生物样品冰冻蚀刻技术简介

虽然高压电子显微镜在研究生物材料方面已经显示了优越性,但它在分子生物学领域里的重要课题——生物膜形态结构的研究上的应用,还有待探索。而冰冻蚀刻(Freeze-etching)或冰冻断裂(Freeze-fracture)技术,则是目前国内外广泛用于生物膜结构研究的有效方法之一。     

酵母菌的冰冻蚀刻电镜观察

冰冻蚀刻电镜技术除已广泛用于研究细胞膜外,它还可以从不同层次、不同深度及不同方向暴露出细胞的内部结构,照片立体感鲜明,因此也是研究细胞结构的一种重要手段。材料和方法我们使用中国科学院成都生物研究所菌种     

中国林蛙胃上皮细胞紧密连接的冰冻蚀刻电镜观察

胃上皮细胞的排列较为紧密,连接装置特别典型、丰富。因此,是研究紧密连接形态结构的较好的材料,笔者已用冰冻蚀刻技术对草     

细菌表面S-层的结构及其功能和应用前景

细菌的细胞外壁一般由细胞壁和细胞膜组成 ,除此之外 ,在许多古细菌和真细菌中还有一层表面结构 ,称为表面层 (Ｓｕｒｆａｃｅｌａｙｅｒｓ)或称为Ｓ 层 (Ｓ ｌａｙｅｒｓ) ,它们是由蛋白质组成的晶格状结构 ,位于细胞壁或细胞膜外层 ,是生物进化过程中最简单的一种生物膜[1,2 ] 。图 1　细菌细胞表面Ｓ 层的冰冻蚀刻电镜照片[3 ]1　Ｓ 层的形态结构细菌的每一个分类群都存在Ｓ 层 ,涉及 3 0 0多个种 ,其中在古细菌中分布更广。与大多数原核细胞的其它表层结构不同 ,Ｓ 层只有通过电镜 ,特别是冰冻蚀刻技术才能清晰地观察到。在真细菌和古细…     

精子细胞高尔基体的冰冻蚀刻电镜观察

本实验用冰冻蚀刻方法观察大鼠精子细胞高尔基体的膜结构。冰冻蚀刻复型膜显示了高尔基体膜囊上的膜内颗粒和圆形凹陷结构,这些结构在高尔基体的各层膜囊以及GERL上的数目和分布是不同的。一般认为膜内颗粒代表镶嵌于生物膜类脂双分子层中的蛋白质和酶,因此,它们的数目和分布说明了精子细胞高尔基体各层膜囊结构的分子排列以及酶的活性是不一样的。圆形凹陷结构的具体性质还不清楚,它们可能与高尔基体膜囊融合运输小泡以及长出分泌小泡的过程有关。本文还把高尔基体各部位的膜内颗粒分布与它们的细胞化学反应联系起来进行了讨论。     

小鼠膀胱上皮的中间层细胞中存在Uroplakins

本文运用超薄切片、冰冻蚀刻及免疫胶体金标记等多种电镜技术并结合免疫组化、免疫荧光染色技术,直观地显示出小鼠膀胱上皮的中间层细胞存在Uroplakins,并在梭形泡膜上形成了与表层细胞类似的AUM结构,而且梭形泡的AUM结构也结合在中间纤维上。蛋白质免疫印迹反应进一步证实中间层细胞含有与表层细胞相同的Uroplakin Ⅰ和UroplakinⅢ等AUM蛋白的主要成份,从而为AUM的发生及其与细胞分化关系的研究提供了重要的实验证据。     

豆科根瘤的超微结构研究

Bergerson等于1958年开创了豆科根瘤超微结构的研究,并逐渐形成一门崭新的学科和科研领域。根瘤超微结构研究是指运用各种电镜技术(包括超薄切片、扫描、冰冻蚀刻、放射自显影、细胞化学和免疫电镜等),在亚细胞水平上研究根瘤在发育过程中的结构变化以及这些变化与根瘤发育和固氮的关系。归纳起     

人体染色体的扫描电镜观察

扫描电镜是近十年来迅速发展的一项大型精密电子光学分析仪器,我国于一九七三年开始试制,一九七五年有成品出厂。目前在生物学研究中,扫描电镜已广泛应用于观察细胞表面结构,结合冰冻蚀刻观察细胞内部结构的立     

中国细胞生物学学会在中国科学院上海生理研究所举办冻冰蚀刻样品制备学习班

1983年3月22日—3月28日,中国科学院上海生理研究所电镜室,受中国细胞生物学学会的委托,开办了一期冰冻蚀刻样品制备学习班。这次学习班的目的是推广冰冻蚀刻技术的应用。学习班的主要内容是讲解冰冻蚀刻的原理、具体操作、图象分析和应用。首先由生理     

怎样在经费不足的情况下上好本科“细胞培养”实验课

“细胞培养”已成为现代生物学和生物工程的一项重要基本技术,是细胞生物学、遗传学、免疫学等许多学科的主要研究手段。在大学本科开设“细胞培养”实验不仅是让学生学习这一技术方法,同时也能使学生建立对活细胞形态结构、生长、分化等感性认识。因此,国外在70年代前就已在大学本科开设了这项实验,英国D.O.Hall等1975年的《细胞生物学实验》     

应用冰冻蚀刻技术观察北方禾谷花叶病毒

冰冻蚀刻电子显微镜技术,在生物医学研究方面应用较多,但是在植物病毒研究方面报道极少。1985年我们对日本国小麦上的北方禾谷花叶病毒(Northern cereal mosaic virus简称NCMV)弹状病毒粒子进行了试验,获得了比较满意的结果。     

用发环捞取冰冻蚀刻复型膜

发环是实验胚胎学术中常用的工具,用来割取胚胎组织。在电镜术中也曾有人用来捞取超薄切片,将之放到带有支持膜的铜网上,但目前各实验室都不采用此方法。生物组织冰冻蚀刻复型膜同样需要将膜捞到铜网上才能进行电镜观察。原来我们采用吸管捞取法,或用铜网捞取,结果发现在频繁的清洗过程中,复型膜往往粘贴在玻璃壁上,或     

黑斑蛙胃上皮细胞紧密连接的冰冻蚀刻电镜观察

冰冻蚀刻技术能使细胞连接立体地显示出来,比用超薄切片技术或镧渗透法获得的结果更容易分析,而且更接近于生活状态,所以被广泛地用于研究动物、植物、微生物的细胞膜和细胞间的连接装置。动物多细胞间保持一定的连接关系,细胞连接在维持机体的正常活动中起着重要作用。胃上皮细胞排列紧密,连接装置特别丰富,因此是研究紧密连接几何形状较好的材料。本文初步报道黑斑蛙胃上皮细胞紧密连接的形态结构。材料和方法黑斑蛙(Rana nigromaculata)采自成都平原。取样按常法进行。实验前,用两栖类生理盐水将组织条洗1至2次后,置于30%的甘油两栖类生…     

脊椎动物和无脊椎动物的光感受器结构

光感受器是感光细胞一个特化部分。动物通过视觉来感知外界多变的环境,首先由光感受器将光能转变为化学能。对感光器官结构研究,始于上世纪后叶。随着科学技术的高速发展,透射电镜、扫描电镜和冰冻蚀刻复型等新技术的广泛应用,对感光细胞结构的研究,     

冰冻断裂方法在豌豆叶光合膜亚分子结构观察中的初步应用

当前在光合作用研究领域内,光合膜结构与功能的研究极为活跃;而电子显微镜冰冻断裂和冰冻蚀刻方法则是揭示生物膜(包括光合膜)亚分子结构的一种有效手段。冰冻断裂就是将生物材料迅速冷却固定后施以外力,使之断裂,再利用低温真空复型技术将材料的断裂面制成复型后于电镜下观察。如果材料断裂后,使其温度适当上升,让断裂     

电子显微镜新进展及其生物学研究技术简介

自五十年代电子显微镜技术广泛应用于生物学研究领域以来,人们才能在亚细胞水平上探索生命的奥秘。随着研究的深入,电镜技术本身也在迅速发展。广大生物学研究工作者也越来越多地采用了各种不同的电镜技术。本文简要介绍近几年来有关透射电镜、扫描电镜、扫描透射电镜的新进展以及电镜放射自显影、免疫电镜、电镜细胞化学、冰冻蚀刻、生物高分子的电镜研究等生物学电镜研究技术,以供选择研究方法时参考。     

小鼠膀胱上皮的中间层细胞中存在Uroplakins

本文运用超薄切片、冰冻蚀刻及免疫胶体金标记等多种电镜技术并结合免疫组化,免疫荧光染色技术,直观地显示出小鼠膀胱上皮的中间层细胞存在Ｕｒｏｐｌａｋｉｎｓ,并在梭形泡膜上形成了与表细胞类似的ＡＵＭ结构,而且梭形泡的ＡＵＭ结构也结合在中间纤维上,白质免疫印迹反应进一步证实中间层细胞含有与表层细胞相同的ＵｒｏｐｌａｋｉｎＩ和ＵｒｏｐｌａｋｉｎⅢ等ＡＵＭ蛋白的主要成分,从而为ＡＵＭ的发生及其与细胞分化关系的     

苯乙烯树脂割断法在生物样品制备中的应用

近年来样品割断法已成为扫描电镜样品制备的新技术之一.早在1968年Kachler已利用冰冻蚀刻复型技术,在透射电镜下观察了细胞内部结构.1970年Arenberg等对样品制备方法作了进一步改良,使扫描电镜也能观察细胞内部结构.1972年日本田中敬一设计了一种冷冻割断装置,观察组织块割断面上暴露出的各种管腔内面,以及割断面上细胞内的微细结构.目前冷冻割断技术已发展成树脂割断法、有机溶剂割断法、水溶性包埋剂割断法等多     

电子显微镜在细菌学研究中的应用技术

近年来,由于电子显微镜和相差显微镜的结合使用,由于超薄切片和阴性反差染色技术的改进,利用超高压电子显微镜及冰冻蚀刻法观察“活”标本,利用扫描电子显微镜观察细菌的表面结构,加上电镜放射自显影及免疫电镜的使用,从而对细菌微细结构的观察获得了良     

Hall与Rao著《光合作用》一书新版简介

Hall与Rao写的《光合作用》一书,篇幅不多,却扼要地介绍了光合作用过程及其研究现状,因此受到广大读者欢迎。我国1984年曾发行这书第二版的中译本。1984年该书第三版增订本出版,我们曾将它和第二版不同之处作了介绍[沈允钢等,植