补体对枯否细胞吞噬分泌功能的影响

枯否细胞是肝内定居的具有分泌功能的巨噬细胞群,本文综述了十来年中补体对枯否细胞吞噬分泌功能影响的研究成果,提出补体的过度活化可能导致枯否细胞功能失常,进而使内源性感染的可能性增加、介导肝损伤。     

枯否细胞对大鼠再生肝细胞转录活性和LDH的影响

目的与方法 SD大鼠随机分成3组,即C组(切除2/3肝叶)、L组(切除2/3肝叶后注射LPS)和G组(GdCl3预处理后切除2/3肝叶),研究大鼠肝再生期间(0～144 h)再生肝重量比、AgNORs数量、乳酸脱氢酶的变化.结果 L组肝重量比在16～48 h低于C组(P<0.05),AgNORs的数量在48 h达到最大值(P<0.01,与正常对照组相比).G组再生肝重量比在16～36 h低于C组(P<0.05),AgNORs的数量在36 h即达到高峰,乳酸脱氢酶新增一条LDH4谱带,其平均密度在36 h达到最高值.结论 肝切除后注射LPS,抑制了早期的肝再生进程,注射GdCl3灭活枯否细胞后利于肝脏的早期再生.     

一种同时分离培养大鼠肝细胞及肝枯否细胞技术的建立

目的:建立简便、经济的同步分离培养肝细胞及kupffer细胞的方法.方法:采用肝脏原位灌洗结合离体胶原酶灌注消化的方法获得总细胞悬液,差速离心分离肝细胞及肝非实质细胞,经多次低速离心可分离肝细胞,经percoll密度梯度离心以及选择性贴壁法得到纯化的kupffer细胞.台盼蓝染色鉴定细胞活力.使用倒置相差显微镜、HE染色、PAS染色及白蛋白免疫组织化学染色对培养肝细胞的形态及功能进行检测.使用光学显微镜、荧光显微镜及CD68免疫荧光染色鉴定分离的kupffer细胞.结果:体外成功的同步分离培养了肝细胞及kupffer细胞,肝细胞产率为1.37± 0.53× 108/大鼠,kupffer得率为3.45± 0.41×106/g肝脏.细胞存活率及纯度都可达90％.肝细胞培养24h后呈典型肝细胞形态,7天后仍具有糖原合成和白蛋白合成能力.贴壁后的kupffer细胞呈典型的星型或三角形,且其标志分子CD68免疫荧光染色阳性.结论:应用改良的原位灌注方法可以很好的同时分离具有活性及功能的肝细胞和kupffer细胞.     

枯否细胞在实验性肝癌细胞凋亡中的作用研究

探讨Kupffer细胞在大鼠实验性肝癌细胞凋亡中的作用。应用免疫组化方法和TUNEL法对单用二乙基亚硝胺（DENA）诱发的肝癌及用氯化钆（GC）或酶母多糖（ZM）分别阻塞或激活Kupffer细胞后,给以DENA所引起的大鼠肝癌中的增殖细胞核抗原（PCNA）、bax、bcl-2蛋白表达和肝癌细胞的凋亡进行了对比研究,结果显示：肝癌组织的增殖指数在ZM＋DENA组、DENA组、GC＋DENA组依次增高,而凋亡指数在上述各组依次降低。Bax阳性率在ZM＋DENA组明显高于DENA组（P＜0.05）,而ZM＋DENA组bcl-2阳性率明显低于DENA组（P＜0.05）。结果提示：Kupffer细胞可促进实验性肝部细胞凋亡。     

大鼠脑泡巨噬细胞NOS表达的细胞化学和免疫细胞化学研究

用NADPH－黄递酶细胞化学和iNOS免疫细胞化学方法,结合图像定量分析,动态研究了1μg/ml脂多糖诱导培养的大鼠肺泡巨噬细胞iNOS的表达情况。结果发现：脂多糖刺激1小时染色反应强度与对照组相比无显差异,6小时后明显高于对照组,随刺激时间延长,染色反应强度呈增高趋势,18小时后则趋于相对平稳;两种染色法显示的阳性细胞均以核周区染色反应为,实验从形态学角度表明：（1）NADPH－黄递酶细胞化学染色能够反映培养的大鼠肺泡巨噬细胞NOS表达状况;（2）脂多糖可诱导肺泡巨噬细胞iNOS表达,其主要存在于核周区胞浆中。     

新鲜分离大鼠脊神经节细胞分类的免疫细胞化学研究

本文对应用酶及机械分离方法处理得到的新鲜分离ＤＲＧ细胞的大小分布进行了统计分析,并且对单个细胞经免疫细胞化学处理前后的大小进行了比较。实验证明ＤＲＧ细胞经免疫细胞化学处理后体积减小１７．３８％、据此我们提出对于新鲜分离ＤＲＧ细胞,其形态学分类标准应在原标准的基础上放宽５μｍ,即大、中、小细胞的直径分别修改为＞４５μｍ,４５—２５μｍ和＜２５μｍ。本实验并对以往的单个细胞免疫细胞化学处理中的漂洗过程作了改进,设计出一种专门的单细胞漂洗方法,提高了单个细胞免疫细胞化学处理的稳定性和成功率。     

豚鼠小肠EC细胞的免疫细胞化学和银染法的比较研究

本实验利用同一切片标本,在光镜水平上,对豚鼠小肠ＥＣ细胞进行了免疫细胞化学和不同银染法的比较研究。实验结果显示,全部Ｍａｓｓｏｎ－Ｆｏｎｔａｎａ亲银染色阳性细胞均呈ＰＡＰ染色阳性;另一方面,小部分（１５％）Ｇｒｉｍｅｌｉｕｓ嗜银染色阳性细胞却表现为亲银染色和ＰＡＰ染色双阴性。以上结果表明,在显示ＥＣ细胞上,亲银染色具有很高的特异性,因此仍不失为一种经济和实用的方法;嗜银染色显示ＥＣ细胞,尽管其敏感性稍高于亲银染色法,但不具有免疫细胞化学与亲银染色技术那样明显的特异性。     

低分子量透明质酸片段通过toll样受体4信号途径激活枯否细胞

高分子量透明质酸（high-molecular-weight hyaluronic acid,HMW-HA）是重要的肝脏基质,分子量高达2×10^6Da以上,可被活性氧分子（reactive oxygen species,ROS）等降解成低分子量透明质酸片段（hyaluronic acid fragments,HA fragments）,后者能被toll样受体4（toll-like receptor4,TLR4）识别并激活免疫细胞诱发炎症反应。基于枯否细胞表达TLR4,推测HA fragments通过激活枯否细胞TLR4信号系统而启动肝脏缺血再灌注损伤。从TLR4基因突变型（C3H／HeJ,TLR4^Mut/Mut）及野生型（C3H／HeN,TLR4^＋/＋）小鼠分离肝脏枯否细胞常规培养,用酶降解及色谱柱分离方法制备HA fragments,观察HMW-HA及HA fragments激活枯否细胞的差异,检测培养上清肿瘤坏死因子-α或白介素-1β水平变化;枯否细胞p38MAPK信号通路的活化;用特异性p38MAPK阻断剂—SB-203580,阻断p38MAPK活化后,观察培养上清中肿瘤坏死因子-α或白介素-1β水平变化。结果显示HA fragments可以促进TLR4^＋/＋枯否细胞分泌促炎因子,不能诱导TLR4^Mut/Mut枯否细胞分泌促炎因子。而HMW-HA既不能促进TLR4^＋/＋枯否细胞也不能促进TLR4^Mut/Mut枯否细胞分泌促炎因子。采用多黏菌素中和脂多糖后,HA fragments促进TLR4^＋/＋枯否细胞分泌促炎因子的能力不变,这一过程伴随p38MAPK信号通路的活化。当运用p38MAPK信号通路的特异性阻断剂SB-203580,抑制p38MAPK活性时,HA fragments促进TLR4^＋/＋枯否细胞分泌促炎因子的能力显著下降。因此与基质组成成分HMW-HA不同,HA fragments可以通过TLR4激活枯否细胞,促进其分泌促炎因子诱发炎症反应,这一过程依赖于p38MAPK的激活。     

扬子鳄卵巢性类固醇激素受体的免疫细胞化学研究

为探讨扬子鳄卵巢内不同性类固醇激素受体在卵泡发育中的调控作用,研究采用组织学和免疫细胞化学方法,运用激光共聚焦显微镜,对扬子鳄不同发育时期卵泡中的雌激素受体、雄激素受体和孕激素受体进行了检测。结果发现,3种类固醇激素受体在卵巢各期滤泡细胞中均有表达,在4月Ⅱ-Ⅳ期卵泡的滤泡细胞中阳性反应最强;9月卵巢的滤泡细胞中阳性反应最弱;ER和AR不仅在各期滤泡细胞中存在阳性位点,在6月卵泡的卵母细胞胞质中也有表达。结果说明,在扬子鳄卵母细胞生长发育和成熟过程中,3种激素受体通过与其对应的激素结合对滤泡细胞的发育、卵黄的合成与积累以及排卵起着重要的调控作用。       

BEL-7404人肝癌细胞甲胎蛋白基因表达的原位杂交与免疫细胞化学研究

本文用地高辛标记的甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｃＤＮＡ探针原位杂交和免疫细胞化学方法观察到,几乎所有的ＢＥＬ－７４０４人肝癌细胞均能表达ＡＦＰｍＲＮＡ和相应的蛋白。     

内毒素肝损伤过程中枯否细胞NF-κB和AP-1活性变化及其生物学意义

为探讨内毒素肝损伤过程中,枯否细胞（Kupffer cells,KCs)内主要转录因子Nuclear factor-kappa B(NF-κB）、Activator protein-1(AP-1)活性的动态变化规律,采用健康昆虫种小鼠,随机分组如下:Lipopolysaccharide(LPS)尾静脉注射3h的量效关系：正常对照组和低（1mg/kg)、中（5mg/kg)、高（10mg/kg)3个内毒素剂量组;注射5mg/kg LPS的时效关系：正常对照、0．5、1、3、5、8h组。Electrophoretic mobility shift assay(EMSA)法检测KCs中NF－κB、AP－1活性。结果发现,内毒素肝损伤过程中,KCs中NF－κB、AP－1在不同时效和量效均不同程度活化。提示,二者的活化与炎症反应的调控机制紧密相关,抑制其过度活化可能有助于炎症的治疗。     

DDPH对猪肺动脉平滑肌细胞PDGF·BB和bFGF表达的影响：免疫细胞化学研究

ＤＤＰＨ［１－（２．６－二甲基苯乙氧基）－２－（３．４二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐］是南京药科大学合成的降压新化合物,也具有降低肺动脉高压和抑制肺动脉平滑肌细胞增殖作用。本实验用细胞培养、免疫细胞化学、图像分析、３Ｈ－ＴｄＲ、细胞周期测定等方法,进一步探讨ＤＤＰＨ对缺氧性肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣＳ）增殖的抑制机制。结果：缺氧促进肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣｓ）的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ两种生长因子的表达（积分光密度ＯＤ值）增高。缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）能促进ＰＡＳＭＣＳ的ＰＤＧＦ·ＢＢ的ＯＤ值增高,ｂＦＧＦ的ＯＤ值无明显改变。加药组（ＨＥＣ－ＣＭ＋ＤＤＰＨ）的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ的ＯＤ值均显著降低,尤以ＰＤＧＦ·ＢＢ的ＯＤ值减少最多．提示：ＤＤＰＨ能抑制ＨＥＣＣＭ引起ＰＡＳＭＣＳ的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ表达增多和细胞增殖。结果与大鼠实验观察相符。     

五灵胶囊对LPS诱导鼠枯否细胞p38MAPK信号转导通路的影响

目的:探讨五灵胶囊对脂多糖(LPS)诱导的大鼠枯否细胞(Kupffer cells,KC)p38MAPK信号转导通路的影响。方法:分离纯化KCs,60ng/ml LPS刺激建立LPS的肝细胞损伤模型;40只SD大鼠药物处理后,分离制备含药血清。实验分为四组:空白血清组、LPS+空白血清组、含药血清Ⅰ组(10.0g/kg)+LPS、含药血清Ⅱ组(6.25g/kg)+LPS。KCs产生促炎因子(I125放免法测定TNF-α、IL-6、IL-8,比色法测定NO生成量),采用Western blot法检测ERK、p-ERK、p38、p-p38、TNF-α和STAT3的蛋白水平。结果:1、空白血清+LPS组,TNF-α、IL-6、IL-8和NO浓度明显高于空白血清组;2、同空白血清+LPS组比较,含药血清Ⅰ、Ⅱ组TNF-α、IL-6、IL-8和NO水平明显降低;3、与空白血清组比较,空白血清+LPS组能上调KCs对p-ERK、P38、p-P38、STAT3和TNF-α表达(p<0.01,p<0.05),对ERK表达无影响(p>0.05)4、同空白血清+LPS组比较,含药血清Ⅰ+LPS、含药血清Ⅱ+LPS组p-p38、S...     

中华绒螯蟹各发育期APUD细胞的免疫细胞化学定位

使用12种哺乳类、鱼类、昆虫激素为抗原制备的抗哺乳类血清,应用链要和素－生物素过氧化物酶复合法免疫细胞化学技术对中华绒螯蟹1－5期Sou状细民体、大眼幼体、幼蟹体内及成蟹消化系统的APUD细胞进行鉴别和定位。结果在1－5期Sou状幼体及大眼幼体、幼蟹体内未见到典型的免疫活性阳性细胞;在成蟹消化系统中见到神经丝蛋白（NFP）、胰岛素（Ins）、血管活性肠肽（VIP）、降钙素（Cal）、五羟色胺（5－HT）、降钙素基因相关肽（CGRP）、生长激素（GH）、钙调素（CaM及蜕皮激素（MH）等9种免疫活性在其除了后肠以外的不同部位有各自的阳性反应表现,而物质（SP）、胰高血糖素（Glu）、神经特异烯醇酶（NSE）等3种抗血清在中华绒螯蟹成蟹消化系统中却未见其免疫活性阳性反应痕迹。本文着重描述以上9种免疫活性阳性反应在成蟹消化系统中分布情况及其阳性反应特征。     

几种激素在鳜胃肠道内分泌细胞中存在的免疫细胞化学证据

用链酶亲和素－生物素过氧化物酶（Strept Avidin-Biotin-Complex,SABC）免疫细胞化学方法,使用4种兔抗消化 道激血清对鳜胃肠道中的内分泌细胞进行鉴别和定位。结果在鳜鱼胃的贲门、幽门及肠道中均发现不同程度地存在着生长抑素和五羟色胺免疫活性内分泌细胞。在鳜的贲门上皮和贲门腺之间,幽门上皮和幽门腺之间均分布有生长抑素免疫活性阳性细胞,在贲门腺和幽门腺处的分布较密。这些含五羟色胺的肽能神经元具有典型的APUD（Amine Precursor Uptake and Decarboxylation）细胞特征,提示鱼类的胃肠道同哺乳动物的胃肠道一样富含肽能神经元;为神经－内分泌系统的研究提供有力的形态学依据,另外两种抗血清－高血糖素和胃泌素的免疫细胞化学染色在鳜的胃肠道的各部位均未发现阳性反应。     

烟草花粉母细胞减数分裂前期I肌动蛋白的免疫细胞化学定位

The Pollen Mother Cells of Nicotiana Rustica L. were studied using the techniques of immunofluorescence microscopy and protein A-colloidal gold IEM. Immunofluorescence microscopy indicates the presence of actin in both nuclei and cytoplasm. IEM observation shows that gold particles are present in cytoplasm, chromatin and cytomictic channels. These results indicate that actin has some relation with chromatin condensing at synizesis. Moreover, actin may also play an important role in cytomixis.     

影响肝星形细胞激活的免疫细胞

已知肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是一种具有多潜能的幼稚间质细胞,经一些能导致纤维化发生的细胞因子如转化生长因子(TGF)、血小板衍生生长因子(PEGF)等刺激后由富含维生素A类物质的静止表型转化为活化的肌成纤维(MFB)样表型,即发生了所谓的HSC激活[2,3]。MFB通过旁     

津白_3侏儒小鼠垂体前叶生长激素细胞的免疫细胞化学研究

津白_３侏儒小鼠（ｄＷ~ｔ）是１９８２年从津白_３纯系小鼠（ＴＡ_３）中发现,进而培育成侏的变种。本实验应用免疫细胞化学技术,对ｄｗ￣ｔ小鼠垂体前叶生长激素（ＧＨ）细胞进行观察,并根据体视学原理进行定量分析,以探讨ｄｗ~ｔ小鼠是否存在垂体发育缺陷。实验结果显示,ｄｗ~ｔ小鼠ＧＨ细胞的体积密度（Ｖｖ）和数密度（Ｎｖ）值均低于正常对照组,Ｐ＜０．０１～０．００１。表明ｄｗ~ｔ小鼠由于垂体前叶ＧＨ细胞数量减少,导致ＧＨ分泌不足,从而形成侏儒。     

大阪鲫鱼两种卵黄蛋白免疫细胞化学的研究

以电泳提纯的卵黄脂磷蛋白和卵黄蛋白Ｌ制备兔抗两种蛋白的抗血清,采用ＰＡＰ法对性腺成熟雌性大阪鲫鱼的肝细胞和卵母细胞进行两种蛋白免疫细胞化学位研究。肝细胞的粗面内质网上有强烈的卵黄脂磷蛋白的阳性反应,特别是在线粒体的基质中也发现卵黄脂磷蛋白的阳性反应,而另外一种类似于卵黄高磷蛋白的卵黄蛋白－卵黄蛋白Ｌ在肝细胞的粗面内质网和线粒体均呈现阴性反应,提示卵黄脂磷蛋白的前体物质存在于肝细胞的粗面内质网和线粒     

棘尾虫类神经肽的免疫细胞化学研究

用光镜、电镜免疫组织化学方法,在原生动物棘尾虫体内发现多种哺动物神经肽、肽激素和酷氨酸羟化酶免疫阳性物质：类Ｐ物质,类神经肽Ｙ（ＮＰＹ－Ｌｉｋｅ）,类胆囊收缩素（ＣＣＫ－８－Ｌｉｋｅ）,类生长抑素,类β－内啡肽,类促肾上腺皮质激素和类酷氨酸羟化酶。免疫细胞化学实验显示了这些肽类免疫阳性物质的分布。