利用雄性生殖细胞建立转基因动物的研究进展

随着科学研究的不断深入及临床治疗的需要,人们对转基因动物的需求越来越大;但是传统的转基因动物技术大多操作复杂、成本高、效率低,从而限制了转基因技术的广泛应用。利用雄性生殖细胞作为载体介导外源基因导入受精卵来建立转基因动物具有操作简便、经济、易于推广的优点,发展前景广阔。该文就利用雄性生殖细胞建立转基因动物的发展历程和方法进行系统的阐述和分析。从利用精子和精原干细胞携带外源DNA两个方向展开,分别分析和评价了恒温共孵育法、脂质体介导法、电穿孔法、胞浆内单精子注射法、输精管注射法、体外转染精原干细胞法以及体内转染精原干细胞法七种实验设计方法。     

紫花苜蓿转基因技术及其应用的研究进展

对农杆菌介导法、电击法、显微注射法及基因枪法等几种常用的紫花苜蓿转基因技术研究进展进行概述。综述利用转基因技术对苜蓿进行品质改良,提高抗逆性、抗病虫害、抗除草剂,以及利用转基因苜蓿作为生物反应器生产植物疫苗、酶制剂和抗体等方面的研究进展及最新研究成果。对目前制约紫花苜蓿转基因技术发展的瓶颈及其生物安全性问题进行分析和讨论,并对其应用前景和商业价值进行展望。     

动物转基因技术研究现状与应用前景

动物转基因技术是20世纪70～80年代兴起的一种生物技术,它从诞生之日起,就预示了广阔的应用前景。转基因技术经过多年的发展,已经形成了显微注射法、逆转录病毒载体法、精子载体法和体细胞核移植法等比较成熟的方法。近年来,又出现了性腺注射法、RNA干扰法、基因打靶结合克隆法等新技术。本文在前人研究的基础上重点总结了各种转基因方法的基本原理和国内外最新研究动态,对各种转基因技术的优缺点进行了详细的探讨。最后本文还对转基因技术在畜牧生产中的应用进行了阐述,并对转基因技术总体存在的问题进行了分析。     

Chelex-100快速提取用于转基因检测DNA模板的研究

目的:建立从转基因作物中快速提取DNA的方法.方法 :采用Chelex-100法提取抗草甘膦大豆和非转基因大豆、转基因抗虫玉米Bt176和非转基因玉米中的DNA,使用PCR扩增大豆和玉米的内源基因(Lectin,zSSⅡb)及外源特异性序列(CaMV35S,Bt176)评价提取核酸的质量.结果 :Chelex-100法能够快速在1h之内从大豆和玉米中提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰,转基因抗草甘膦大豆样品和转基因抗虫玉米Bt176检测均出现强阳性结果.结论 :Chelex-100法提取DNA可以作为转基因检测的模板,该方法具有经济、简便、快速的特点,适合于转基因检测工作.     

转基因水稻检测方法的研究进展

近年来,转基因作物在全球得到了迅猛发展,1988年第一批水稻转基因植株问世以来,各国科学家在水稻转基因研究领域取得了一系列成果,而对转基因水稻及其产品的检测,也成为世界各国公众关心的热点,从PCR法、基因芯片法等讨论转基因水稻的检测方法的研究进展,让读者对转基因水稻检测方法有初步的认识和了解,对开展转基因水稻检测的研究工作有一定的参考价值。     

玉米遗传育种过程中运用基因工程概论

本文介绍了转基因玉米的转化途径,主要有农杆菌介导转化法、基因枪法、花粉管通道法、碳化硅纤维介导法等,并分析了抗虫转基因玉米、抗除草剂玉米、利用转基因玉米作载体生产特殊蛋白等转基因玉米的种类。     

外源DNA导入在蔬菜分子育种中的研究进展

随着转基因方法的多样化和技术体系的不断完善,转基因技术在蔬菜育种上的应用取得了显著成果,成为蔬菜种质创新和品种改良的有效途径。介绍了几种不依赖组织培养的外源DNA导入技术,包括花粉管通道法、农杆菌浸渍法、激光微束法、PEG法、电击法和脂质体法,从育种角度比较了这些方法的优缺点,并对其在蔬菜育种中的应用现状、存在问题及应用前景进行了较为全面的综述。     

转基因白桦的遗传变异分析

应用细胞学方法分析了由农杆菌介导法获得的转基因白桦的细胞学变异情况,结果表明转基因白桦的染色体变异频率为78.5％,远远高于非转基因白桦的变异频率(15.3％),且变异以非整倍体占多数。同时用RAPD标记方法研究了转基因白桦在DNA水平的变异情况,结果显示DNA多态性指数为31.67,并与其它转基因植物的变异情况作了比较研究。最后分析、讨论了产生变异的原因:(1)组织培养过程中产生突变;(2)外源基因的整合及重排时宿主基因组的插入位点及相邻基因转录表达的干扰;(3)应用抗生素和除草剂等筛选转基因植株时促进了转基因植株的变异程度。并提出减少转基因植物体细胞克隆变异的建议。     

Baff转基因斑马鱼的构建及相关基因表达检测

通过RT-PCR法由斑马鱼脾脏克隆B细胞刺激因子baff基因,构建过表达斑马鱼baff且携带有绿色荧光标记蛋白的重组质粒pIRES2-GFP-baff;胚胎显微注射获得转基因斑马鱼胚胎;通过GFP荧光标记跟踪并筛选转基因阳性鱼;Western blot法鉴定Baff-GFP融合蛋白表达情况;qPCR检测baff,GFP及baff下游相关基因bcl-2,il-4mR-NA表达情况。结果表明细胞、胚胎及幼鱼baff和GFP均高表达,baff下游基因bcl-2激活和il-4基因抑制表达。通过胚胎显微注射法可成功获得过表达baff的转基因斑马鱼,此研究为建立红斑狼疮转基因斑马鱼模型及高通量筛选Baff拮抗剂奠定了基础。     

糜酶转基因小鼠心脏组织中基质金属蛋白酶9的活化

为研究糜酶在心脏中的功能 ,用明胶酶谱法和放免法检测了糜酶转基因小鼠心脏组织中基质金属蛋白酶及糜酶的活力 .糜酶转基因小鼠心脏组织中糜酶样活力较转基因阴性小鼠升高了约80 % ;而其心脏匀浆液凝胶酶谱分析结果显示在 92 k D处明胶酶活力也升高约 30 % ;经 Western印迹鉴定为基质金属蛋白酶 9,而在蛋白水平上与转基因阴性小鼠无显著差异 .结果提示 ,糜酶转基因小鼠心脏组织中糜酶活力的升高可活化基质金属蛋白酶 9,从而影响心脏胶原代谢 .