一株两氨酸高产菌

<正> α-丙氨酸目前世界年产量约200吨,年增长率属于各类氨基酸之首,其生产有直接发酵法、天门冬氨酸脱羧酶法及丙酸合成法等,在直接发酵法中,我们曾用Arthrobac tec SP. AS1.8号菌从葡萄糖产生2.3%的丙氨酸,有报导用Brevi bacterium ge lat inosum菌可得到40%的产率。     

空肠弯曲菌增菌方法的研究与血清学分型

本文对空肠弯曲菌增菌培养基作了改进,以增菌法与直接分离法(直接法)对比进行实验。从379份腹泻成人粪便中分离出29株空肠弯曲菌,其中增菌法分离出29株(100%),直接法15株(51.72%)。增菌法提高检出率48.28%,P<0.001,两法差异非常显著,符合率为96.3%,说明增菌法优于直接法。另外,用烛缸培养法从鸡和猪粪便中分离出空肠弯曲菌分别为50和32株。对人、鸡和猪粪便中检出的110株菌作了血清学和生物学分型。从分出的15个血清型谱中发现不同来源菌株有共同性血清型,多集中于45型     

色氨酸发酵的研究

<正> L-色氨酸是人和动物体内必需氨基酸之一,在医药、食品和饲料添加方面有着广泛的用途。由于它在动植物蛋白中含量很低,从天然蛋白质中提取来源有限,而化学合成法又代价较高,因此用发酵法来生产L-色氨酸长期以来受到重视。目前主要有直接发酵法,前体发酵法和酶促转化法三种,据报导,1973年Snilo等人用B·subtilis FT~r直接发酵生产L色氨酸,产量达6.1克/升。1973年Nagino等人以及1974、1975年Nagino和NaRaymu等人成功地诱导各种     

生物技术法生产丙酮酸的研究进展

丙酮酸是一种重要的有机酸,广泛应用于制药、日化、农用化学品和食品等工业中。相对于化工法生产的丙酮酸而言,生物技术法生产的丙酮酸具有低成本、高质量等优势。生物技术法生产丙酮酸主要包括发酵法和酶法,前者又包括直接发酵法和休止细胞法。在对比各种生产方法的基础上,考虑到球拟酵母属的多重维生素营养缺陷型菌株是目前最具竞争力的丙酮酸生产菌,因此重点介绍了发酵法生产丙酮酸在菌种、发酵条件优化等方面的研究进展,并给出了生物技术法将来可能的发展方向。      

膜法提取L-丙氨酸工艺研究

本文研究针对发酵法生产的L-丙氨酸。首先将L-丙氨酸发酵液加热预处理,用陶瓷超滤膜除去发酵液中菌体、大分子蛋白等杂质得到超滤液,然后将超滤液经纳滤膜除去色素、小分子蛋白、无机盐得纳滤液,纳滤液再经过真空浓缩、结晶、离心、烘干、包装得到L-丙氨酸成品。L-丙氨酸离心母液返回至纳滤工序套用,最终总提取平均收率大于91%,产品质量符合日本味之素企业(AJI97)和中国企业(食品级)标准。     

L-天冬氨酸-α-脱羧酶高产菌株初筛方法的建立

通过试管法、平板法、Berthelot法和纸层析法对L-天冬氨酸-α-脱羧酶(PanD)高产菌株的初筛方法进行研究。分别检测转化体系中底物L-天冬氨酸减少引起的pH变化及产物CO2和β-丙氨酸的增加量,并用高效液相色谱法比较这四种方法的准确性。结果表明:CO2能溶于转化液,难以用倒置管收集完全;PanD系胞内酶,难以用平板点种法改变平板的pH;β-丙氨酸和L-天冬氨酸在Berthelot检测中吸收值均偏低,不适用于PanD高产菌的筛选;纸层析法可以直接检测β-丙氨酸和L-天冬氨酸,成本低,操作简单,具一定的精确度,可以较大规模地筛选PanD高产菌株。     

己酸菌和产酯酵母共固定产己酸乙酯的研究

用吸附包埋法将己酸菌和产酯酵母共固定在海藻酸钙棉纤维上,在帘式生物反应器中进行分批式发酵。最适ｐＨ为６.５,温度３０～３５℃。经过共固定１０批发酵,历时１００ｄ,凝胶的稳定性良好,己酸乙酯产量也稳定在１.９～２.３ｍｇ／ｍｌ之间,经对比试验证明,用共固定法合成己酸乙酯比游离细胞混菌发酵法产量提高约２２％。     

利用针叶树木屑栽培食用菌研究进展

针叶树与阔叶树一样是重要的森林资源,由于针叶树含有脂类物质,因此长期以来其木屑不能直接用于食用菌生产。水煮法、蒸馏法、碱处理法、发酵法和长期存放法可以不同程度降解和去除针叶树木屑中含有的脂类物质,其中碱处理法和蒸馏法在实际应用中有较好的效果,而发酵法是发展方向。在食用菌生产中,经去脂处理后的针叶树木屑在实际栽培配方中最高比例可达到70%～95%,再辅助总量为5%～30%的麦麸、玉米面、无机盐及白糖等。加上栽培配方以阔叶树和棉籽壳为主料的管理方法,已成功地栽培出基本上所有能人工栽培的木才腐生食用菌,并达到较佳的生物学效率。     

构建从葡萄糖直接发酵产生维生素C前体2-酮基-L-古龙酸的基因工程菌研究进展

构建从葡萄糖直接发酵产生维生素Ｃ前体２┐酮基┐Ｌ┐古龙酸的基因工程菌研究进展维生素Ｃ作为人体不可缺少的维生素和抗氧化剂在医药和食品工业上有重要用途,２－酮基－Ｌ－古龙酸（２－ＫＬＧ）是合成维生素Ｃ的重要前体,工业上大多采用“莱氏法”或“两步发酵法”生...     

番茄红素的生产工艺研究进展

综述了番茄红素的物理化学性质、生理功能,并对番茄红素的生产工艺,天然提取法和利用基因工程菌发酵法作了介绍。     

改良离心集菌法检测痰内抗酸杆菌的研究

目的研究改良离心集菌法,测定其是否能使抗酸杆菌的诊断更为安全简便。方法选取传统的抗酸杆菌直接涂片法1＋和1＋以下的阳性标本100例,用改良离心集菌法复检;再配制浓度为10000、5000、1000和100条／mL的痰菌液各100份,分别用直接涂片法和改良离心集菌法检测其检出限和检出率;最后以日常门诊标本1036例分别用两种方法进行临床应用检测和分析。结果100例直接涂片法1＋和1＋以下的阳性标本改为改良离心集菌法复检,结果为4＋有93例、3＋为7例;直接涂片法和改良集菌法的检出限分别为1000和100条／mL;10000、5000、1000和100条／mL的痰菌液用直接涂片法和改良离心集菌法检测其检出率分别为97％、53％、5％、0％和100％、100％、94％、7％。1036例日常标本用直接涂片法和改良集菌法检测的阳性率分别12．74％和16．47％。结论改良离心集菌法的阳性率高于直接涂片法,检出限低于直接涂片法,不但大大改善了实验室和实验人员生物安全,还弥补了直接涂片法中对结核杆菌在痰液中分布不均一性带来的漏检的方法局限性,因此改良离心集菌法是安全、简便的抗酸杆菌实验室值得推广使用的新诊断方法。     

恶臭假单胞菌丙氨酸消旋酶基因的克隆、序列分析及表达

从恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)200的基因组出发,用PCR方法克隆到两个独立作用的丙氨酸消旋酶基因,称之为dadX和alr。DadX编码357个氨基酸长的多肽,计算分子量为38.82kDa,alr编码409个氨基酸长的多肽,计算分子量为44.182kDa。序列分析显示,DadX的氨基酸序列与Pseudomonas putidaKT2440,铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和大肠杆菌(Escherichia coli)的DadX比较,相似性分别为96.64%、71.99%、44.88%和47.37%。Alr的氨基酸序列与Pseudomonas putidaKT2440比较,同源性为94.38%,而与铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)、鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)和大肠杆菌(E.coli)的Alr比较,同源性均较低,分别为22.89%、25.72%和26.44%。在P.putida200的DadX和Alr氨基酸序列中部发现有对于酶活性至关重要的保守区域,如磷酸吡哆醛(PLP)结合位点。DadX和alr在大肠杆菌中得到表达,DadX丙氨酸消旋酶只对丙氨酸有消旋作用,而Alr丙氨酸消旋酶可以作用于丙氨酸和丝氨酸两种底物,且对丝氨酸特异性更高。Alr的表达不依赖于外源启动子,说明在其结构基因上游存在启动子结构。     

游离细胞法与固定化细胞法生产L-丙氨酸的比较

游离细胞法与固定化细胞法生产Ｌ－丙氨酸的比较徐虹王雪根范伟平欧阳平凯（南京化工大学生物工程与科学系,南京２１０００９）摘要利用假单胞菌的Ｌ－天冬氨酸－β－脱羧酶从Ｌ－天冬氨酸生产Ｌ－丙氨酸,具体方法有两种,一种为游离细胞法,另一种为固定化细胞法。本文...     

我国氨基酸产业发展为何缓慢

国内概况 天然氨基酸及其衍生物共20多种。主要用于食品:助鲜、医药、饲料。我国于1965年开始用自己选育的谷氨酸产生菌发酵生产谷氨酸(味精原料),比国际上晚8年。目前能用多种方法生产16种氨基酸,其中发酵法和酶转化法生产的12种。     

力复霉素产生菌地中海拟无枝菌酸菌U32丙氨酸脱氢酶基因克隆及表达

丙氨酸脱氢酶(EC1411)可逆催化丙氨酸脱氨生成丙酮酸和NADH。它是生物体内的氨基酸代谢和氨同化途径的关键酶。在地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)U32中,丙氨酸脱氢酶的活力与力复霉素的生物合成有负相关现象,其活力受KNO3全局效应的调控。根据结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)和天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)的丙氨酸脱氢酶氨基酸的保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好,设计一对简并PCR引物。以此引物从地中海拟无枝菌酸菌U32中扩增到一555bp的片段,并以此片段为探针从地中海拟无枝菌酸菌U32 基因组cosmid文库中成功的克隆到了丙氨酸脱氢酶结构基因(ald)。它编码了一个371个氨基酸的蛋白质,基因的GC含量为72.5％,符合链霉菌的基因结构特征。在起始密码子的上游6个碱基处,有一典型的链霉菌核糖体结合位点(RBS)：AGGAGG,第75位的氨基酸为赖氨酸,是丙酮酸结合位点。以pET28b为载体,在E.coli BL21(DE3)中高效表达了ald基因。用IPTG在22℃时诱导得到的丙氨酸脱氢酶活力最高。用HisTag柱纯化了表达的丙氨酸脱氢酶。酶学性质研究表明该酶专一性以LAla和NAD(H)为底物。     

木质纤维生产燃料乙醇工艺的研究进展

利用丰富而廉价的木质纤维原料代替粮食生产燃料乙醇,对经济和社会的可持续发展有着重要的意义。以木质纤维为原料发酵生产燃料乙醇可分为4种工艺:分步糖水解化发酵法、同步糖化发酵法、同步糖化共发酵法和直接微生物转化法。介绍了以上4种工艺的研究进展,并对今后进一步研究提出了建议。     

拟康氏木霉N_2-78产纤维素酶摇瓶发酵的研究

在拟康氏木霉N_2-78产纤维素酶固体发酵法的基础上,我们于1975—1976年开展了用该菌产纤维素酶液体发酵的研究工作。现将研究结果简报如下:     

幽门螺杆菌全菌蛋白电泳影响因素的研究

本文比较研究了用反复冻融法及用含十二烷基磺酸衲(SDS)和β-巯基乙醇的样品缓冲液直接破碎法处理幽门螺旋菌对全菌蛋白电泳结果的影响,并观察了两种方法处理后的菌体裂解情况。实验表明,反复冻融法破碎细菌不够彻底,经离心后有较多的膜性结构被清除,引起膜性结构与胞浆内成份不均匀损失,对全菌蛋白电泳条带(特别是某些条带的含量)有明显的影响。提示在作细菌全菌蛋白电泳,特别是用于进行定量分析时,不宜采用冻融法处理细菌,可考虑用样品缓冲液直接破碎细菌。超声波破碎及压力破碎法是否存在对电泳结果的类似影响有待进一步研究。     

离子束诱变木聚糖酶产生菌(Aspergillus niger A3)筛选方法的比较研究

木聚糖酶产生菌株的初筛方法主要分为平板法和液体发酵法。它们都有一定的优点和不足。找出适宜于离子束诱变育种的初筛方法,是必要而且是必须的。本文就木聚糖酶产生菌的几种初筛方法做了比较研究,以便找出适宜于离子束诱变高产木聚糖酶菌株育种的初筛方法。     

生物技术生产生物可降解塑料PHB的研究进展

本文综述了ＰＨＢ的合成和降解途径及其关键酶的基因克隆,比较了细菌发酵法及遗传吃力菌生产ＰＨＢ的优缺点并讨论了发酵法生产及ＰＨＡｓ的前景。随着近年来植物基因工程的发展,用植物大规模生产生物可降解塑料已成为可能,但然后存在许多障碍,本文进一步探讨了转基因植物生产ＰＨＢ的限制因素和克服方法。