R质粒对大肠杆菌L-天门冬酰胺酶活力的影响

对含有不同R质粒的6株大肠杆菌J53和不含质粒的大肠杆菌J53所产生的L-天门冬酰教酶的活力进行了比较,前者的L-天门冬酰胺酶活力比后者的降低了约1/2—3/4。消除大肠杆菌J53细胞中的R质粒后,L-天门冬酰胺酶活力明显增加并与不含质粒的大肠杆菌J53的相近。结果表明,在大肠杆菌内存在的R质粒对寄主的L-天门冬酰胺酶活力具有明显的抑制作用。     

琥珀酸弧菌L-天门冬酰胺酶基因的初级克隆和表达

本文以表达型噬菌体λgtll为载体,以及¹²⁵I标记的放射免疫抗体为探针,从EcDR I酶切的琥珀酸弧菌(Vyibrto succinogenes)染色体DNA片段中克隆得到携带天门冬酰胺酶基因的目的片段,在宿主菌E．Coil Y 1090 中得到表达。经酶解和凝胶电泳分析表明该插入DNA片段的分子量为5．8kb．重组DNA感染另一宿主菌E．ColiYl089后所产生的酶蛋白具有L-天门冬酰胺酶活力。用重组DNA(λgt11-AS8)为探针进行southern DNA杂交,琥珀酸弧菌染色体DNA的Ec0R I酶切片段中,出现一条位置在5．8kb处的杂交带,证明我们克隆到的携带L-天门冬酰胺酶基因的目的片段来自琥珀酸弧菌。     

用双水相系统从大肠杆菌细胞内释放L-天门冬酰胺酶

聚乙二醇－磷酸盐双水相系统可以释放大肠杆菌ＡＴＣＣ１１３０３细胞内的Ｌ－天门冬酰胺酶。研究了聚乙二醇、磷酸氢二钾的浓度对酶和蛋白质的释放及分配的影响。在双水相系统中加入适量的盐酸胍和ＴｒｉｔｏｎＸ１００可以提高酶的释放量。实验表明,用新的下相代替富含酶的下相,上相能够重复使用几次。这种方法将酶的释放和萃取结合为一个步骤,使酶的纯化更加简单和有效     

重组L-门冬酰胺酶工程菌的表达和PEG的化学修饰

目的提高重组L-门冬酰胺酶(rL-ASP)工程菌的表达量,分离纯化rL-ASP并对之进行PEG化学修饰。方法将带有编码rL-ASP的基因的质粒(pKA)导入不同的宿主菌中,挑出高表达菌株,同时优化发酵培养基,分离纯化获得的高纯度rL-ASP再用PEG进行化学修饰,SDS-PAGE检测修饰效果。结果在pH7.0的条件下,宿主菌为JMl09的工程菌pKA/JMl09酶活力最高,三角瓶振摇培养的酶活力可达216×103IU/L;发酵罐发酵培养,酶活力达312×103IU/L。纯化后的rL-ASP比活力为220IU/mg,rL-ASP经过PEG化学修饰生成rL-ASP-PEG,分子量发生改变。结论改变目标蛋白表达的宿主菌和优化发酵工艺,提高了rL-ASP的表达量,纯化的rL-ASP经过PEG化学修饰后分子量增大。     

大肠杆菌L-天门冬酰胺酶的研究II．大肠杆菌AS 1.357 L-天门冬酰胺酶的提纯和性质

用硫酸铵盐折,酒精分级沉淀,酸处理和DEAE纤维素层析等方法,从大肠杆菌AS 1．357的无细胞提取液中提纯L天门冬酰胺酶近90倍,比活力达200单位／毫克蛋白质以上,总收率约18％。用葡聚糖凝赕G-100凝胶过滤法测定分子量约为144500,用等电点聚焦电泳测定等电点为pH4.6,最适反应pH和温度分别为7．0和55℃左右,酶的紫外吸收光谱最大吸收值在水溶液中为278毫微米,在0．1NNaOH溶液中为290毫微米,提纯各段均不含无抗癌活力的EC一1组份。酶的冷冻干燥制品在低温下保存一年未见任何酶活力损失。     

用盐酸胍和Triton X-100从大肠杆菌细胞内释放L-天门冬酰胺酶

研究了用盐酸胍和TritonX 10 0处理ATCCEscherichiacoli 1130 3细胞 ,使细胞内的L-天门冬酰胺酶 (EC 3.5 .1.1)释放到细胞外的方法 ,发现盐酸胍和TritonX 10 0结合使用的效果好。考察了盐酸胍浓度、TritonX 10 0浓度、大肠杆菌细胞浓度、处理时间、pH值等因素对L -天门冬酰胺酶释放的影响。结果表明 ,0 .75～ 1mol/L盐酸胍、2 %TritonX 10 0、细胞浓度 3.2× 10 8/ml、pH 7.0、15℃处理 16～ 2 0h后 ,酶的释放率达到 6 0 %左右。这种方法操作简便 ,酶的释放率较高 ,但对酶无明显的选择性。     

大肠杆菌(Escherichia coli A S 1.357)L-天门冬酰胺酶的研究I. L-天门冬酰胺酶高产菌株的筛选

从87株细菌中筛选取得L-天门冬酰胺酶的高产菌株大肠杆菌(Escherichia coli AS 1.357)。采用7.5—10％玉米浆培养基(pH7.0一7.5),于37℃振荡培养8小时,可获得高活力的L一天门冬酰胺酶(4．6单位／毫升)。在我们的实验条件下,葡萄糖不利于L-天门酰胺酶的形成．     

α-天门冬氨酰二肽酶及其进化酶的FT-IR研究

用分子定向进化技术,在酶活力和热稳定性双重选择压力下,筛选到了一株Kcat/KM是天然酶47倍的进化酶.用FT-IR方法,测定了α-天门冬氨酰二肽酶及其进化酶的酰胺I带图谱,定量估算了天然酶和进化酶的各种二级结构含量.天然酶中,β折叠结构含量为28.5%,α螺旋结构含量为33%,这与园二色谱测量α螺旋结构为33%的结果有很好的一致,剩余的残基形成不同类型的转角和无规结构,其总含量为38.5%.在进化酶中,β折叠结构含量为26.8%,α螺旋结构含量为31%,其它结构为不同类型的转角和无规结构,含量为42.2%.     

酶分子化学修饰研究进展

酶是高效生物催化剂,在工业和临床医药上应用广泛。但由于酶是蛋白质,稳定性差,且在生物体内有较强的免疫原性,因而严重制约了其应用。对酶分子进行化学修饰是提高其稳定性和降低免疫原性的有效途径。简要介绍几种改进酶催化特性的方法、酶分子修饰效果的分析与评价、酶通过化学修饰获得的新性质及其原理、酶化学修饰的研究动态等。     

左旋门冬酰胺酶治疗小儿急性淋巴细胞白血病的护理

左旋门冬酰胺酶（L-ASP）是治疗急性淋巴细胞白血病的主要药物之一。临床用于治疗儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的完全缓解率达95％以上,长期无事件生存率达75％以上[1]。然而L-ASP不良反应较多,包括急性胰腺炎、药物性糖尿病、变态反应、凝血功能障碍、肝功能损害等[2]。因此在用药过程中对不良反应的观察及精心细致的护理极为重要。现将我科2008年1月～2010年1月收治的30例患儿应用L广ASP治疗护理报告如下。     

脱卤酶化学修饰的研究

脱卤酶是催化α-卤酸转化为α-羟基酸的酶。本文用各种化学修饰剂对脱卤酶YL、109和H-2进行化学修饰。实验结果表明作用于丝氨酸、赖氨酸、色氨酸残基的试剂对酶活无明显影响,而作用于组氨酸、精氨酸和带羧基氨基酸残基的试剂使酶活降低。底物对化学修饰剂有保护作用。组氨酸、精氨酸和带羧基氨基酸(答氨酸或天冬氨酸)残基为脱卤酶活力所必需。     

天门冬属植物化学成分及生物活性研究进展

本文对天门冬属(Asaragus L.)植物化学成分及生物活住的研究进展作一概述.     

天门冬属九种药用植物的氨基酸和微量元素分析

百合科(Liliaceae)天门冬属(Asparagus (Tourn.)L.)植物具有悠久的药用历史,如天门冬(A.cochinchinesis (Lour) Merr.)早在汉代《神农本草经》中就被列为上品,具有滋阴、润燥、降火、止咳等功效。现代药理研究及临     

天门冬纳米制剂对小鼠抗氧化系统的影响

目的:探讨中药天门冬及其纳米制剂对小鼠心肌线粒体中超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响,观察纳米制剂能否更有效地改善机体的抗氧化能力.方法:采用D-半乳糖致衰老小鼠分别ig相同剂量的天门冬水提液及其纳米中药15 d,测定衰老小鼠心肌线粒体中SOD活性、MDA含量及肝组织中GSH-Px活性.结果:天门冬水提液及其纳米中药均能显著增强天门冬及其纳米中药均可提高小鼠心肌线粒体中SOD的活性(P<0.01),肝组织GSH-Px活性(P<0.01),降低心肌线粒体中MDA(P<0.05),且纳米中药的药效强于天门冬水提液的药效(P<0.01).结论:天门冬纳米制剂抗氧化能力优于天门冬超声波水提液.     

酶化学修饰的应用潜力

本文评论了酶化学修饰在酶工程中的应用潜力,介绍了这方面的最新进展。事实证明,只要选择的化学修饰剂及修饰方法合适,有可能在较大范围内改变酶的性质,如稳定性和溶解度、酶催化活力和选择性等,从而创造天然酶所不具备的优良特性,扩大酶的应用范围。     

天门冬提取液对小鼠心肌LPF、GSH-Px影响的实验研究

目的:观察天门冬不同极性提取组份对小鼠心肌IPF、GSH-Px的影响.方法:采用D-半乳糖衰老模型小鼠,分别给予天门冬氯仿、乙醇、水三种不同极性提取组份,观察其对小鼠心肌LPF、GSH-Px的影响.结果:天门冬脂溶性的提取液对小鼠心肌抗氧化作用优越于极性溶剂提取液.结论:天门冬提取液对抗氧化机能的调节是其延缓衰老的重要机制之一.