鱼类染色体的白细胞一PHA活体内处理制片及其组型观察

目前,鱼类染色体标本制备的方法主要是 由Yamamot。等建立的肾细胞-PHA体外短期 培养法和Ojim：等提出的外周血淋巴细胞离体 培养法［[1,7,81,以及活体注射PHA直接用肾组 织的细胞制片等L3,41。用短期细胞培养研究鱼类 染色体有较突出的优点,它能保持染色体的自 然状态,染色体的形态特征较易于显示出来,中 期分裂相多,染色体分散均匀、清晰。但细胞培 养法需要有特定的条件,在设备差或野外工作 条件下不易做到,而且程序繁琐、费时较长（一 般需要3至10夭）L1], 在应用上受到一定的限 制。直接用常规空气干燥法制片,获得的中期分 裂相少,制片效果亦不理想L41。我们参照Baker 在蛇类的工作【s1并稍加改良,采用PHA活体内 注射取外周血,不需进行细胞体外培养和无菌 操作制备鱼类染色体标本。由于使用这种方法 可避免杀死动物,因此也可以连续检查同一个 体的染色体组型。我们所获得的初步结果,为研 究某些需要保持其继续存活的对象,如稀有的 杂交后代和通过细胞工程获得的少量实验对象 的染色体提供了一个新途径。同时,直接用从 活体繁殖的细胞制片,可以排除体外培养时可 能出现的有害效应,在环境监测中可望作为一 种监测手段用于水质污染与鱼类染色体损伤相 互关系的研究。     

草鱼和团头鲂染色体G带带型的研究

本文报道了经改进的胰酶一步法和放线菌素D(AMD-BSG)法所显示的鱼类染色体G带。采用草鱼(Ctenopharyngodon idellus)和团头鲂(Megalobrama amblycephala)的血淋巴细胞和肾细胞进行短期培养。血淋巴细胞的空气干燥制片,用胰酶一步法处理,显示出细致清晰的染色体G带。培养的肾细胞在收集前1-1.5h,1.5—2h,2.5—3h,用最终浓度为2μg/ml的AMD(actiomycin D)处理,其气干制片在HCI和Ba(OH)_2中处理,经2×SSC温育,Giemsa染色,获得了良好的染色体G带。在前中期或早中期的一个细胞单倍体组的染色体显带能达200多条带纹,结果较稳定,反差明显,图象清晰。根据实验结果初步绘制了草鱼和团头鲂的G带模式图。     

鱼类染色体G—显带的Brd U—BSG方法及白鲢G—带模式图的初步建立

本文报道了一种显示鱼类染色体G-带的BrdU-BsG方法。采用肾细胞短期培养,收获前12小时加入BrdU,使终浓度为10μg/ml。制片经HCl、Ba(OH)_2处理,4×SSC温育。Giemsa染色,显示出白鲢的G-带。其带纹细致清晰,一个细胞的单倍染色体上显示带纹达200条以上,是目前已报道的鱼类多重带中带纹最多的,且反差明显,带纹有特征性,结果较稳定。根据实验结果初步建立了白鲢的G-带模式图。     

一种制备鱼类染色体的新方法

自1966年Ojima建立鱼类染色体空气干燥法以来,鱼类染色体研究技术有了很大进展.目前有肾细胞培养法、上皮细胞培养法和外周血培养法等。细胞培养需要在有一定条件的实验室进行(如无菌操作),因而简便快速的制备鱼类染色体方法便不断产生,有PHA+秋水仙碱注射法、秋水仙碱体外注射法和CoCl+秋水仙碱体外注射等方法.本文介绍一种适合于在野外条件下进行的小型鱼类和鱼苗染色体制片方法。     

鱼类培养细胞核发育潜能的研究

本文用细胞核连续移植方法,从鲫鱼囊胚细胞的继代培养细胞,获得一尾存活达三年之久的移核鱼,但性腺未分化,不育。并从性成熟的鲫鱼短期培养肾细胞,获得一尾完成发育的性成熟的成鱼。实验结果提示鱼类囊胚细胞的继代培养细胞核和已分化的成鱼体细胞核仍具发育的全能性,为用细胞核移植方法进行鱼类体细胞育种的可能性提供了依据。     

匙吻鲟的细胞遗传学分析

采用体内注射PHA和秋水仙素,肾细胞短期培养,常规空气干燥法制备匙吻鲟(Polyodon spathula)的染色体标本.对其肾细胞染色体数目统计分析表明,匙吻鲟染色体组南120条染色体所组成.以测得的核型参数和按Levan,et al.提出的染色体划分标准得出:具有22对中部着丝粒染色体(m),16对亚中部着丝粒染色体(sm),22对亚端部着丝粒染色体(st)和端部着丝粒染色体(t);染色体臂数(NF)为196,核型公式为44 m + 32am + 44st,t.再采用流式细胞仪分析系统测定匙吻鲟体细胞的DNA含量,与鸡血细胞标准对照相比为2.69±0.19,以鸡红细胞DNA含量2.3 pg/N测算.则匙吻鲟体细胞DNA含量为6.18 pg/N.根据所得到的结果并结合已发表的鲟鱼类DNA含量和染色体资料,判定匙吻鲟为四倍体物种.鲟形目伍类全部为多倍体起源的鱼类,在细胞水平的进化比较特殊,以染色体加倍的方式进行.染色体加倍及分化,可能是造成鲟形目鱼类种类较多及多倍体类型(4n、8n、12n等)丰富的主要原因.     

四种胡子鲇核型的比较研究

本文以鱼类肾细胞为材料,用空气干燥法制备染色体标本,对四种胡子鲇的核型进行了分析和比较。观察到这几种鱼的肾细胞中都存在不同程度的罗伯逊易位和其他染色体易位的现象。在蟾胡子鲇的核型中发现有粒状染色体的存在;在四种鱼中都发现可能是XY性染色体的异型染色体。结果还表明,斑点胡子鲇的核型可能由胡子鲇的核型通过染色体罗伯逊易位进化而来,而蟾胡子鲇的核型则是这四种鱼中最原始的一种。     

宽体沙鳅的染色体核型与DNA含量分析

为了解宽体沙鳅(Sinibotia reevesae)的种质特征,以野生宽体沙鳅为材料,采用腹腔注射植物血球凝集素(PHA)和秋水仙素,肾组织细胞短期培养、常规空气干燥法制备染色体标本,并对其核型进行分析。以鸡(Gallus gallus)血细胞DNA含量(2.50 pg/2c,2c指二倍体)为标准,用流式细胞仪测定宽体沙鳅外周血细胞的DNA含量。结果表明:(1)宽体沙鳅的染色体数目为2n=96,核型组成公式为2n=36m+14sm+20st+26t,染色体总臂数NF=146;未发现与性别相关的异型染色体。(2)宽体沙鳅的DNA含量为(2.60±0.36)pg/2c。通过与其他26种鳅科鱼类核型进行比较,发现宽体沙鳅属于鳅科鱼类中的特化类群,其染色体核型经历了罗伯逊易位和染色体多倍化等过程。本研究结果可为宽体沙鳅种质资源保护和细胞遗传学研究提供基础资料。     

鲢鱼染色体组型的分析

研究鲢鱼染色体组型,用短期离体培养的肾细胞、空气干燥制片、Giemsa染色。鲢鱼染色体组型2n=48,其中中部着丝点染色体12对,亚中部着丝点染色体8对,亚端部着丝点染色体4对,染色体总臂数(AN)为96,没有端部着丝点染色体,没有单臂的染色体。与前人的工作有很大不同。观察了鲢鱼等几种鱼的培养细胞有丝分裂中期不同时相的染色体,并分析了中期各时相染色体的特点,认为在分析染色体组型时,须注意染色体的取相时期,其中以正中期为最好,因此,宜以正中期为准,而不宜以晚中期或染色体严重收缩时为准。     

几种动物染色体超微结构的研究

应用表面舒展技术、原位培养表面舒展技术和临界点干燥以及空气干燥等方法制备染色体标本,用FESEM和SEM观察了CHO、IB-RS-2哺乳动物细胞以及黄鳝肾细胞和鲫鱼血淋巴细胞的染色体。看到了染色体处于不同舒展状态的染色质纤维。在染色质纤维未完全展开排列紧密时,染色体臂的染色质纤维,缠绕排列有序,垂直于染色体纵轴,螺旋盘绕形成疏密程度不同的横纹。在纤维较为松散和完全松敌的状态下,可以看见直径约为300(?)的染色质纤维从有序到不完全有序到无序,弯扭、螺旋、缠绕,有些似“辐射环”状结构。在着丝点处可清楚地看到有二条纤维平行分别通连二染色单体臂,未见有染色体膜。初步比较了鱼类和哺乳类的染色质纤维,二者基本一致,但鱼类染色质纤维排列较哺乳动物的松散,类似“辐射环”状的结构较为明显。     

兰州鲇染色体组型

本研究的目的在于认识兰州鲇(Silurus lanzhouensis)染色体组特征,为兰州鲇的细胞遗传学和人工育种研究提供基础参考资料。以兰州鲇培养肾细胞为材料,采用空气干燥法制备染色体玻片标本,分析了兰州鲇的染色体组型。兰州鲇的染色体数2n=58,核型公式为2n=20m+18sm+16st+4t,染色体总臂数(NF)为96。通过比较分析认为,兰州鲇在鲇属鱼类中属于较为原始的类群。     

细胞系培养法制备云纹石斑鱼染色体

在已经报道的鱼类染色体制备方法中,采用细胞系培养法制备的染色体标本效果要明显好于PHA-头肾注射法。本实验室已经成功建立石斑鱼细胞系,并且成功传代培养超过20代。使用细胞培养法制备染色体省时省力,不必每次对活鱼进行剖杀。研究结果将为以后的分子遗传研究工作打下良好基础。     

硬头鳟巨噬细胞的体外长期培养(简报)

鱼类的巨噬细胞和高等脊椎动物的一样,在吞灭入侵的病原体方面起着极其重要的作用。探索在体外长期培养巨噬细胞的方法,有助于研究巨噬细胞的机能。Braun-Nesje等虽已从硬头鳟(Salmo gairdneri)等鲑科鱼类的头肾中分离出大量的巨噬细胞,并在体外培养了3个月之久,但因细胞不分裂,无法传代。本研究改用组织块培养法和饲养层技术探索长期培养巨噬细胞的方法,并获得成功。迄今巨噬细胞已在体外培养22个月,传代48次。细胞的原代培养分为三组。前两组是单独的脾或头肾的组织培养;第三组是脾与头肾的混合组织培养。培养液是Leibovitz’s L-15,外加20%胎牛血清,100 IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素。巨噬细胞的吞噬活力用酵母菌Candida     

黄鳍鲷染色体组型的研究

本文以鱼类肾细胞为材料,用空气干燥法制片,姬姆萨染剂染色,对黄鳍鯛的染色体进行了分析,结果表明,黄鳍鲷的二倍体染色体数为2n=48,其中中部着丝点染色体(m)为2对,亚中部着丝点染色体(sm)为1对,亚端部着丝点染色体(st)为2对,端部着丝点染色体(t)19对,染色体总臂数(N·F)为54,t组有一对具次缢痕的染色体。整套染色体平均相对长度介于5.63±0.45—2.45±0.23的范围内。     

鱼类外周血染色体的简易制备法

在制作鱼类外周血细胞染色体时,通常需采用Ojima等和Heckman等建立的淋巴细胞培养法。最近,我们未采用淋巴细胞体外培养,制得了尼罗罗非鱼、草鱼、江西万安玻璃鲤鱼等数种鱼类外周血淋巴细胞的染色体中期分裂相(图略)。具体方法如下:     

草鱼染色体的包装（间期—中期）

以草鱼ＺＣ７９０１细胞株为材料,观察鱼类细胞从间期染色质到中期染色体的包装过程。主要通过（１）分裂期与间期细胞融合,诱导染色体早熟凝集;（２）染色体“伸长”处理;（３）培养细胞的低渗处理;（４）染色质辅展等方法,制作染色体标本,进行扫描和透射电镜观察。观察表明,鱼类染色质的基本结构与哺乳类细胞相同,也是直径约１０ｎｍ的核丝。染色体的色装有两种形式：一种是多级螺旋化形成直径约３００ｎｍ的染色单体,     

洞庭湖水系中华沙塘鳢的形态和核型研究

对取材于洞庭湖水系沅水和澧水的中华沙塘鳢Odontobutis sinensis进行了形态特征及染色体核型分析,并对其分类地位进行了探讨。染色体标本制作采用PHA和秋水仙素腹腔注射、肾细胞直接制片法。在形态上,洞庭湖水系中华沙塘鳢与其他水域沙塘鳢属鱼类既具相似性,又有各自特征;核型分析显示其二倍体染色体众数为2N=44,核型公式为8ST+36T,染色体臂数(NF)为44,与其他水域沙塘鳢属鱼类核型组成存在差异。     

呼吸道合胞病毒的分离及其生物性状的研究

我们使用33℃旋转培养法,用HeLa细胞与原代人胚肾细胞,对34份急性呼吸道感染的婴儿进行了病毒分离,分出呼吸道合胞病毒6株。同时,对呼吸道合胞病毒生长性状与保存条件做了研究,发现其在HcLa细胞中用旋转法培养较静置法敏感,且融合性病变亦较明显。     

中华鲟染色体组型的研究

材料和方法 试验鱼于1983年冬天和1984年春天取自湖北省武汉市市场(长江水系),二雌一雄,体长为2.0—3.2米,体重为99—220公斤。取肾脏组织在无菌的条件下用PBS溶液进行多次洗涤后,用剪刀剪成小块,再用0.02％胰蛋白酶消化15分钟,离心分离肾细胞,进行短期培养,用0.075M氯化钾溶液低渗处理,气干法制片,吉姆萨染色。在油镜下观察、计数、确定染色体数目。然后选择分散好、形态清晰的中期分裂相做显微镜照相,将标准的中期分裂相剪下,按同源染色体配对、测量,并用统计学方法计算其臂比和相对长度。根据Levan等(1964)提出的按着丝点的位置进行染色体的命名和分类。     

一种改良的鱼类染色体富集制片方法

运用淋巴细胞分离液处理黄鳝肾细胞悬浮液后,成功地分离了其中红细胞和淋巴细胞,以富集的淋巴细胞进行染色体制片,可避免有核红细胞的影响,获得高分裂指数的黄鳝染色体标本,该方法简便,结果稳定,亦适用于其他鱼类,两栖类和鸟类的染色体制片。