侧脑室引流术在隐球菌性脑膜脑炎早期治疗中的应用

目的观察侧脑室引流术在隐球菌性脑膜脑炎早期治疗中的临床效果,探讨其有效性与安全性。方法对近年来我科治疗的5例初发隐球菌性脑膜脑炎伴高颅压患者的临床资料进行回顾性分析。结果 5例患者经早期行侧脑室引流后临床症状迅速缓解,撤除引流管后症状无加重;5例患者中无一例发生感染等并发症。联合抗真菌治疗后早期真菌学指标好转,长期随访中,4例患者临床治愈,无复发,1例死亡。结论侧脑室引流是隐球菌性脑膜脑炎早期治疗中快速、安全缓解头痛症状及减少并发症的有效手段。     

67例艾滋病合并新生隐球菌性脑膜脑炎临床分析

目的探讨艾滋病合并新生隐球菌性脑膜脑炎的临床特点及预后。方法回顾性收集2010年1月1日～2016年12月31日于北京佑安医院住院治疗的艾滋病合并新生隐球菌性脑膜脑炎患者,分析临床表现、实验室特点、治疗方案及转归。结果共67例患者确诊为艾滋病合并新生隐球菌性脑膜脑炎(男60例,女7例)。主要临床表现为头痛(74.6%),发热(47.8%)和恶心呕吐(40.3%),为最常见的3个症状。最常见的辅助检查异常是颅内压升高(78.9%),平均216.6 (±100.3 mmH_2O)。实验室检查CD4~+T细胞计数为53.7(±79.9)个/mm~3。本组患者病死率29.9%%(20/67)。结论新生隐球菌性脑膜脑炎是艾滋病患者的严重并发症,降低隐球菌性脑膜脑炎病死率的关键是早期诊断及充分、规范的治疗,以减少隐球菌对脑实质的损伤,挽救患者生命。     

MMP-9-1562位点T等位基因与儿童EV71重症脑炎易感性关系的研究

目的:研究基因MMP-9-1562位点基因多态性与肠道病毒71型(EV71)脑炎的关系,探讨不同基因型对EV71脑炎患病风险及病情程度的影响.方法:运用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测EV71感染阳性病毒性脑炎患儿及正常对照组儿童基因组MMP-9-1562位点碱基变异情况.结果:EV71脑炎重症组MMP-9-1562位点T等位基因频率分布明显高于EV71脑炎轻症组(16％VS7.5％,OR 2.362,95％CI 1.170-4.768,P＜0.05).MMP-9-1562位点T等位基因携带者感染EV71后可明显增加神经系统并发症的发生率.EV71脑炎患儿MMP-9-1562位点T等位基因频率分布与正常对照儿童比较无明显差异.结论:MMP-9-1562位点T等位基因携带者在感染EV71后易发展为重症中枢神经系统感染;MMP-9-1562位点T等位基因可增加EV71感染后神经系统并发症的发生率;MMP-9-1562位点单核苷酸多态性与EV71脑炎的发病率无关.     

肠道病毒71型研究进展

肠道病毒71型是一种具有较强致病性的肠道病毒,主要引起患者手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)。已在世界多个地区爆发和流行,主要症状是手、足、口、臀等部位皮疹或疱疹,少数患儿可以并发无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹等严重神经系统并发症,呼吸道感染和心肌炎等,可致残、致死。2007—2008年中国多个地区均有较大规模流行,危害十分严重。近四十年的多次流行中,EV71病毒的基因不断进化,研究其基因变化特点对早期诊断、分型以及了解基因与流行、致病的关系等有着重要的意义。对EV71感染尚缺乏有效的抗病毒药物,研制有效的预防性疫苗迫在眉睫,目前有灭活疫苗、减毒疫苗、多肽或蛋白疫苗、DNA疫苗等多种尝试,但至今尚无EV71疫苗上市。本文对EV71基因、实验室诊断和疫苗方面的研究进展进行了综述。     

90例流行性腮腺炎的临床分析

目的了解流行性腮腺炎的流行病学及临床特点,为制定防治措施提供依据。方法对2008年1月～2012年12月我院收治的90例流行性腮腺炎患者的临床资料进行分析。结果本组病例主要为儿童和青少年,全年均有散发病例,发病高峰期为4～7月份,儿童发病率下降,成人发病率增加。临床表现主要为腮腺肿痛和发热,脑膜脑炎和睾丸炎是常见并发症。应用利巴韦林联合中成药痰热清,并针对并发症治疗,均痊愈出院,预后良好。结论流行性腮腺炎发病呈全年散发流行,成人发病率增加,绝大部分病例为单纯普通型,并发症以脑膜脑炎为主,睾丸炎次之,患者预后良好。     

脑疾病与游离氨基酸的研究

脑疾病包括肝性脑病 (或肝昏迷 ) ,乙型脑炎 ,儿童智力发育不全 ,脑瘫 ,新生儿缺氧缺血脑病以及脑衰老等。研究结果说明 :( 1 )肝性脑病 (或肝昏迷 )和乙型脑炎患者体液中谷氨酰胺水平升高 ,这种升高可以作为以上两种疾病的早期诊断 ;( 2 )脑瘫 ,智力发育不全以及脑衰老 (动物 )等患者 ,体液中谷氨酸浓度降低而r 氨基酸 (GABA)浓度升高 ,它们可以作为评价大脑损伤程度的指标 ,同时也有早期诊断这些疾病的价值 ;( 3)适当补充必需氨基酸能控制以上各种脑疾病的发展。     

26例免疫功能缺陷隐球菌性脑膜脑炎患者的临床分析及护理措施

目的 分析免疫功能缺陷隐球菌性脑膜脑炎患者的临床表现及特点。方法 回顾上海2家三甲教学医院近10年来免疫功能缺陷隐球菌性脑膜脑炎患者的临床表现、实验室检查、诊治情况及护理措施。结果 26例患者中,平均年龄为(32.8±16.9)岁,男女比例为1.17∶1。本研究纳入的26例患者临床症状不典型,以头痛(92.31%)、发热(69.23%)、恶心干呕(69.23%)等最为常见。患者脑脊液压力偏高,平均为(342.72±73.27)mmH₂O。26例患者首次腰穿后,24例(92.31%)患者墨汁染色直接镜检阳性,8例(30.77%)患者脑脊液培养阳性,26例患者中有25例(96.15%)乳胶凝集试验阳性。26例患者诱导期抗真菌治疗以两性霉素B联合氟胞嘧啶为主(16/26,61.54%)。所有患者经系统性抗真菌治疗后,8例治愈,8例好转,10例无效,视听功能受累患者10例。所有患者经周密护理,在治疗期间无护理相关并发症出现。结论免疫功能缺陷隐球菌性脑膜脑炎早期临床表现不典型,极易误诊漏诊,临床医师及护理人员应对此提高警惕。对高危疑似病例及早进行真菌学检查是改善患者预后的基...     

动态脑电图与常规脑电图应用于病毒性脑炎诊断的效果分析

目的:探讨动态脑电图与常规脑电图应用于病毒性脑炎的应用价值。方法:选取150例病毒性脑炎患者,随机分为两组,每组各75例,常规脑电图(REEG)组采用常规脑电图检查,动态脑电图(AEEG)组采用动态脑电图检查;观察并记录脑电图异常率,不同程度病情脑电图异常率的例数,评价动态脑电图与常规脑电图对病毒性脑炎的检测灵敏度和准确度。结果:AEEG组检出的脑电图异常率明显高于REEG组(P0.05)。不同程度病情脑电图检出的患者比例,两组相比,差异没有统计学意义(F=-0.085,P0.05)。REEG组中,轻度与中度病毒性脑炎检出率相比,差异没有统计学意义(P0.05),中度与重度病毒性脑炎检出率相比,差异没有统计学意义(P0.05),重度病毒性脑炎检出率明显高于轻度(P0.05)。AEEG组中,轻度与中度病毒性脑炎检出率相比,差异没有统计学意义(P0.05),重度病毒性脑炎检出率明显高于中度和轻度(P0.05),AEEG组重度病毒性脑炎检出率明显高于REEG组(P0.05)。结论:动态脑电图作为一种无创性检查,对于病毒性脑炎具有极好的检出率,灵敏度高,适用于病毒性脑膜炎的早期辅助诊断。     

急性心肌梗死患者早期的排便护理

目的探讨急性心肌梗死患者早期的排便护理,预防排便相关并发症。方法对急性心肌梗死患者及时进行心肌梗死早期的排便评估,健康教育以及心理、饮食、用药、排便及排便结束后的护理,并观察病情等。结果早期正确的排便护理,能有效预防排便相关并发症。结论急性心肌梗死患者早期正确的排便护理可预防排便相关并发症,对防止病情恶化,促进患者早日康复具有重要意义。     

乙型脑炎病毒及其疫苗的研究进展

流行性乙型脑炎是由乙型脑炎病毒引起的、经蚊虫传播的严重危害中枢神经系统的人畜共患急性传染病,其重症病死率高,易造成永久性的神经系统后遗症,严重威胁着人类的健康。目前尚无特效的治疗流行性乙型脑炎的方法,控制蚊虫传播和免疫接种是当前的主要防御手段。简要综述了乙型脑炎病毒的基因组结构、结构蛋白与非结构蛋白功能、基因分型,以及流行性乙型脑炎疫苗的研究进展。     

Development of Improved Mumps Vaccine Candidates by Mutating Viral mRNA Cap Methyltransferase Sites in the Large Polymerase Protein

Virologica Sinica - Although a live attenuated vaccine is available for controlling mumps virus (MuV), mumps still outbreaks frequently worldwide. The attenuated MuV vaccine strain S79 is widely...     

一株腮腺炎野毒分离传代前后其SH基因cDNA的测序比较

为证实鸡胚分离传代是否引起腮腺炎病毒基因组高变区小疏水蛋白（ＳＨ）基因的变异,用来源于上海的腮腺炎野毒Ｗｓｈ３株在鸡胚尿囊腔分离前和传代５次后测定ＳＨ基因及其旁侧区３８０个核苷酸的ｃＤＮＡ序列,两者结果相同,未见该基因的突变。该基因核苷酸测序可用于腮腺炎病毒的分子流行病学和毒株基因鉴别研究。     

Improved PCR performance and fidelity of double mutant Neq A523R/N540R DNA polymerase

We previously reported that Neq A523R DNA polymerase is more efficient in PCR than wild-type Neq DNA polymerase, and amplifies products more rapidly. Neq A523R DNA polymerase also amplifies templates more rapidly than Pfu DNA polymerase, but has a lower fidelity than Pfu DNA polymerase. To improve product yield and the fidelity of amplification simultaneously, we constructed and characterized the double mutant Neq A523R/N540R. The yield of PCR products was greater for Neq A523R/N540R DNA polymerase than wild-type and other mutant DNA polymerases, and the Neq double mutant catalyzed amplification of a 12-kb PCR product from a lambda template with an extension time of 3 min. The PCR error rate of Neq A523R/N540R DNA polymerase (6.3 × 10⁻⁵) was roughly similar to that of Pfu DNA polymerase (4.8 × 10⁻⁵), but much lower than those of wild-type Neq DNA polymerase (57.2 × 10⁻⁵), Neq A523R DNA polymerase (13.1 × 10⁻⁵), and Neq N540R DNA polymerase (37.7 × 10⁻⁵). These results indicated that A523R and N540R mutations of Neq DNA polymerase had synergistic effects on its fidelity.     

Detection of Minute Virus of Mice Using Real Time Quantitative PCR in Assessment of Virus Clearance During the Purification Of Mammalian Cell Substrate Derived Biotherapeutics

A real time quantitative PCR assay has been developed for detecting minute virus of mice (MVM). This assay directly quantifies PCR product by monitoring the increase of fluorescence intensity emitted during enzymatic hydrolysis of an oligonucleotide probe labelled covalently with fluorescent reporting and quenching dyes via Taq polymerase 5'-->3' exonuclease activity. The quantity of MVM DNA molecules in the samples was determined using a known amount of MVM standard control DNA fragment cloned into a plasmid (pCR-MVM). We have demonstrated that MVM TaqMan PCR assay is approximately 1000-fold more sensitive than the microplate infectivity assay with the lowest detection limit of approximately one particle per reaction. The reliable detection range is within 100 to 10(9) molecules per reaction with high reproducibility. The intra assay variation is <2.5%, and the inter assays variation is <6.5% when samples contain >100 particles/assay. When we applied the TaqMan PCR to MVM clearance studies done by column chromatography or normal flow viral filtration, we found that the virus removal factors were similar to that of virus infectivity assay. It takes about a day to complete entire assay processes, thus, the TaqMan PCR assay is at least 10-fold faster than the infectivity assay. Therefore, we concluded that this fast, specific, sensitive, and robust assay could replace the infectivity assay for virus clearance evaluation.     

一种高特异性的改良降落PCR

为提高基因组DNA中的基因PCR检出的特异性,设计了一种改良的降落PCR程序,并分别用TaqDNA聚合酶及高保真PfuDNA聚合酶进行实验。自盐藻Dunaliella bardawil中提取基因组DNA作为PCR模板,使用TaqDNA聚合酶及PfuDNA聚合酶,运用普通PCR和降落PCR程序,扩增胡萝眩素生物合成相关基因（cbr）上游启动子序列,并电泳比较PCR扩增产物的特异性。结果显示,使用普通Taq酶PCR,普通PCR程序产生200bp,500bp和1272bp长的三条带,而TD-PCR程序仅克隆出1272bp的特异带;利用高保真的PfuDNA聚合酶作PCR,在TD-PCR泳道中仅有1272bp一条带,而普通PCR除了1272bp的特异带外,还出现一条500bp的非特异带。无论使用普通Taq酶或高保真酶Pfu,改良的降落PCR程序均明显提高PCR的特异性,类似的降落PCR程序可望用于克隆用普通PCR难以克隆的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性。     

一种高效而经济获得长片段基因突变体的方法

重组PCR方法的发展为体外突变技术提供了更快捷、准确的方法.通过改进引物设计和PCR保真性等方法,应用重叠延伸PCR的原理成功地实现了对BA基因的定点突变,并构建了其含有m1,m2,m3和m4的突变体.实验证明通过这种改进方法可以有效地进行长片段基因的突变,并且这种方法与其他方法相比具有简便、快捷、经济、高效的特点.     

腮腺炎病毒F蛋白七肽重复序列的表达、纯化及特性分析

副粘病毒F蛋白的两段七肽重复序列（HR1和HR2）在病毒侵染细胞的过程中相互作用形成热稳定的富含α螺旋的异源二聚体,此结构的形成引起病毒囊膜与细胞膜的并置而最终导致膜融合的发生。腮腺炎病毒（Mumps virus, MuV）属于副粘病毒科,腮腺炎病毒属,可能利用与其他副粘病毒相似的侵染机制。本研究对MuV 融合蛋白的HR区进行了计算机程序预测,并利用大肠杆菌GST融合表达系统对MuV F蛋白HR1和HR2两段多肽进行了表达和纯化,通过GST pull_down 实验证实HR1和HR2多肽在体外能够相互作用,凝胶过滤层析证明HR1、HR2多肽能够形成多聚体,说明MuV F蛋白的HR区的相互作用可能是其发挥融合功能的关键因素。     

盘羊肺炎支原体感染PCR 检测方法的建立与初步应用

羊支原体性肺炎,是由支原体引起的一类高度接触性传染病,又称羊传染性胸膜肺炎(Infections pleuropneumonia of sheep and goats),临床症状主要表现为高热、咳嗽、消瘦、