哺乳动物早期胚胎体外培养的研究

体外培养哺乳动物卵细胞技术是实验胚胎 学和发育遗传学研究的重要手段。实验哺乳动 物如小鼠,仓鼠、大鼠和兔等卵细胞的体外培养 已有许多报道^[1,3,4,6-11],尤其是小鼠卵细胞的培 养工作更多,可以说已是常规化了。但是我国 这方面的研究还较少,就连体外培养的早期受 精卵,也往往不能发育。     

哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的研究进展

哺乳动物胚胎在体外培养中普遍存在早期发育阻滞的现象。对此,人们用形态学、生物化学、分子生物学、显微操作等手段开展了磷酸、葡萄糖、次黄嘌呤和细胞质因素对早期胚胎发育阻滞的影响的研究。本综合分析了共培养系统的优缺点。说明了采用完全成分已知的培养液对进行有关研究的必要性。列出了有效运用于克服小鼠、大鼠、仓鼠、兔、猪、羊、牛、猴等动物早期胚胎阻滞的成分知的培养液的名称。     

哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的研究进展

哺乳动物胚胎在体外培养中普遍存在早期发育阻滞的现象.对此,人们用形态学、生物化学、分子生物学、显微操作等手段开展了磷酸、葡萄糖、次黄嘌呤和细胞质因素对早期胚胎发育阻滞的影响的研究.本文综合分析了共培养系统的优缺点.说明了采用完全成分已知的培养液对进行有关研究的必要性.列出了有效运用于克服小鼠、大鼠、仓鼠、兔、猪、羊、牛、猴等动物早期胚胎阻滞的成分已知的培养液的名称。 Abstract:The early embryo developmental block is a common phenomenon in mammal when embryos are cultured in vitro.Many studies of phosphorus,glucose,hypoxanthine and cytoplasmic factors on early embryo developmental block carried out by different methods such as morphology,biochemistry,molecular biology and micromanipulation have been reviewed.The merit and shortcoming were analyzed and the necessity of using simple or components limited media overcoming early embryo developmental block were also reviewed.Media that have been shown effective in overcoming early embryo developmental block in mouse,rat,hamster,rabbit,pig,sheep,cattle and monkey were listed.     

小鼠2-细胞胚胎单个卵裂球体外培养及其发育形成囊胚的玻璃化冷冻保存技术的研究

单个卵裂球分离和培养是生产同卵双胎或一卵多胎动物的一种有效方法。在羊和牛已经获得了来源于2-细胞和4-细胞期胚胎的单个卵裂球的活体后代;在兔也获得来源于4-细胞胚胎的单个卵裂球后代;在猪已获得8-细胞单个卵裂球的后代。但多数的研究者发现,小鼠单个卵裂球培养后的体外发育率、移植妊娠率和产仔率都很低。上述均为新鲜胚移植结果,至于分离后卵裂球发育成的囊胚再进行玻璃化冷冻保存尚未见报道。本实     

PGE2、PGF2α和Iloprost对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响

目的研究PGE2、PGF2。以及Hoprost（PGl2的稳定类似物）对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响。方法在含0．5％BSA的mCZB液中分别添加0、10^-4、10^-5和10^-6mol／L的PGE2,0、10^-4、10^-5和10^-6mol／L PGF2α以及0、1×10^-6、2×10^-6和4×10^-6mol/L Iloprost,观察小鼠2-细胞胚胎的体外发育,同时利用H33342染色进行囊胚和孵化囊胚的细胞核计数。结果添加PGE2、PGF2α以及Iloprost的各处理组2-细胞胚胎体外培养的囊胚率和孵化率均显著低于对照组（P〈0．05）,但各处理组与对照组之间在囊胚或孵化胚胎的细胞数上差异不显著（P〉0．05）。结论培养液中添加这三种前列腺素均不利于小鼠2-细胞胚胎的体外发育,但不影响囊胚或孵化胚胎的细胞数。     

哺乳动物早期胚胎细胞染色体的制备

实验动物外周血及骨髓细胞染色体的制片 技术,已作为一种检测手段,广泛地应用于ik 遗传、动物分类学以及医学的研究中。为了探 索理化因素对动物和人体的影响以及人类群体 中染色体的多态现象,也必须分析染色体。近 年来,在实验动物领域内,科研工作者围绕着单 性生殖、细胞融合、非整倍体和多倍体的诱发, 以及早期胚胎发育过程中DNA 的晚复制等方 面,开展了大量的工作,并已取得了一定的进 展。当前,迫切需要一种简便可靠的检查动物 胚胎早期发育阶段的核型的技术。     

小鼠胚胎体外培养条件的研究

为了探讨小鼠胚胎在体外发育过程中的最佳方案,我们将从超排昆明小鼠取出的５４３枚受精卵经过不同的培养液（Ｍ１６、Ｍ１６＋ＯＥＣ、Ｇｌｕ－ＦｒｅｅＭ１６和Ｇｌｕ－ＦｒｅｅＭ１６＋ＯＥＣ）及不同的培养微环境处理后,观察胚胎体外发育的过程。结果表明,葡萄糖在胚胎发育早期（２细胞期）有比较明显的发育阻断作用,同种输卵管上皮（ＯＥＣ）共同培养能够有效地抑制这种阻断作用;葡萄糖对胚胎８－１６细胞期及以后阶段的发育具有十分重要的作用,而此时ＯＥＣ的作用则不明显;除了葡萄糖外,在早期可能还有其它一些象磷酸盐、重金属离子的物质也能起胚胎发育阻断作用。同时还发现培养微环境的稳定也是胚胎发育的重要保证条件,石蜡油的封盖能够保持某种特定微环境而支持胚胎的体外发育。     

乙醇和液体石蜡对早期小鼠胚胎体外发育的影响

哺乳动物早期胚胎体外培养技术是研究早期胚胎发育和胚胎工程的基本手段。目前最常用的方法是采用液体石蜡覆盖的液滴培养法。该方法中所用液体石蜡和ＣＯ２质量的好坏对体外培养胚胎的发育有严重影响。本文就此对几种中国产液体石蜡和含气体乙醇的ＣＯ２作为胚胎体外培养条件对胚胎发育的影响进行了研究。取成熟小鼠受精后的２细胞和８细胞胚胎分别用于两组实验。一、不同品牌液体石蜡对胚胎发育的影响。体外培养采用液体石蜡覆盖液滴培养法。所用液体石蜡均经过水洗。ＣＯ２为经过一次水滤的工厂粗制品,其乙醇含量经气相色谱仪测定约为０．１８％。二、不同浓度乙醇对胚胎发育的影响。采用试管培养法,采用乙醇浓度不同的培养液。表１为五个不同厂家的液体石蜡对早期胚胎体外培养的影响。其中,Ⅰ、Ⅱ（上海、北京）号两种产品符合胚胎体外培养的要求,可使２细胞后期胚胎发育到囊胚的比率达到９２％以上,对细胞没有毒害作用（图１Ａ和图２Ａ、Ｂ）。其余,则不符合要求,对细胞有毒害作用（图１Ｂ）,甚至用无水乙醇和水先后各洗涤３至４遍,亦无改善。由于影响液体石蜡质量的硝基萘可溶于乙醇而被清除,说明这些不合格的液体石蜡中可能还含有其它对胚胎发育有毒害作用的未知因素,有待进一步查明     

乙醇和液体石蜡对早期小鼠胚胎体外发育的影响

哺乳动物早期胚胎体外培养技术是研究早期胚胎发育和胚胎工程的基本手段。目前最常用的方法是采用液体石蜡覆盖的液滴培养法。该方法中所用液体石蜡和CO2质量的好坏对体外培养胚胎的发育有严重影响。本文就此对几种中国产液体石蜡和含气体乙醇的CO2作为胚胎体外培养条件对胚胎发育的影响进行了研究。取成熟小鼠受精后的2细胞和8细胞胚胎分别用于两组实验。一、不同品牌液体石蜡对胚胎发育的影响。体外培养采用液体石蜡覆盖液滴培养法。所用液体石蜡均经过水洗。CO2为经过一次水滤的工厂粗制品。其乙醇含量经气相色谱仪测定约为0．18％。二、不同浓度乙醇对胚胎发育的影响。采用试管培养法。采用乙醇浓度不同的培养液。表1为五个不同厂家的液体石蜡对早期胚胎体外培养的影响。其中：I、II（上海、北京）号两种产品符合胚胎体外培养的要求,可使2细胞后期胚胎发育到囊胚的比率达到92％以上,对细胞没有毒害作用（图1A和图2A、B）。其余,则不符合要求,对细胞有毒害作用（图1B）,甚至用无水乙醇和水先后各洗涤3至4遍,亦无改善。由于影响液体石蜡质量的硝基萘可溶于乙醇而被清除,说明这些不合格的液体石蜡中可能还含有其它对胚胎发育有毒害作用的未知因素,有待进一步查明。商品液体石蜡经水洗能够提高其胚胎培养效率。即使是上海产品（I号）,如果不经水洗,2细胞胚胎也只能发育到桑椹阶段。但是,水洗后的液体石蜡需静置至油水彻底分离,才能正常使用。另外,这5种液体石蜡的比重各不相同。比重相关最大的I号和II号产品均符合培养要求,说明液体石蜡的比重对胚胎的正常发育没有影响。表2为各种乙醇浓度对8细胞胚胎发育的影响。当乙醇浓度达到0．1％时,即可使8细胞胚胎发育为囊胚的比率下降为73．9％;达到0．8％以上时,胚胎甚至不能发育。可见,培养液中若含有乙醇将会严重影响胚胎的体外培养。这除了由于水滤降低了CO2中气体乙醇的含量外,还可能是由于液体石蜡覆盖培养液滴后,对气体乙醇的渗入有一定阻作用所致。因此,在胚胎体外培养中不必非使用价格昂贵的纯CO2不可。     

小鼠电融合四倍体胚胎早期发育的研究

多倍体发育现象在低等动物,尤其是在无脊椎动物中比较普遍,在哺乳动物中多倍体往往发育到胚胎早期就死亡,因而在自然界中不能存活。探讨哺乳类四倍体不能存活的原因是当今生物学研究的热点问题之一。目前,电融合技术是大量获得四倍体胚胎的主要手段。本以8－12周龄昆明小白鼠为实验对象,取其2－细胞胚胎于Whitten氏液中进行电融合,再移入CZB液中培养。电刺激的条件分别为：1．0kv/cm,40μs,和0．8kv/cm,80μs。对融合胚发育的状态、细胞数目及染色体组成等进行观察的结果表明,融合胚培养24小时后发育到4－细胞期,并发生致密化（Tab.1)。融合胚的囊胚形成时间与体内发育的同期胚胎及体外培养的同期二倍体胚胎基本一致（Tab,2;Fig.1)。融合囊胚的细胞数平均为13．0±4．95,显（P＜0．01）少于体外发育囊胚（37．0±5．92）和体内发育囊胚（41．6±2．4）的细胞数（Tab.3)。融合胚各个分裂相的染色体数目分布情况见Fig.2,其四倍体（4n＝80）率为42．86％,非整倍体率达57．14％。而对照组的体内发育囊胚的非整倍体率仅为11．54％;（Tab.4),与Kaufman的结果（12．4％）很接近,说明本实验中的染色体制备技术和分析方法是可行的。融合囊胚的细胞数目减少和高发的非整倍体率可能是四倍体胚胎发育能力差的原因。     

小鼠2,4,8—细胞胚胎卵裂球体外培养的研究

以ＣＺＢ为基础培养液,培养小鼠２、４、８－细胞胚胎的卵裂球,研究葡萄糖、牛磺酸和胰岛素对１／２卵裂球体外发育的影响及１／４、１／８和２／８卵裂球的体外发育规律。２－细胞胚胎卵裂球在ＣＺＢ中和在添加牛磺酸的ＣＺＢ中培养,其囊胚发育率（分别为９２％、８９％）无显差异（Ｐ＞０．０５）。胰岛素在少量葡萄糖存在的情况下,不影响卵裂球的囊胚发育率;在无葡萄糖时,卵裂球的囊胚发育率（３８％）显降低。牛磺酸在     

哺乳动物体细胞异种核移植胚胎早期发育的研究进展

体细胞异种核移植是指将一个物种的体细胞移植到另一物种的去核卵母细胞中,移入的体细胞核在受体胞质中重编程并发育成新个体的实验方法.该方法为拯救濒危物种和获取灵长类胚胎干细胞提供了可能的途径.但这方面的研究目前还只获得初步的进展,核重编程不完全以及异种胚胎的囊胚率低仍是其面临的主要难点.本文从基因表达、表观重编程、线粒体异质性、核重塑和核移植体系优化等方面入手,介绍近年来哺乳动物体细胞异种核移植的研究进展,并探讨异种重构胚重编程所面临的关键问题和可能获得成功的方法.     

哺乳动物早期胚胎细胞的极性与分化

哺乳动物早期胚胎细胞具有极性,在桑椹胚以前细胞极性由不稳定变为稳定。细胞极性包括表面极性和细胞质极性。细胞极性与滋养层和内细胞团两种细胞系的建立密切相关。细胞的极化使细胞形成顶-基轴,细胞分裂后,顶半球产生的极性子细胞分化为滋养层,基半球产生的非极性子细胞建立了内细胞团。内细胞团偏向胚泡一侧,使胚胎形成了胚-对胚轴(EA轴)。细胞分化是许多因素的综合效应,不能简单地归结为决定子的单独作用。     

小鼠胚胎干细胞体外发育分化模型

胚胎干细胞 (Embryonicstemcell ,EScell)是多潜能性细胞 ,它在体外既可维持不分化而无限增殖 ,又能参与胚胎发育分化为各种类型细胞和组织而形成器官 ;小鼠ES细胞可供的数量大、在体外培养条件可进行精确调控、实验比较经济加上现代基因及其他生物操作等技术 ,因此小鼠ES细胞体外发育分化系统被广泛地作为模型系统加以利用。小鼠ES细胞体外发育分化研究为推动其他哺乳类动物以及人的ES细胞研究 ,从而将更好地进行细胞、组织工程实验为人类细胞组织和基因治疗服务创造了有利条件。本文将ES细胞体外发育分化情况加以概述 ,以便更好地开展ES细胞体外研究     

家兔早期胚胎细胞发育能力的研究

The developmental potential of rabbit embryonic cells was studied through making chimera by separate introduction of inner cell mass from 96-h-old p. c., 120-h-old p. c., and 144-h-old p. c. of grey rabbits into 96-h-old p. c. blastocysts of New Zealand white rabbits. A total of five overt chimeras were obtained including two fertile males, two fertile females and one sterile male, from the ICM cells of 96-h-old and 120-h-old embryos but none was obtained from 144-h-old cells. Histological examination of the gonad showed that the sterile chimera derived from 120-h-old ICM cells with an ovotestis on both sides. Follicles and seminiferous tubules developed in the cortex and medulla of the gonad, respectively. Neither of them developed into functional germ cells. Analysis of karyotypes of peripheral blood showed that both XX and XY coexisted in lymphocytes. These results indicated that the sterile male chimera was a XX/XY sex chimera derived from ICM cells of donor and recipients with different sex, so as to the chimera with XX and XY genotypic cells. From the results mentioned above we may conclude that the ICM cells at 120-h-old p. c. are still pluripotential, they can not only participate in development into somatic components but also develop into germ cells. The potential of 144-h-old p. c. ICM cells seems to be rather restricted.     

家兔早期胚胎细胞发育能力的研究

本文利用胚泡注射法制作嵌合体对家兔交配后96,120和144小时的ICM细胞的发育能力进行了研究。供体胚胎取自青紫兰灰免,受体胚胎取自新西兰白兔,结果表明96和120小时供胚的ICM细胞与96小时受胚胚泡组合后均能参与发育,形成嵌合兔,144小时者未获得嵌合体。由于120小时的ICM细胞发育的2只表型为雄性的嵌合兔,其中1只不育,其性腺和外周血核型表明不育兔为xx/xy性嵌合,性腺中有处于不同发育程度的卵巢和精细管,外周血含xx和xy两种核型。本实验结果首次证明家兔交配后120小时胚泡的ICM细胞仍具有参与嵌合体发育的能力。它不仅能参与体细胞的分化,并具有形成生殖细胞的能力。交配后144小时胚泡的ICM细胞其发育能力似乎已发生了局限。     

模拟微重力环境对昆明小鼠早期胚胎体外发育的影响

90年代初,美国航空航天局(NASA)设计研制出一种转壁式生物反应器(Rotating Wall Vessel Bioreactor,RWVB)。采用RWVB进行基地试验时,意外地发现离体细胞在RWVB中呈现高密度聚集,并形成较大的组织样结构。RWVB的核心结构是由两个同心圆柱体构成的旋转培养装置。将细胞与培养液置入内、外圆柱体之间,整个装置绕水平纵轴旋转,使培养物长时间保持悬浮状态。由于在旋转过程中     

葡萄糖对小鼠胚胎体外发育的影响

通过在CZB培养液中添加不同浓度葡萄糖及在胚胎发育的不同阶段加入葡萄糖,对小鼠胚胎进行体外培养,以探讨葡萄糖在小鼠早期胚胎体外发育中的作用。其结果表明,小鼠胚胎在含糖CZB与在无糖CZB中培养比较,4-细胞发育率无差异;各浓度葡萄糖组囊胚率显著高于无糖组,其中3.0mmol/L浓度组囊胚细胞数显著高于其余组;实验二：2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加葡萄糖囊胚率显著提高。上述结果证明,在小鼠胚胎体外培养中加入葡萄糖不会导致2-细胞阻滞;葡萄糖浓度增加至10mmol/L对小鼠胚胎无毒性作用,其最适浓度为3.0mmol/L;2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加葡萄糖是必要的。关键词 葡萄糖;小鼠;2-细胞阻滞;胚胎;体外发育     

早期哺乳动物胚胎的遗传操作

该书分四部分:一、发育遗传学(6篇);二,内源病毒及病毒载体(5篇):三、将克隆基因导入哺乳动物的种系中(11篇);四、非哺乳动物的基因转移系统(3篇)。 此书是1984年秋在英国Banbury举行的“哺乳动物卵及早期胚胎遗传操作会议”上发表的论文集。     

小鼠着床前胚胎细胞发育命运

哺乳动物早期胚胎的发育机制一直是动物胚胎学和发育生物学领域中存在广泛争议的研究热点, 近年来, 争议的焦点主要集中在早期胚胎细胞的不同发育命运决定出现的阶段以及是否存在某种起关键作用的形态发生决定子等问题上.综述了近年来有关精子入卵位点、第二极体、胚胎形状、第二次卵裂的方向、细胞极性等因素对小鼠着床前胚胎细胞发育命运的影响.