根霉的研究IV．根霉淀粉葡萄糖苷酶的研究

本文研究根霉属内各种羣产生淀粉葡萄糖苷酶的情况及选择高活性的菌种。我们由150株根霉中选择出3株淀粉葡萄糖苷酶很强的根霉,共名称和菌号为Rhizopus japonicus AS 3.849(日本根霉),Rh. Tonkinensis AS 3.1175(河内根霉)和Rh.chinensis AS 3.2746(中国根霉)。酶作用的最适pH是4.5—5.0,最适温度因菌而异,一般以50一55℃最好,其中3．2 746耐热性最强,稳定性最高。根霉睫粉酶对原料的选择性不强,对6种不同的淀粉(可溶性淀粉、马铃薯、甘薯、玉米、大米和高粱),几乎都能全部水解成葡萄糖。3种根霉的性能,在很多方面都不相同,在一般条件下,3．849糖化力最强,3.1175次之,3.274 6糖化之初速度较低,而它的优点是生长迅速,酶的耐热性和稳定性强。     

根霉脂肪酶的研究进展

根霉属微生物是脂肪酶的一个重要来源,多种根霉脂肪酶已被分离并鉴定。本文将对根霉脂肪酶的菌种筛选、发酵、纯化、结构、分子生物学研究及应用进行概述。     

美国根霉改级新组合

在对性根霉原变种Ｒ．ｓｅｘｕａｌｉｓ ｖａｒ．ｓｅｘｕａｌｉｓ和美国性根霉变种Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｅｘｕａｌｉｓ ｖａｒ．ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ的模式菌株进行了比较研究后,发现二者除都是同宗配合菌和在接合孢子囊和配囊柄的大形态上有一定相似性外,在无论是孢子囊阶段抑或是接合孢子阶段的各个方面都存在着很大差异,因此将美国性根霉变种提升为种,取名美国根霉改级新组合Ｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ ｓｔａｔ．ｎｏｖ     

美国根霉改级新组合

在对性根霉原变种R. sexualis var. sexualis和美国性根霉变种Rhizopus sexualis var. americanus的模式菌株进行了比较研究后, 发现二者除都是同宗配合菌和在接合孢子囊和配囊柄的大形态上有一定相似性外, 在无论是孢子囊阶段抑或是接合孢子阶段的各个方面都存在着很大差异, 因此将美国性根霉变种提升为种, 取名美国根霉改级新组合R. americanus stat. nov.并重新进行了描述。过去研究过的许许多多的毛霉目中的接合孢子都是无色的, 只有性根霉和美国根霉的接合孢子被观察到分别为淡褐色和淡青色。有色的接合孢子此为首次报道。     

根霉超氧化物歧化酶同工酶类型的鉴别

利用ＫＣＮ、Ｈ２Ｏ２睡ＳＤＳ的选择性反应引起的ＳＯＤ同工酶谱带变化即可鉴别精 抽提液中的ＳＯＤ同工酶类型,用这种方法对五株不同种根霉的鉴别实验表明,它们均不同程度地含有Ｃｕ,Ｚｎ型和Ｍｎ型两各ＳＯＤ,前者约点８０％左右,后者只占２０％左右,用邻苯三酚自氧化法对样品中ＳＯＤ活性测定结果与在同工酶谱上的鉴别结果基本一致。     

固定化根霉发酵生产脂肪酶

以聚氨酯为少根根霉固定化载体,对固定化后的细胞连续重复批次发酵进行了研究。优化了重复批次发酵培养基组成。在取代发酵液40mL,取代培养基组成为全脂豆粉3%,花生油0.5％条件下,固定化菌体摇瓶实验可连续使用140h,重复9批次。酶的时空产率提高6倍。5L发酵罐小试固定化菌体可连续发酵6批次。固定化细胞连续发酵,大大缩短了发酵的时间,酶的时空产率获得大幅提高。     

根霉超氧化物歧化酶同工酶类型的鉴别

利用ＫＣＮ、Ｈ_２Ｏ２和ＳＤＳ的选择性反应引起的ＳＯＤ同工酶谱带变化即可鉴别粗抽提液中的ＳＯＤ同工酶类型;用这种方法对五株不同种根霉的鉴别实验表明,它们均不同程度地含有Ｃｕ,Ｚｎ型和Ｍｎ型两种ＳＯＤ,前者约占８０％左右,后者只占２０％左右。用邻苯三酚自氧化法对样品中ＳＯＤ活性测定结果与在同工酶谱上的鉴别结果基本一致。     

根霉的研究V．根霉麸麯的扩大培养和浓淀粉液的糖化

本文研究前报[1]选出的根霉的扩大培养和麸麴浸液对浓淀粉液的糖化作用。盘扩大培养时,水分越多糖化力越强,一般配比为麸皮：水一1：1．5。最适培养时间因菌而异,通常在25—28℃温室培养36—48小时,使菌旺盛生长至成熟,糖化力已达高率,即可升温干燥。60％或30％马铃薯淀粉的液化,朵用细菌淀粉液化酶,30％或15％浓淀粉液的糖化用根霉麸麯浸液,其转化卒达96．7％—99．1％,纸谱鉴定在后期为纯葡萄糖。根据几方面性能的比较,这3株根霉各有特点。在最适的条件下,Rhizopusjaponicus AS 3.849的糖化速度最快,转化率最高,产品也最纯,但此菌培养条件要求严格。Rh. Tonkinensis AS 3.1175在温度较低、湿度较小时,比其它菌生长略快。Rh. Chinensis AS 3．2746虽然糖化力较前二者略低,但孢子特多,生长迅速,容易制麯,因而宜于工业应用。     

根霉3078的代谢产物的研究

从根霉3078菌丝体的甲醇提取物中分离得到9个化合物,通过波谱分析,鉴定为5α,8α-表二氧-(20S,22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(1)、甘油醇-1-单油酸酯(2)、4-羟基苯乙酮(3)、4-羟基苯乙酸(4)、(20S,22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β三醇(5)、(S)-3-羟基-3-苯基丙酸(6)、胸腺嘧啶(7)、尿嘧啶(8)和腺苷(9)。     

观察根霉假根和孢子囊的简单方法

选择已长孢子囊且孢囊柄短的分散的单个根霉,用接种针(或解剖针)插进培养基内将其挑出,小心地放在滴有染色液的载片中央,加盖片,显微观察,假根和孢子囊清晰可见。在根霉培养时,接种量不宜太大,培养时间不宜过长,一般28℃条件下约70小时便可。如果菌丝已布满整个培养基也不要紧,细心观     

利用木霉与根霉两步发酵秸秆制备L-乳酸研究

以秸秆为原料进行生物转化大量制备有机酸意义重大.在秸秆汽爆法预处理的基础上,以绿色木霉为菌种转化制备秸秆糖,对降解单糖接种米根霉进行二次发酵制备L-乳酸.试验结果表明,第一步绿色木霉固态培养制备纤维素酶时,控温30℃、通气0.12L/(L.min)、发酵40h后制备干曲,后按10g干曲/L汽爆液的配比进行55℃酶解36h,五、六碳糖累积浓度达到86g/L.第二步米根霉发酵时,控制温度32℃、通气0.4L/(L·min)、转速450r/min,发酵48h,最终产L-乳酸累积浓度为81.6g/L.秸秆制备L-乳酸的两步发酵法发酵工艺具有推广价值.     

根霉纤溶酶发酵条件的优化

研究了不同培养基对中国根霉１２号（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｃｈｉｎｅｓｉｓ１２）发酵生产纤溶酶的影响,发现Ｃ／Ｎ的降低有利于产酶,同时用正产实验给出了最佳培养条件为：以麸皮水＋胰蛋白胨＋豆渣为培养基,接种量２０％,转速１７０ｒ／ｍｉｎ;用响应面设计确定了最佳培养基为４．３６６６１％麸皮水＋０．９８９７５％胰蛋白胨＋４．８９８９５％豆渣;在最优条件下,纤溶酶的发酵效价可达３．０６Ｕ／ｍｌ。发现添加金属离子     

少孢根霉发酵生产超氧化物歧化酶的研究

本文研究了少孢根霉RT－3固态发酵生产SOD的条件。结果表明该菌发酵培养基的优化组成为：大豆,麸皮5％,硫酸氢0．3％,磷酸二氢钠0．03％,硫酸铜0,04％。培养基经代化后,每克培养物SOD酶活提高53％。适宜的乳酸加入量为1％。吐温－80、醋酸钠和抗坏血酸对菌体产酶没有作用。     

壳聚糖固定化德氏根霉脂肪酶的研究

研究了壳聚糖吸附和戊二醛交联对脂肪酶固定化条件,在室温条件下将0．4g酶粉溶于pH6．0缓冲液中,加入10g壳聚糖,摇匀,再加入浓度为0．6％戊二醛交联6h,得到固定化酶,酶活力回收率约为54．2％。固定化酶的半失活温度比游离酶的高,半失活温度由游离酶的47℃提高到100℃,最适反应温度由40℃上升至80℃,最适pH由6下降到5．5,固定化酶K’m值由游离酶的Km 50mg／mL增加到56mg／mL。该固定化脂肪酶用于酯的合成;在80℃条件下经过10批次连续水解植物油反应,固定化酶的活力仍保持在82．6％以上。     

根霉葡萄糖淀粉酶的复性复活动力学研究

本文利用荧光、紫外差光谱研究了根霉葡萄糖淀粉酶在盐酸胍变性后的复性、复活动力学。结果表明,该酶在小于4mol/L盐酸胍中变性是可逆的,其复性过程遵循一级反应方程。酶复活过程是由两个一级反应组成的复合反应,构象变化速度与复活过程中较快的反应速度相差无几,这可能是在Trp及Tyr微区的构象变化基本完成之后,酶活力恢复还没有完成造成的。     

黄土高原的一个VA霉根真菌新种：三红盾巨孢囊霉

在黄土高原中条山区发现一个盾巨孢囊霉属新种,其孢子无色透明,但球茎状连孢菌丝、芽盾及发芽菌丝均呈明显的红棕色,故命名为三红盾巨孢囊霉Ｓｃｕｔｅｌｌｏｓｐｏｒａ ｔｒｉｒｕｂｉｇｉｎｏｐａ Ｘ．Ｌ．Ｐａｎ ＆ Ｇ．Ｙ．Ｚｈａｎｇ近似种Ｓ．ｇｉｌｍｏｒｅｉ Ｗａｌｋｅｒ ＆ Ｓａｎｄｅｒｓ（１９８６）和Ｓ．ｓｃｕｔａｔａ Ｗａｌｋｅｒ ＆ Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈｓ（１９８９）,在许多方面均不同于此新种。村