应用~(35)硫对 NaHSO_3-穿心莲内酯代谢的研究

本文是用放射性同位素~(35)硫标记NaHSO_3-穿心莲内酯做动物实验.以阐明NaHSO_3(~(35)S)-穿心莲内酯在体内的代谢过程。动物实验是用NaHSO_3(~(35)S)-穿心莲内酯注入大白鼠。实验用的药物是用NaHSO_3(~(35)S)溶液用加成反应标记于穿心莲内酯的第12位碳上。标记率达92%。标记化合物的性能和浓度与治疗用商品注射针剂NaHSO_3-穿心莲内酯相同。大小便标本是注射后连续按一定间隔时间取出的,组织标本是按一定间隔时杀死的动物身上取出的。标本的放射性是用液体闪烁计数器测量的。标记化合物在大白鼠的体内代谢表明,NaHSO_3(~(35)S)-穿心莲内酯进入体内后,在中枢神经系统中主要选择性地蓄积于脊髓中,并且呈下行性蓄积,可因此导致肌紧张度减低和外周血管扩张,引起体温下降。在脏器中此药较明显地蓄积于十二指肠、直肠,这是临床采用此药治疗肠炎和菌痢的有力依据。实验也指出,此药在体内迅速吸收,迅速排泄,72小时内在尿粪中总排除量达86.2%,建议临床酌情增加剂量或次数。NaHSO_3(~(35)S)-穿心莲内酯大多在尿中主要以原形排出,从而考虑对泌尿系统感染可能有一定疗效。     

人红细胞膜带3蛋白重组人脂质体及其~(35)SO_4~(2-)运输活性

用Triton X-100选择性抽提法,部分提纯了人红细胞膜带3蛋白。在除去去污剂后,带3蛋白被插入由磷脂酰胆碱/胆固醇组成的脂质体中。研究表明,用0.05％Triton抽提膜能除去大部分唾液酸糖蛋白,不会损失太多的带3蛋白。再用0.5％Triton抽提,可增溶出大量带3蛋白和少量其它膜蛋白。把它重组入脂质体后,在最后超离心步骤中得到了小的单层囊泡和大的多层囊泡。本文研究了单层重组囊泡输入~(35)SO_4~(2-)的功能,并和那些由人红细胞“发芽”得到的天然囊泡输入~(35)SO_肋~(2-)的功能作了比较。     

σ~(38)识别的启动子-35区核酸序列特征研究

依据部分资料假定大肠杆菌ＲＮＡ聚合酶的σ３８亚单位在特异启动子的－３５区识别的保守序列是－ＴＣＴＣＣＣ－,合成用其它碱基分别取代这一区域每一个碱基的引物,以ｏｓｍＹ基因片段为模板,通过ＰＣＲ扩增成－３５区含不同碱基序列的转录模板,用体外重组的由σ３８和核心酶（Ｅ）组成的全酶（Ｅσ３８）对这些启动子进行体外转录．结果显示含－ＴＣＴＣＣＣ－序列的启动子的转录水平既低于原始的ｏｓｍＹ启动子,又低于经ＰＣＲ扩增的其它序列．综合研究结果推测,这一区域的保守序列是－ＴＣＴＣＴＣ－．     

穿心莲内酯对大鼠心肌肥厚的影响

研究穿心莲内酯(AP)对由腹主动脉缩窄所致大鼠心肌肥厚的抑制作用。采用腹主动脉缩窄法制备大鼠心肌肥厚模型,10天后开始每天一次的AP0.5,1.0,2.0g/kg给药,共10周。测定心脏质量指数(HMI)、左心室质量指数(LVMI);检测血清及心肌组织的乳酸脱氢酶(LDH)和左心室心肌组织乳酸(LAC)、游离脂肪酸(FFA)含量。同假手术组相比,心肌肥厚模型组大鼠心肌组织LDH明显降低,其他指标明显升高;AP低中高给药组中,中、高剂量组各个指标明显改善。AP对心肌肥厚具有较好抑制作用,其具体原因可能与调节心肌细胞产能机制有关。     

模型系统(HONH_3HOH)~(-1)中的质子传递研究

本文提出了一个包含两个氢键涉及单质子和双质子传递的简化模型系统(HONH_3HOH)~(-1),并用MINDO/3方法研究了质子传递过程,得到了有关两质子传递的势能面,其每一步都选择性地进行了几何优化.单质子传递的两个势阱是不对称的,它的位垒随着氢键变长而急剧增高.α质子的转移导致体系电荷的不均匀堆积,因此其位阻较大,通过β质子传递可大大降低它的位垒,在这种意义上双质子传递比单质子传递更可能.最后讨论了它和丝氨酸蛋白酶体系催化机理的关系.     

TYRO3~(-/-)AXL~(-/-)MER~(-/-)小鼠骨髓细胞mRNA的差异表达谱

TYRO3、AXL和MER受体是受体酪氨酸激酶亚家族之一,广泛地表达在哺乳动物神经、免疫、生殖、血液等系统多种细胞中,促进细胞存活、增殖和分化。本研究利用基因芯片技术筛选基因敲除的TYRO3~(~(-/-))AXL~(-/-)MER~(-/-)小鼠骨髓细胞中差异性表达的m RNA,并进行生物信息学分析。与正常小鼠骨髓细胞相比,TYRO3~(-/-)AXL~(-/-)MER~(-/-)小鼠骨髓细胞中差异表达基因探针共1 363条,其中表达上调的基因探针499条、下调的基因探针864条。GO功能富集分析发现上调的基因主要参与免疫反应,下调的基因主要参与造血。KEGG Pathway富集分析发现上调的基因主要参与细胞粘附分子和抗原呈递等信号通路。Real-time PCR验证5个差异基因,与芯片中表达变化趋势一致。因此TYRO3、AXL和MER受体共同参与调控机体的免疫反应和血细胞分化。     

Bacillus megaterium WZ009催化合成(R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯和(S)-3-羟基-γ-丁内酯

以外消旋4-氯-3-羟基丁酸乙酯为唯一C源的富集培养筛选得到一株菌株WZ009,经16S rDNA测序鉴定为巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)。B.megaterium WZ009静息细胞可以立体选择性催化(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯水解和脱氯反应得到光学纯的(R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯(e.e.≥99%)和(S)-3-羟基-γ-丁内酯(e.e.≥95%)。笔者对B.megaterium WZ009不对称催化反应影响因素(温度、pH、中和剂、底物浓度、时间进程以及细胞重复利用)进行优化研究,确定了该反应体系最优条件:底物浓度200 mmol/L,中和剂氨水,pH 7.2,40℃反应12 h,转化率达到50.6%,底物对映体过量值为99.6%。该生物催化合成(R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯和(S)-3-羟基-γ-丁内酯过程具有良好的工业化应用前景。     

山羊胎儿肝脏3β-羟基甾体脱氢酶/△~4-△~5异构酶(3β-HSD)cDNA的克隆(英文)

3β-羟基甾体脱氢酶/△~4-△~5 异构酶(3β-HSD)是哺乳动物体内广泛存在的一类参与甾体激素代谢的氧化还原酶, 且具有异构酶活性。3β-HSD 催化3β-羟基甾体的脱氢及随后的△~5-3-甾酮产物的异构化反应, 以产生α, β-非饱和酮, 3β-HSD 在甾体激素代谢中起着重要作用。本文以胎羊肝为材料, 首次获得了山羊胎肝的3β-HSD 的cDNA, 并进行了3β-HSD在肝脏组织的表达分析。参照牛、啮齿类的3β-HSD cDNA的高同源区设计引物。 以2～3月雌性胎羊肝脏mRNA为模板, 经RT-PCR获得416 bp cDNA片段 (Fig.1), 然后以其为探针筛选胎羊肝λgt 10 cDNA文库 最后获得3'-端缺失的3β-HSD cDNA 克隆,并推导了其氨基酸序列 (Fig.2)。同源分析表明山羊胎肝3β-HSD的氨基酸序列与牛卵巢、人Ⅰ型和小鼠Ⅰ型3β-HSD的同源性分别为96%、78%和73% (Fig.3)。提取雌性胎羊、雄性胎羊及母体羊肝脏的总RNA, 同时做RT-PCR,表明3β-HSD 在不同个体肝脏中的表达存在差异,雌性胎羊和母体孕羊肝脏中都有3β-HSD的表达,而在雄性胎羊肝脏中,则未检测到表达信号(Fig.4)。     

咖啡因对S~(35)-硫噴妥鈉的麻醉时間和分布排泄的影响

咖啡因对中枢神經系統有明显的兴奋作用,首先反映在大脑机能上,因而能够消除瞌睡,振作精神,临床上常用作麻醉剂的对抗药,因它能消除催眠药所引起的瞌睡,减弱酒精性的酩酊,并在麻醉药的中毒时,現出苏醒的作用。本文的目的是企图闡明咖啡因对带标記硫(S~(35))-硫噴妥鈉在动物体內所引起的麻醉     

重组大肠杆菌合成聚(3-巯基丙酸)和聚(3-羟基丁酸-3-巯基丙酸)的研究

利用Clostridium acetobutylicum的丁酸激酶基因 (buk) 和磷酸转丁酰基酶基因(ptb),以及Thiocapsa pfennigii的PHA合成酶基因,设计了一条能够合成多种聚羟基烷酸的代谢途径,用构建的质粒转化大肠杆菌,获得了重组大肠杆菌菌株.前期的研究表明,在合适的前体物条件下,该重组大肠杆菌能够合成包括聚羟基丁酸、聚(羟基丁酸-戊酸)等多种生物聚酯[Liu and Steinbüchel, Appl. Environ. Microbiol. 66739-743].利用该重组大肠杆菌,通过生物催化作用合成了3-巯基丙酸的同型共聚酯,同时利用该重组大肠杆菌还获得了含3-巯基丙酸单体的多种异型共聚物.实验首先研究了3-巯基丙酸对大肠杆菌生长的影响,在此基础上优化了培养过程中添加3-巯基丙酸的时机和浓度,结果表明,在实验的条件下,细胞合成聚(3-巯基丙酸)可达6.7%(占细胞干重),合成聚(3-羟基丁酸-3-巯基丙酸)(分子中3-巯基丙酸3-羟基丁酸=31)可达24.3%.实验进一步研究了同时或分别表达以上3个基因的重组大肠杆菌合成聚合物的能力,结果表明只有当3个基因同时表达时才能合成聚合物,说明3个基因对合成过程是必须的,从而表明了合成途径是按照设计的路线进行的.还通过GC/MS、GPC、IR等手段对合成的化合物进行了定性的研究.聚(3-巯基丙酸)或聚(3-羟基丁酸-3-巯基丙酸)等聚酯属于一类新型生物聚合物,它在分子骨架中含有硫酯键,不同于聚羟基烷酸酯的氧酯键,从而具有显著不同的物理、化学、光学等性质和具有重要的潜在应用价值.     

强光下SO_3~(2-)和HCO_3~-对盐藻叶绿素荧光的影响

强光下（1000μmolm-2s-1）用低浓度（1mmol／L）处理盐藻1h,其Fv／Fm、qN,qp和PSⅡ都较暗对照高。随着SO浓度（5,25,50,100mmol／L）的提高,Fv／Fm、qN、qp和ΦPSⅡ下降。20mmol／L的HCO3-可减缓这种下降趋势。强光下1mmol／LHCO3-对25mmol／LSO产生的光抑制不但没在减弱反而有所加强,提高HCO3-浓度则有减弱作用,尤以50mmol／L的效果最好,而且qN可随HCO3-浓度的增高而上升,至100mmol／L才略有下降。低浓度下SO（5mmol／L）强光的光抑制在随后的低光条件下（40μmolm-2s-1）放置2h能完全恢复,高于此浓度引起的光抑制不能完全逆转。低光下HCO3-能促进光抑制的恢复。     

穿心莲内酯体外抗白念珠菌生物膜作用的初步研究

目的研究穿心莲内酯对体外白念珠菌生物膜的影响。方法采用XTT减低法评价穿心莲内酯对白念珠菌生物膜及其黏附性的影响;镜下观察该药对白念珠菌生物膜的形态学影响;细胞毒性试验检测该药的毒副作用。结果穿心莲内酯对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC80分别是250、1000μg/ml;1000μg/ml及100μg/ml时对白念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用;对人细胞毒性较弱。结论穿心莲内酯对体外白念珠菌生物膜有显著的抑制作用。     

穿心莲内酯等中药有效成分对表皮葡萄球菌生物膜渗透性的比较

目的比较穿心莲内酯、大黄素、盐酸小檗碱等对表皮葡萄球菌生物膜的渗透性,为中药治疗表皮葡萄球菌引起的相关感染提供相关研究的依据。方法在体外建立SE—BF（表皮葡萄球菌生物膜模型）和PB（生物膜渗透模型）,观察穿心莲内酯、大黄素、盐酸小檗碱等中药有效成分对PB的渗透率。结果大黄素、穿心莲内酯36h渗透率分别达到88．00％、82．89％,而盐酸小檗碱渗透率在几种药物中相对较差。结论中药有效成分对表皮葡萄球菌生物膜有较强的渗透性。     

~(35)S标记探针检测人类单拷贝基因

应用改进的缺口翻译方法,将α-~(35)S-dATP参入DNA分子,获得了>10~8dpm/μgDNA的高比度~(35)S标记探针。用其做Southern吸印杂交探测人类单拷贝基因组织,放射自显影4～10天,能够得到满意的力谱。与~(32)P相比,~(35)S具有半衰期长,无辐射伤害,价格便宜等优点。     

与高等植物吸收(NO_3)~-/(NH_4)~+、(PO_4)~(3-)和K~+有关的膜转运蛋白编码基因的分子生物学研究现状

高等植物对土壤中营养元素的吸收是其一切生命活动过程的基础,尤其在营养元素缺乏的状态下,更与其抗营养饥饿等特性息息相关。兼于土壤中Ｎ、Ｐ、Ｋ元素缺乏的严重性与普遍性,以及Ｎ、Ｐ、Ｋ对高等植物生长和发育的重要性,有关高等植物吸收营养元素的膜转运蛋白编码基因的分子生物学研究已引起有关学者的高度重视。ＮＯ－３／ＮＨ＋４、ＰＯ３－４与Ｋ＋膜转运蛋白均有低亲和力和高亲和力系统（ＬｏｗＡｆｉｎｉｔｙＴｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ＆ＨｉｇｈＡｆｉｎｉｔｙＴｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）。对ＰＯ４３－和Ｋ＋而言,低亲和力系统是组成性表达的系统,在正常营养状态下对根系吸收营养起重要作用。而高亲和力系统是受营养缺乏而诱导表达的系统,对于植物的抗逆性、耐营养饥饿至关重要。迄今为止,与之有关的基因的全长ｃＤＮＡ或全基因已在几种植物中被克隆。此外,对基因的表达特性亦有广泛研究。本文简要概述这三大营养元素的膜转运蛋白编码基因的分子生物学研究现状。     

氚标记黄腐酸(~3H-FA)的制备

腐植酸是广泛存在于土壤、泥炭、煤和水域中结构复杂的天然物质,是具有芳香核的高分子聚合物。它们的结构、性质;它们对土壤理化性质的影响;它们在植物营养代谢中的作用及其刺激作用的机理,一直是国     

莲芝消炎胶囊中脱水穿心莲内酯质控标准的研究

以脱水穿心莲内酯为指标,线性关系,精密度、重现性、回收率为评价标准,建立莲芝消炎胶囊中脱水穿心莲内酯的RP-HPLC法的测定条件和方法,以制定莲芝消炎胶囊的质量标准。采用ODS-C18柱(YMC-peackDOS-A,A303-S-5μm,250×4.6 mm),流动相为甲醇-水(6∶4),体积流量1 mL/min,灵敏度0.005,检测波长为254 nm,柱温30℃,分离度>1,样品液达到基线分离、峰形对称,脱水穿心莲内酯的保留时间在15 min左右,其主峰两侧不存在杂质峰,完全符合含量测定要求。结果表明PR-HPLC法适用于莲芝消炎胶囊中脱水穿心莲内酯质量标准的制定,从分析多批莲芝消炎胶囊中脱水穿心莲内酯含量测定的数据得出,每粒胶囊(0.5 g)中脱水穿心莲内酯的含量控制在≥10 mg为宜。     

~(90)锶对鲫鱼胚胎发育的影响及鲫仔鱼对~(90)锶吸收积累的研究

在胚胎发育过程中,用不同比放射性的~(90)锶试液处理受精卵,各处理组都有畸形和死亡现象。畸形的高峰一般出现在囊胚期和晶体形成期,畸形的类型一般为脊椎弯曲、体短、胸腔和卵黄囊扩大,头和眼畸形。随后即出现死亡高峰。例如:游动期的死亡率分别是:21%(对照);36%(5×10~(-11)居里/升);40%(5×1-~(-10)居里/升);45%(5×10~(-9)居里/升)。鲫仔鱼对~(90)锶吸收积累的结果表明:鲫仔鱼体中比放射性大小与试液的比放射性大小成正比,并随试验吋间的延长,生物量的增加而增加,鲫仔鱼的积累系数则不依试液的比放射性大小和生物量的多少为转移。