衣康酸生产菌种的定向选育和产酸条件的研究*

通过紫外线 高温复合诱变处理衣康酸生产菌株土曲霉AspergillusterreusAs 3 2 81 1 ,用以琥珀酸为唯一碳源的选择性平板定向筛选高产菌株 ,获得产酸率较其亲株提高了 5倍以上的突变株。用正交试验的方法对突变株的适宜产酸条件进行了研究 ,通过分批补糖发酵可提高其产酸率高达 39 92 %。     

离子束注入对衣康酸生产菌种的改良

用10keV、剂量5.2×10~(14)～5.2×10~(15)ions/cm~2的氮离子注入衣康酸生产菌株土曲霉A9003,在2％LiCl抗性平板筛选到一株能在39℃发酵的衣康酸高产菌株。该菌株在30L发酵罐发酵产酸7.5％,转化率60.1％,发酵周期50h。     

定向选育衣康酸高产菌株的研究

以衣康酸生产菌土曲霉Ａ９００２为出发菌株,经紫外线及亚硝基胍复合诱变后再行定向选育,即在以衣康酸为唯一碳源的培养基中富集不能同化衣康酸的菌种,将将它们涂布在含乌头酸酶抑制剂（单氟醋酸）的高糖、高衣康酸平板培养基上,最后从中而筛选出一支衣康酸氧化酶弱,乌头酸酶活强,并耐自身代谢产物的高产突变株Ａ９００３。此菌株在摇瓶培养７２ｈ后,产酸为９．２％,转化率为５８．１％,在１００ｍ＾３发酵罐生产性试验中,     

衣康酸高温高产菌株的选育

以生产使用菌种土曲霉NLYT234为出发菌株,经紫外线、高温、氯化锂诱变处理和多次分离、筛选获得一支性能稳定的衣康酸高产突变株土曲霉NLYT-2-801,在含淀粉糖140g/L的培养基上40℃～43℃摇瓶72h,衣康酸产量92.1g/L,糖酸转化率63.18%～67.83%.经300m3发酵罐生产验证,诱变后菌种的酸度和糖酸转化率分别比以前提高了31.1%和6%.     

产海因酶的菌种筛选和产酶条件的研究

利用5-苄海因作为唯一氮源法筛选高产海因酶的菌种,从本实验室保存的221株菌种中筛选出12株具有不对称水解5-苄海因生成N-氨甲酰基-苯丙氨酸的菌株,其中假单胞菌（Pseudomonassp.)X4-49具有较高的产酶活力,对此菌的产酶条件的研究表明,产酶的最佳碳源为甘油,最佳氮源为蛋白胨,最佳诱导物为苄海因,尿嘧啶,苄海因作为诱导物的有效浓度为0.2%,产酶的最适培养基的初始pH为7.0。培养条件为33℃,13h。     

L-谷氨酰胺高产菌株的定向选育及产胺条件的研究

谷氨酞胺(Gln)是L—谷氨酸γ—羧基酞胺化的一种氨基酸,其结构式为NH2OC—CH2－CH2－CH2COOH。它具有许多特殊的功能,科学家将其归类为条件必需氨基酸。当肌体生病时应补充更多的谷氨酞胺。尤其在治疗胃溃疡、十二指肠溃疡上有独特的疗效,也是一种很有发展前途的新药。但长期以来,药用谷氨酞胺一直处于紧缺状态,一方面由于难以找到高产且性能稳定的生产菌株,另一方面几乎都是在放大试验上遇到了困难^[1,2]。     

产纤维素酶菌种TP1202的选育及产酶条件研究

从腐木上分离到1株纤维素酶活较高的野生纤维素酶产生菌TP01,经鉴定为绿色木霉（Trichoderma viride)。以TP01为出发菌株,经紫外线、亚硝基胍、硫酸二乙酯和LiCl等物理化学诱变处理,最后得到1株高产突变株TP1202。通过对培养基中氮源、碳源、培养温度、培养时间、培养基的含水量、培养基的起始pH、培养基中葡萄糖含量的研究,测定Trichoderma viride TP1202纤维素酶的CMC和滤纸酶活,找到了产纤维素酶的较佳条件,即,稻草粉：麦麸=4：1,物料：水份=1:0.75-1,以（NH4）2SO4或NH4Cl为氮源,葡萄糖含量为1%-2%,起始pH为7.5,在30℃下培养96-120h左右,其酶活力为最高,每克干曲CMC酶和滤纸酶活分别达到28900U、604U,是出发菌株的3倍和6倍。     

以淀粉为碳源衣康酸高产菌株的筛选

对土曲霉出发菌株进行紫外线诱变、LiCl诱变以及代谢终产物抗性菌株选育。代谢终产物抗性菌株选育是一种有效的遗传育种方法,能显著提高产酸量。得到一株代号为At394的菌株,以玉米淀粉部分水解糖为碳源,产酸量为53.9g/L,比出发菌株提高了42.6%。糖酸转化率为61.5%,为所有筛选菌株最高。用红外光谱进行结构分析证实所得产物为衣康酸。     

衣康酸产生菌的分离和选育

本文叙述了从土壤分离衣康酸产生菌的过程和方法,使用Co60与UV-高温复合处理土曲霉野生菌株,获得一些突变体(Mo.82-r17、No．25一13B、No．25—23B and No．25-24B),用正交试验确定较佳培养基组成,在37℃下摇瓶培养No．82一r17,培养液积累衣康酸3．5g／100ml,对供给糖转化率35％,从培养液回收衣康酸与标准衣康酸进行红外光谱测定,比较两者吸收曲线,确证它是衣康酸。     

二十碳五烯酸的菌种选育及发酵条件

利用含亚麻子油的斜面培养基连续传工和逐渐降低培养温度,诱导筛选的方法,从大量丝状真菌中选育到一株产二十碳五烯酸（ａｌｌ－ｃｉｓ－５、８、１１、１４、１７－ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）较高的被孢霉菌（Ｍｏｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ．）ＳＭ４８１。研究得到最适培养基及最适培养条件。在最适培养及产二十碳五烯酸条件下,细胞干重和二十碳五烯酸产量分别为２８．８ｇ／Ｌ和０．１２７ｇ／Ｌ。     

衣康酸高产菌株的选育及发酵工艺研究

用多种诱变法对衣康酸产生菌原始菌株进行诱变,得到高产菌株16株,采用“正交试验-中心试验-正交试验”的策略优化培养基,对影响衣康酸生产的原料、水质等进行了研究。所得高产菌株生产适应性强,产酸水平为65g/100ml,残还原糖小于01g/100ml,摇床发酵周期小于96h,500L发酵罐发酵周期小于70h。     

曲酸菌选育及发酵工艺研究

筛选获得产曲酸菌株米曲霉（Aspergillusoryzae）MSA进行⁶⁰Co诱变,并进行了发酵工艺条件研究,以葡萄糖为碳源、豆饼粉为氮源,在pH3.0、33℃摇瓶培养,可达到5d产酸5％以上水平。发酵液采用直接浓缩结晶工艺,脱色与重结晶后获得无色针状晶体,红外图谱检测确证为曲酸。     

用原生质体融合技术选育2—酮基—L—古龙酸高产菌株的研究

对革兰氏阳性的地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）Ｈ１９和革兰氏阴性的２－酮基－Ｌ－古龙酸产生菌Ｓ１９的原生质体的制备条件进行了研究,并采用聚乙二醇作诱导剂进行了两菌株的原生质体融合,用链霉素作为抗性标记对融合子进行了选择。从１７株产生２－酮基－Ｌ－古龙酸的融合子中选出了一株连续传代八次产酸高且产量稳定的融合子１５号。融合子１５号具有两个亲本菌株所具有的一些特性。     

CN—92植酸酶产生菌的诱变选育及产酶条件的研究

以无花果曲霉IFFI2227为出发菌株,通过NTGT和Co60复合诱变处理,获得5株产植酸酶活力比出发菌株高2．1～2．5倍的高产菌株。其中1株CN－92菌产酶性能稳定,研究了该菌株的最适产酶条件：培养温度30℃,培养基起始pH6．0培养时间72h。适宜于该菌株产植酸酶的优良固体培养基组成为：麸皮、豆饼粉、硫酸铵及少量无机磷,培养基含水率51％。葡萄糖、乳糖和MH4Cl、NH4NO3等不同程度地抑制植酸酶的合成,微量元素如Mn,Zn,Cu等对产酶无促进作用。     

产多聚唾液酸的菌种筛选及产酸条件

通过对40株大肠杆菌进行产多聚唾液酸的筛选,得到一株高产多聚唾液酸菌株C-8,对该菌的一系列培养条件进行了研究。最佳培养基为：山梨醇2.5％,硫酸铵0.5％,磷酸氢二钾90mmol／L,胰蛋白陈1.5％,硫酸镁0.04％,pH7．8。在37℃,250r／min摇床培养65h,可使菌体在每毫升培养液中产多聚唾液酸1200μg。     

柠檬酸产生菌黑曲霉诱变选育的研究

本文以分离到的一株黑曲霉Aspergillus nigerwl-1为出发苗株,采用硫酸二乙酯(DES)、亚硝基胍(NTG)等化学绣变剂处理。选育出一株产柠檬酸较高的变异株A.niger WZ—12,柠檬酸产率由2.9％提高到7.6％,对糖的转化率为63.3％,且不生成其它有机杂酸。     

L-苹果酸产生菌筛选及高产突变株诱变选育

通过广泛收集和分离,获得根霉属(Rhizopus)、曲霉属(Aspergillus)及裂褶菌属(Schizophyllum)等属菌株897株。产酸指示平板上的变色圈测定结果表明,它们中间628株为产酸菌。通过纸层析对产酸菌发酵液酸谱的分析,获得129株L-苹果酸产生菌,经进一步测定发酵液中L-苹果酸的含量,筛选出以葡萄糖为原料,摇瓶发酵140小时,L-苹果酸产率48．37g／L,对糖转化率48．37×10^-2 的菌株LMO2。经初步鉴定,这一菌株为曲霉(Asper-gillus sp.)以LM02作为出发株,采用亚硝基胍、自然污染细菌、甲基磺酸乙酯及紫外线进行诱变处理,选育出葡萄糖为原料,L-苹果酸产率较高的突变抹N1-14、N1-14、NE1412、NU1416及NU1419。其中N1-14 的L-苹果酸产量最高,比出发株提高46．2×10^-2。N1-14 的菌丝生长速度快,产孢能力强,摇瓶发酵葡萄糖140小时,平均L-苹果酸产率为72．53g／L,对糖转化率53．74×10^-2。全发酵液经薄层层析测定,不含黄曲霉毒素。发酵产物分离提纯后,得到白色粉末状结晶,经纸层析、质谱及红外光谱测定,证明为L-苹果酸。     

产羧肽酶菌株的筛选及其产酶特性的研究*

从土壤中分离到28株产蛋白酶菌株,用其粗酶液水解多肽并经氨基酸自动分析仪测定产物中游离氨基酸的含量和种类,从中筛选到一株产羧肽酶的菌株。对该菌株的菌落和菌体形态进行观察,确定其属于曲霉菌属。该菌株在发酵至第48h时,发酵液中羧肽酶活性达到最大。此时发酵液pH值为7.46,菌体已处于衰败期,说明该酶的合成方式为延迟合成型。     

二十碳五烯酸的菌种选育及发酵条件

利用含亚麻子油的斜面培养基连续传代和逐渐降低培养温度,诱导筛选的方法,从大量丝状真菌中选育到一株产二十碳五烯酸（all－cis－5、8、11、14、17－eicosopnthenoicacid）较高的被孢霉菌（Motierellasp．）SM481。研究得到最适培养基及最适培养条件。在最适培养及产二十碳五烯酸条件下,细胞干重和二十碳五烯酸产量分别为28．8g／L和0.127g／L。     

梧宁霉素产生菌诱变选育的研究

以不吸水链霉菌（Ｓｉｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｈｙｇｒｏｓｅｌｃｎｓ）ＮＳ—２３为出发菌株。菌种斜面孢子萌动后采用紫外线（ＵＶ）、硫酸二乙酯（ＤＥＳ）、秋水仙素及加底物等物理化学因子进行诱变处理,经两代连续处理,从ＵＶ、ＤＥＳ的复合处理中选育出一株产素较高的突变株ＵＤＡ２５７－Ｃ－２４,产素效价比出发菌株提高了２９１．７２％