２中不存在本室常用的其     

病毒性心肌炎发病机理的实验研究：—T细胞亚群和抗心肌抗体检测

以柯萨奇Ｂ＿３病毒（ＣＶＢ＿３）感染Ｂａｌｂ／ｃ小鼠建立心肌炎模型,检测了小鼠脾脏中Ｔ细胞亚群和血清中的抗心肌抗体,并进行了心脏病毒分离及组织病理学检查。结果显示,病毒感染后５天,脾脏中Ｔｈｙ１,２￣＋（Ｔ＿总）增高,７一１５天降低,第２１天恢复正常。Ｌ３Ｔ４￣＋（Ｔｃ／Ｔｓ）于病毒感染后５一２１天均明显高于对照组。Ｌ３Ｔ４＋（Ｔｈ／ｉ）于病毒感染后７天开始增高,直到２１天均明显高于对照组。病毒感染后１５天,抗心脏肌球蛋白抗休开始增高,第２１天继续增高。病毒感染后３一５天,心脏病毒分离均为阳性;第７天部分小鼠心脏中仍可分离出病毒;第１５天心脏病毒分离为阴性。病毒感染后７一２１天,心肌坏死、间质炎细胞浸润等病理变化进行性加重。上述结果提示,病毒感染本身和免疫因素都可能参与心肌炎的发病。