枇杷茎尖二步玻璃化法超低温保存的研究

超低温保存是目前植物种质资源长期稳定保存最理想的方法,而近几年发展的玻璃化超低温保存法具有设备要求简单、材料处理步骤简便及效果和重演性好等特点,倍受人们的青睐。国内外用玻璃化法成功地保存许多果树的种质资源。在对枇杷（Eriobotrya japonica Lindl．）花粉超低温保存取得成功的基础上,作者进行了枇杷茎尖玻璃化超低温保存的研究,以期建立枇杷茎尖超低温保存体系,为长期稳定保存枇杷种质资源提供技术支持。     

菊花茎尖的玻璃化超低温保存研究

本文建立了适合中国菊花种质资源长期保存的玻璃化超低温保存技术体系.在4℃下,把1～2mm的菊花茎尖放在含0.4mol/L蔗糖的MS培养基上暗培养2～3d,用预处理液在25℃下处理30min,再用玻璃化试剂PVS2在冰浴条件下处理15min,换新鲜的PVS2试剂并迅速投入液氮.液氮保存24h后,40℃水浴解冻2min,用含蔗糖1.2mol/L的MS液体培养基洗涤20min,滤纸吸干后接种到恢复培养基中,在25℃条件下弱光培养1～3d转入正常光照培养条件下培养,2周后成活率可达86%以上,成活的茎尖均可再生.     

红花石蒜茎尖的玻璃化超低温保存

2～3mm的石蒜茎尖放在MS+0.4mol·L-1蔗糖的培养基上预培养5d,在25℃下用预处理液处理20min,接着用冰浴的玻璃化保护剂PVS2在冰浴中处理80min后,换新鲜PVS2并迅速投入液氮。液氮保存24h后,于40℃水浴中快速解冻2min,用MS+1.2mol·L-1蔗糖的液体培养基洗涤20min,滤纸吸干后接种到恢复培养基中,在25℃下暗培养7d后,转入光照强度为36μmol·m-2·s-1和光暗周期12/12h条件下培养。2周后的成活率最高可达90%,植株再生率达53%。     

切花百合离体茎尖玻璃化法超低温保存研究

以切花百合西伯利亚试管苗离体茎尖为试材,通过正交设计试验对预培养培养基中蔗糖浓度、预培养时间和PVS2处理时间等影响超低温保存存活率的主要因素进行了分析,初步建立了切花百合种质玻璃化法超低温保存的技术方案。通过形态观察、可溶性蛋白和同工酶检测,冻存前后材料的遗传稳定性没有发生改变,表明该方法对切花百合的种质保存具有较强的实用意义。     

扶芳藤茎尖的玻璃化法超低温保存及其植株再生

扶芳藤属卫矛科卫矛属常绿藤本灌木,我国拥有丰富的扶芳藤资源,目前已经引起了专家学者的注意,扶芳藤的资源和变异研究(潘青华等2004)、叶片粗蛋白和氨基酸成分分析(潘青华等     

玻璃化法超低温保存蛇莓茎尖

本文采用玻璃化法对蛇莓离体茎尖超低温保存进行了初步探讨。研究了低温锻炼时间、预培养时间、预处理时间、玻璃化液处理时间和液氮保存时间对超低温保存后成活率的影响。经优化,蛇莓的最高成活率可达（42.00±2.74）%。     

香蕉离体茎尖超低温保存研究

以香蕉(Musaspp.)试管苗为试材,对其离体茎尖小滴玻璃化法超低温保存的影响因素进行了研究。小滴玻璃化法和玻璃化法超低温保存后再生率的差异表明,香蕉更适合用小滴玻璃化法进行超低温保存。香蕉小滴玻璃化法超低温保存的方案如下:试管苗在60g/L蔗糖的MS培养基上培养1~2个月,剥离带有1~2片叶原基的茎尖,室温下装载30m in(可延长至4h),0℃下PVS2处理40~50m in。6个基因型的14个品种的再生率平均为46.9%。通过SSR分子标记检测,再生植株的遗传稳定性没有发生改变。该结果为香蕉种质资源的长期保存提供了理论依据和技术支撑。     

小酸浆(Physalis minima L.)茎尖的玻璃化法超低温保存

用玻璃化法超低温保存小酸浆茎尖的结果表明,1 cm的小酸浆茎段放在改良MS培养基上室温预培养3 d后.切取2mm长的茎尖放在0℃条件下用100%PVS2溶液中处理70min.快速投入液氮保存,1 d后取出.于40℃恒温水浴中化冻2～3min后用含1.2mol·L-1蔗糖的改良MS培养液洗涤30min,接种于再生培养基上暗培养7d再转接至正常光照35μmol·m-2·s-1条件下,成活率可达36.0%,再生植株生长正常.     

怀山药种质资源的包埋玻璃化超低温保存与植株再生

通过对怀山药（Dioscorea opposita）种质资源的包埋玻璃化超低温保存与植株再生进行研究,结果表明：将低温下锻炼7天的怀山药试管苗带芽茎段放入预培养基中,低温下培养3天,然后在室温下用3%的海藻酸钠和0.5mol·L-1CaCl2包埋,包埋珠用MS＋0.2mol·L-1蔗糖＋2mol·L-1甘油＋50g·L-1二甲基亚砜在0°C下装载60分钟,用30%甘油＋15%乙二醇＋10%二甲基亚砜＋15%聚乙二醇＋0.4mol·L-1蔗糖在0°C下脱水60分钟,迅速投入液氮,24小时后立即用40°C水浴快速化冻,再用MS＋0.5mol·L-1蔗糖溶液洗涤2次,转入再生培养基中培养,可获得再生植株。再生植株成活率因基因型而异,铁棍山药、太谷山药、怀庆1号山药和B号山药的成活率分别为64.29%、49.21%、13.11%和39.81%。     

大麦幼穗的玻璃化法超低温保存及冻后植株再生

大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）幼穗经添加０．５ ｍ ｏｌ／Ｌ蔗糖的２ ｄ 预培养,用玻璃化保护剂ＰＶＳ２ 冰浴处理５ ｍ ｉｎ,直接投入液氮贮存;快速化冻,洗去保护剂后恢复培养,三个品种“８１Ｇ１”、“戈贝纳”和“旭９”的存活率分别为１００％ 、８２．５％ 和５０％ 。存活的幼穗能形成愈伤组织并再生植株。不经预培养,几个品种的幼穗均不能存活。存活率低的品种,其抗脱水力和抗冻力均较差。和传统的二步冷冻法相比,玻璃化法具有存活率高、恢复生长的迟滞期短和材料完整存活等优点     

野葛高频植株再生体系相关因子的优化

对野葛高频植株再生体系相关因子进行优化,结果表明,野葛带芽茎段再生体系的最佳消毒方式为70%酒精处理30s后用0.1% HgCl₂处理15min;最佳培养基为MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 5.0mg/L;最佳培养条件为:蔗糖浓度30g/L,pH 6.0,液体培养,培养温度25℃,光照培养。     

野葛叶片和茎段高频再生体系的建立

探讨几种因子对野葛叶片和茎段高频再生体系建立的影响。采用植物组织培养、正交实验和单因子实验的方法。野葛叶片和茎段的最佳消毒方式为70%酒精处理30 s后再用0.1%HgCl₂处理15 min;野葛叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+NAA 1.0 mg·L^-1+2,4-D 2 mg·L^-1,野葛茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg·L^-1+6-BA 1.0 mg·L^-1+2,4-D 2 mg·L^-1;暗培养更有利于野葛愈伤组织的诱导;野葛叶片和茎段愈伤组织诱导的最佳蔗糖浓度均为30 g·L^-1;野葛叶片愈伤组织的最佳出芽培养基为MS+NAA 1.0 mg·L^-1+6-BA 3.0 mg·L^-1,而野葛茎段愈伤组织的最佳出芽培养基为MS+ NAA 0.5 mg·L^-1+KT 2 mg·L^-1;光照培养更有利于野葛叶片和茎段愈伤组织芽的再分化;野葛叶片愈伤组织再生芽生根的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg·L^-1+PP₃₃₃ 0.5 mg·L^-1,而野葛茎段愈伤组织再生芽生根的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg·L^-1+PP₃₃₃ 3.0 mg·L^-1;野葛叶片和茎段愈伤组织再生芽生根的最佳蔗糖浓度均为30 g·L^-1;叶片再生苗移栽的最佳PP₃₃₃浓度为1.0 mg·L^-1,茎段再生苗移栽的最佳PP₃₃₃浓度为3.0 mg·L^-1;叶片和茎段再生苗的最佳移栽基质均为蛭石:珍珠岩（2:1）。     

植物种质的玻璃化超低温保存

植物种质的玻璃化超低温保存技术已受到广泛重视。玻璃化法主要由装载、玻璃化保护液脱水、降温、复温、洗涤这5个环节构成。目前已对百余种植物进行过玻璃化冻存研究,但主要应用于高等植物,而用该法保存藻类获得成功的报道很少。将玻璃化法用于某些藻类种质的冻存将会有广阔的应用前景。     

野葛离体培养进展及潜在应用价值

综述了野葛离体培养的研究进展及其利用离体培养进行植物次生代谢物——异黄酮的提取.     

野葛花中葛花苷的测定方法研究

在硅胶G薄层色谱板上,建立了双波长薄层扫描法测定野葛花中葛花苷的分析方法。薄层分析的展开剂为三氯甲烷一甲醇一冰醋酸(3：1：0．3)．葛花苷在0．484～3．872μg范围内呈良好线性。该方法快速、简便,为野葛花作为中药质量控制提供科学依据。     

野葛毛状根离体培养与异黄酮生产

用发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）R1601菌株感染野葛（Pueraria lobata(Willd.)Ohwi）叶片外植体后获得的毛状根,经连续4次继代培养,鲜重增加到最初的6.2倍。PH为5.5的1/2SH液体培养基较适合野葛毛状根的生长。与自然根相比,毛状根在无激素的1/2SH液体培养基中离体培养20d后,鲜重增加22.6倍,释放入培养液中的异黄酮量增加10.6倍。毛状根生产异黄酮的量略高于自然根,且根中含量明显高于愈伤组织及茎中异黄酮的含量。培养液体积影响毛状根的离体生长及异黄酮的释放。     

野葛地下器官的解剖学研究

野葛（Ｐｕｅｒａｒｉ９ａ ｌｏｂａｔａ（ｗｉｌｌｄ．）Ｏｈｗｉ．）的地下器官包括初生根、块根、不定根和根状茎４部分。初生根为四原型,内皮层明显,可见到凯氏带。块根的次生木质部发达,民管周转存在额外形成层。成熟块根中积累丰富的淀粉。不定根为三原型,具次生结构。根状茎作为营养繁殖器官,产生不定根,其中不定根可发展成蓼根。无论初生根、收缩不定根或根状茎的细胞中均示发现淀粉积累,这可能与贮藏器官块根的发达     

大苞鞘石斛原球茎玻璃化超低温保存技术的研究

本文研究建立了大苞鞘石斛(Dendrobium wardianum Warner)原球茎玻璃化法超低温保存的技术体系。结果发现,预处理和玻璃化溶液(plant vitrification solution 2,PVS2)装载脱水是影响大苞鞘石斛原球茎相对存活率的两个关键步骤,高渗与低温-高渗两种预处理方法测定的相对存活率具有显著性差异;玻璃化溶液的种类以及脱水时间对冻后存活率具有重要的影响。基于此,建立了大苞鞘石斛原球茎的超低温保存体系,即:以继代培养60 d的大苞鞘石斛原球茎为材料,1/2MS+0.8 mol/L蔗糖的培养基上4℃低温预处理6 d后,转至1/2 MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖的装载液中室温下装载40 min,在0℃下装载PVS2脱水40 min,然后转入装有新鲜PVS2冷冻管中并迅速投入液氮。在液氮保存1 h后放在40℃水浴中快速解冻1 min,利用含1.2 mol/L蔗糖的1/2MS培养液洗涤3次,每次间隔10 min;待恢复培养30 d后统计存活率,可使大苞鞘石斛原球茎超低温保存后存活率达到20.0%。     

野葛块根脱分化与再分化相关因子研究

采用正交试验、单因子试验和植物组织培养方法,探讨几种因子对野葛块根组织脱分化与再分化的影响。结果表明,野葛块根愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L,暗培养更有利于愈伤组织的诱导;野葛块根愈伤组织的最佳出芽培养基为MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 3.0mg/L或MS+NAA 0.5mg/L+KT 2.0mg/L,光照培养更有利于愈伤组织芽的再分化;野葛块根愈伤组织再生芽生根最佳培养基为MS+NAA 0.5mg/L+PP₃₃₃ 3.0mg/L+蔗糖30g/L;PP₃₃₃ 3.0mg/L和蛭石:珍珠岩(2:1)基质能显著提高再生苗的移栽成活率。