Act-1核心启动子转录的EGFP基因在秀丽隐杆线虫体内的表达

克隆获得的秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)Act-1基因的核心启动子,经BglⅡ和HindⅢ限制性内切酶消化后,与用相同酶消化的pEGFP-4.1载体连接(由pEGFP-N1去掉CMV启动子形成),构建重组表达载体Pact-EGFP。通过脂质体介导转染Vero细胞,结果发现EGFP在Vero细胞中有表达,但表达量很低。通过显微注射将Pact-EGFP与pRF4共注射到C.elegans性腺,结果发现EGFP能够在C.elegans的皮层、副皮层以及咽部表达,根据表达部位不同,获得了2种转基因线虫株。研究结果显示:EGFP在C.elegans体内的表达水平明显高于在Vero细胞内的表达,表明C.elegansAct-1基因的核心启动子区域可能存在与转录水平密切相关的独特的转录调节元件。该研究为进一步实现寄生性线虫基因在C.elegans表达提供了参考。     

应用绿色荧光蛋白研究外源基因在造血细胞的表达调控

以增强型绿色荧光蛋白为报道分子,研究双基因逆转录病毒载体介导小鼠骨髓细胞的基因转移中,SV(simianvirus)40启动子和内部核糖体进入位点(internalribosomeentrysite,IRES)对双基因共表达的影响。构建双基因中间序列分别为SV40启动子和IRES的载体pLESN和pLEIN。经包装获得较高滴度的病毒上清,以共培养的方式感染5-氟尿嘧啶预刺激的小鼠骨髓细胞。流式细胞仪检测表明转染效率约25%,PCR证明EGFP基因整合至骨髓细胞基因组。半固体培养转基因细胞7d,LEIN组获得具有G418抗性的集落中98%表达绿色荧光,而LESN组54%。结果表明:在双基因逆转录病毒载体介导的小鼠骨髓细胞的基因转导中,IRES与内部SV40启动子相比,更能保证双基因的共同表达。     

质粒研究与载体构建

950784一套有潮霉素抗性的逆转录病毒载体的构建[英]/Gaken,J.…,BioTechniques.-1992,13(1).-32,--'34[译自DBA,1992,11(17),92-09536] 构建了髓细胞增生性肉瘤病毒(MPSV)的4种载体,利用潮霉素一B可选择被感染的细胞。将新霉素一磷酸转移酶neo编码序列从质粒pTKmos一3中去除,再将含潮霉素抗性(HmR)基因的钝端HindⅢ一XhoI片段(1332bp)连到胸腺嘧啶激酶TK启动子的HindIII 3,位点上,构建出质粒pTK—Hygro。分别从载体MPSV sup28和MsPneo—sup取掉一个1.9kb的XhoI片段(含neo基因),再将一个1712bp的SalI/XhoI片段(含SV40启动…     

甲醇酵母表达系统高拷贝数整合型表达载体的构建

以甲醇酵母(Hansenula polymorpha)表达系统的Yip型表达载体pJF5-1为基础,通过引入宿主来源的一个rDNA随机顺序和由SV40早期启动子控制的G418抗性基因(neo)及对野生型标记基因Hpleu2启动子大部分上游序列的缺失,构建了一个高拷贝整合型表达载体pMIRH。有关转化、筛选和拷贝分析等试验结果表明,由pMIRH可产生含高拷贝数载体的转化子,并可通过由leu2+筛选和G418抗性筛选所组成的二级筛选方法富集这些含高拷贝数载体的转化子。有关完整DNA和消化DNA Southern杂交分析结果进一步表明,上述高拷贝数的载体以串联重复排列的方式整合于宿主基因组。     

人β干挠素基因在SV40晚期启动子控制下在小鼠骨髓瘤细胞中表达

人成纤维细胞干挠素(Hu-IFN-β)基因的HindⅡ片段,插入载体pSV2-dhfr质粒中SV40晚期启动子(Lp)下游PvuⅡ位点处。用此重组质粒与带有黄嘌呤磷酸核糖转移酶(XGPRT)基因的质粒pSV2-gpt共转染次黄嘌吟核糖转移酶(HGPRT)基因缺陷的小鼠骨髓瘤(SP2/0)细胞。在含有霉酚酸和氨基喋呤的选择培基中,筛选出有效地组成性表达的细胞株。在未加氨甲喋呤压力倍增的条件下,Hu-IFN-β抗病毒活性为1275U/10~5细胞,1ml,48小时。     

利用多重筛选机制提高山羊乳腺上皮细胞基因打靶的效率

构建了山羊β-酪蛋白基因座基因打靶载体pGBC—GFP—neo,载体包含了正负筛选标记基因neo和tk,以及无启动子的GFP基因。打靶载体线性化后用脂质体包裹转染山羊乳腺上皮细胞,利用G418和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选,共得到抗性细胞克隆51个,对抗性克隆利用激素诱导β-酪蛋白基因启动子指导GFP表达,得到GFP表达阳性细胞克隆17个,对其中4个生长状态良好的克隆PCR检测验证后用于核移植,克隆胚发育率为59．5％,部分发育到桑椹胚或囊胚。     

乙型肝炎病毒adr和adw亚型表面抗原在非洲绿猴肾细胞中的表达

用pSV2-gPt作载体,将乙型肝炎病毒adr亚型的全序列基因和adw亚型的Bgl Ⅱ大片段DNA分别插入PSV 2-gpt BamHI及Bgl Ⅱ切口,获得4种重组质粒。它们都含有SV40DNA复制起始点、早期启动子、大肠杆菌黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(XGPRT)和氨苄青霉素抗性基因(Apr)。经酶切鉴定,选出正向重组质粒PSV 2-gbr1和pSV 2-gbw1,并分别转化Vero细胞,在选择培养基的压力下,两个质粒所含乙型肝炎表面抗原DNA均得到表达。     

一种基于塞姆利基森林病毒复制子的新型复制子载体

RNA复制子是能自主复制的病毒RNA。基于RNA复制子的表达载体和基因疫苗比常规真核表达载体和DNA疫苗具有更大的优越性。以塞姆利基森林病毒RNA复制子衍生的真核表达载体pSFV1为骨架 ,插入CMV立即早期启动子和SV40晚期Poly(A)信号 ,构建了一种完全基于DNA的复制型表达载体pSFV1CS ,将增强型绿色荧光蛋白基因EGFP插入其中 ,构建了重组质粒pSFV1CS EGFP ,通过转染 2 93T细胞 ,证实外源基因能在其中高效表达。该载体可用于表达真核蛋白和构建复制子载体疫苗。     

人工转录因子促进外源基因在CHO细胞中的高效表达

以酵母转录因子GAL4中1-147位氨基酸序列为构建人工转录因子的DNA结合结构域,单纯疱疹病毒转录激活子VP16中12肽(DALDDFDLDMLG)的4个串联重复作为人工转录因子的功能结构域,用SV40的核定位序列(NLS)将两部分连接起来,构建了人工转录因子GVP4并将其克隆进入表达载体pcDNA3·1/Hygro( )中。将不同长度的人工转录因子结合序列构建在外源基因表达载体pcDNA3·1( )启动子CMV的上游,分别连接外源基因EGFP和tPA。用表达人工转录因子和外源基因的载体共转染CHO细胞,EGFP和tPA在含不同数量人工转录因子结合位点表达载体pcDNA3·1( )转染的CHO细胞中的表达水平呈现不同程度的提高。其中,以引入10个人工转录因子结合位点的表达载体的效果最明显,EGFP和t-PA的表达效率均提高2~3倍。结果表明,人工转录因子能有效地促进外源基因在哺乳动物细胞中的表达。     

汉滩病毒S基因及其5'端真核表达载体的构建及在细胞中的表达

体外研究汉滩病毒(HTNV)S基因及其5'端表达的意义,为核蛋白T细胞表位的研究奠定基础.设计2套引物,用PCR方法从PBV220-S22原核质粒中扩增出S基因全读码框(37-1326bp)及S基因5'端(37-501bp),用TA克隆将其克隆入pcDNA3.1/V5-His-TOPO载体中,成功构建pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N真核表达载体,并通过脂质体转染至Vero细胞中,进行了瞬时表达.间接免疫荧光成功检测到pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N在Vero细胞中的表达.pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N真核表达载体有较高的转染效率,目的基因能在宿主细胞中表达,有利于研究HTNV-S基因在T细胞表位研究中的意义.     

用离散量预测蛋白质的结构型

基于蛋白质的结构类型决定了它的二级结构序列的概念,用二级结构序列参数Nα,Nβ,Nβaβ,N(βαβ）构成离散源,并计算离散量D（Xα）,D（Xβ）,D（Xα＋β）,利用离散增量预测蛋白质的结构类型,它是由这个蛋白质的离散量D（Xn）与四个标准离散D（Xα）,D（Xβ）,D（Xα／β）,D（Xα＋β）之间离散增量的最小值所决定的,预测结果表明,准确率分别达到84．8％（标准集）和83．3％（检验集）。     

方差分析在台木类木化石鉴定中的应用

本文用方差分析区别具台木类木材的三个种：太原台木(Dadoxylon taiyuanensis),生根无髓根（Amyelon radicans)和徐氏无髓根（A.xui),并同国外的种比较,结果表明,用这种方法能定量地研究植物性状之间的区别,并得到较好的效果。     

竹红菌素的氯代反应及氯代产物的光物理与光动力活性

本文研究了红竹菌素与氯气的反应,发现经过氯代修饰后的竹红菌素氯代产物具有更好的吸光能力及更高的光动力活性和光稳定性,是一类更好的新型光敏化剂,化合物Ｃ是竹红菌素的七员环上脱乙酰基后的产物,经研究,结果与ＨＡ和ＨＢ相对应。     

叶表皮结构在榆属分类中的应用

本文利用扫描电子显微镜对榆属9种1变种的成熟叶表皮结构进行了观察,认为榆属叶表皮结构在扫描电镜下存在着明显的差别,可以作为榆属分种的辅助特征。     

多聚赖氨酸引起林蛙卵表面的聚集以及对分裂沟的影响

1.多聚赖氨酸能使经异硫氰基荧光素染色的卵表面均匀分布的荧光聚集成点状或块状的斑块,荧光聚集时膜下的色素颗粒随之同步聚集。早期的聚集有三种方式。2.聚集的迟早和出现斑块的大小在卵表面不同区域是不同的。腹方新月区最早;灰色新月区次之;动物性半球稍迟,荧光和色素颗粒最后都集中到动物性极形成顶帽,其余区域成为失去色素颗粒的区域;聚集引起收缩,最后植物性半球常常破裂。3.未受精卵亦出现与上述相同的反应,这提示腹方新月区可能是精子进入卵子的区域。4.细胞松弛素不能抑制多聚赖氨酸引起的聚集。5.多聚赖氨酸能抑制分裂沟的出现,能使已出现的分裂沟消失。6.失去色素颗粒区域的细胞膜在形态、功能等方面与分裂沟中的新膜相同。对新膜出现的位置和形成因素进行了讨论。     

禄丰古猿雌性头像的复原

本文叙述了制作禄丰古猿雌性复原头像的根据和过程。复原像以宽阔的眶间宽和中面部,以及低平的鼻根和鼻梁硬骨部为其显著的特点。它的“鼻—前颌部”侧面轮廓和软鼻形态与猩猩的较相似。它的鼻属猿型鼻,有类似大猩猩的和人形化的性状。     

中国鸟类种数普查沿革和展望（为纪念动物分类学报创刊三十周年而作）

本追溯中国鸟类种数历来普查结果。初于明末李时珍的＜＜本草纲目＞＞（１５９６）提出约７７种。至清朝英国人Ｓｗｉｎｈｏｅ于１８６３年发表的第一篇中国鸟类分类名录,列举４５４种。嗣经百余年几次普查统计,现由本加以总结,计得１２４３种,与Ｓｗｉｎｈｏｅ的名录相较,种数的增加几乎达到三倍之多。     

酸奶中乳酸菌含量的检测

目的检测酸奶发酵前后以及贮藏期间的乳酸菌活菌数及酸度变化,以对酸奶的质量进行控制.方法应用高层半固体琼脂试管法. 结果酸奶中乳酸菌含量极高,达2.65×1010个/ml以上,并随贮藏时间的延长而发生变化. 糖对酸奶的含菌量无明显影响.双菌酸奶比单菌酸奶含菌量高,常可达到倍增,pH值随发酵和贮藏进程而下降.结论高层半固体琼脂试管法操作简便、快速、准确、活菌检出率高.     

天山北麓历史时期的环境演变信息

近 2 0 0 0年以来 ,天山北麓的气候有冷暖干湿波动 ,但总体干旱的基本面貌未发生根本变化。植被在森林的上下界限、平原河谷林的发育程度、平原低地草甸的面积上 ,随气候的变化而发生波动。山地生态系统比较稳定 ,平原生态系统相对不稳定。尤其是平原河流和湖泊抗干扰性极差 ,容易发生改变 ,同时也引起局地小气候及生物群的变化。由于气候变化和人类活动的影响 ,平原地区的水系变化很大 ,河流流量减少、流程缩短、尾闾湖消失、地下水位降低、扇缘溢出带北移等成为普遍现象。天山北麓是自然绿洲发育比较好的地带 ,由于人类活动的影响 ,自然绿洲大多为人工绿洲取代 ,自然绿洲功能弱化 ,基本失去了改善荒漠环境、生物栖息地、保护荒漠区生物多样性等多种生态功能。该区新石器时代以来就有人为活动 ,早期以狩猎、牧业活动为主 ;中期以牧业为主 ,农业为辅 ;后期以农业为主 ,牧业为辅 ,人类对环境的影响有相当长的时间。清朝以来 ,尤其是解放后 ,人类对环境的影响作用急剧加强 ,成为近代环境变化的主导因素 ,主要表现在对水的控制而产生的一系列水系、植被、沙漠变化     

白桦雌花发育、大孢子发生及胚胎发育的解剖学观察

白桦雌花从开花到雌性器官的成熟需经历1个月左右的时间,解剖学观察表明：四月下旬越冬的雌蕊原基开始了活跃的分裂和分化。子房和柱头开始生长。四月末开花,五月初授粉。此后胚珠开始长大。五月中旬即分化形成珠被,珠心,珠被为单层珠被,胚珠为厚珠心胚珠,胚珠倒生,五月中下旬,珠心内产生大孢子母细胞,一周左右发育为成熟胚囊-七细胞八核胚囊,五月末完成双受精,白桦胚胎发育经过合子,原胚,球形胚,心形胚和鱼雷形胚等时期最后发育成熟,胚乳发育与胚胎同步,即受精的极核进行几次分裂后形成核型胚乳,胚乳核不断增多,在形成心形胚后胚乳细胞形成细胞壁。