宁康霉素产生菌海洋地衣芽孢杆菌BAC-9912的诱变育种

宁康霉素(Nincomycin)产生菌BAC-9912经紫外线单因子和亚硝基胍化学试剂诱变后,获得两株高产菌株9912-7-2U(UV处理获得)和9912-2U-32N(NTG处理获得),其摇瓶效价分别为176.464×105u·L-1和217.808×105u·L-1。比出发菌株效价分别提高126.9%和180.0%。连续传代摇瓶效价稳定。初步建立了形态观察法和琼脂块大通量法两种初筛模型。     

阿维菌素B1a组分高产菌株的定向选育

以阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)1-17为出发菌株,分别使用紫外线及亚硝基胍并结合L-异亮氨酸诱导手段进行诱变处理,得到AVMB1a组分摇瓶发酵水平较出发菌株提高12.86%的突变株3-6.传代实验表明该菌株的高产性能稳定.结果表明,采用UV、NTG诱变结合L-Ile诱导的手段可以获得B1a组分显著提高的菌株.     

微波诱变选育井冈霉素高产菌

采用微波诱变方法对井冈毒素生产菌株（Streptomyces hygroscopicus var.Jinggangensis Yen)进行诱变处理,挑取单个菌落摇瓶初筛,复筛,测定化学效价,获得4株平均效价比出发菌株分别高出17．5％、15％、20％、21．7％的突变株。沙土管保存10个月后,取沙土管孢子接种斜面连续传代4次,测定化学效价,代间效价差异不明显,遗传性能稳定。     

离子注入利福霉素产生菌诱变选育研究

离子注入诱变利福霉素生产菌,首先利用利福霉素浓度梯度平均板理性化筛选出高抗性菌株,再以此抗性菌株为出发菌进行离子注入诱变筛选。初筛摇瓶效价达９０００μ／ｍｌ,经复菌筛菌株２９５３效价稳定提高１８％、。７ｍ＾３罐中试,放罐效价达６８６３μ／ｍｌ,较同期对照提高３５％;３０ｍ＾３罐生产实验,最高罐批效价为６１３７μ／ｍｌ,平均提高１０％。     

链霉素抗性突变理性筛选新霉素高产菌株

采用化学诱变剂NTG结合链霉素抗性筛选法获得新霉素高产菌株。出发菌株费氏链霉菌(Streptomyces fradiae)FS1109的孢子悬液经不同剂量的化学诱变剂NTG处理后,涂布在含链霉素最小抑制浓度(3μg/m L)的培养基平板上培养,获得大量的链霉素抗性突变株。经影印法初筛和摇瓶发酵复筛,正突变率高于负突变率,获得一株遗传性状稳定的Streptomyces fradiae Str 63菌株,其新霉素生物活性单位比出发菌株提高了50%以上,且C组分较出发菌株的低。     

克拉维酸产生菌菌种的自然分离、纯化和鉴定

以克拉维酸产生菌棒状链霉菌21NB108号为出发菌株,经自然分离[1]、纯化处理后,再经摇瓶初筛、复筛获得高效价菌株N003号,其摇瓶复筛效价提高+11.96%经传代试验表明,该高产菌株遗传性能较为稳定。在罐上生产试验与出发菌株相比发酵效价提高20%。     

对甜菜夜蛾高毒苏云金芽孢杆菌菌株的选育*

采用物理诱变——虫体传代模式,选育获得一株对甜菜夜蛾高毒菌株BtCZE 99985。通过摇瓶和40t发酵罐3年10批发酵试验,表明该菌株具有良好的发酵性能。摇瓶试验表明,与出发菌株93005、对照菌株HD-1-580、GC-91相比较,该菌株对甜菜夜蛾的毒效分别提高429％、655％、114％。40t发酵罐发酵试验表明,该菌株对甜菜夜蛾测定的LC50平均值为0．076μL/mL,比GC-91菌株(平均0．213μL/mL)的毒效提高180％。     

NTG诱变农抗702产生菌链霉菌702的研究

目的:筛选出产抗真菌活性物质的高产链霉菌702突变株。方法:分别以链霉菌702菌株为试验材料,以庆大霉素为敏感抗生素,NTG诱变链霉菌702菌株,获得抗庆大霉素突变株。结果:NTG处理90min对菌株的致死率可达73.46%,突变率高达23.64%,经过摇瓶筛选获得高产突变株20-29-12,产素单位达到1 443μg/mL,比出发菌株提高了38.08%。结论:采用抗药性致死突变标志的NTG诱变筛选模型可以获得产抗真菌活性物质的链霉菌702高产菌株。     

常规诱变结合高通量筛选选育可利霉素高产菌株

可利霉素是通过基因工程定向育种技术获得的新型大环内酯类抗生素,是国家一类新药.[目的]为满足工业化生产需要,其工程菌株的发酵水平有待提高.[方法]多种常规诱变技术交替处理和高通量筛选方法选育可利霉素高产菌株,处理方法包括原生质体紫外诱变、DES(硫酸二乙酯)诱变、紫外光复活诱变、缬氨酸抗性筛选和正突变菌株的富集.[结果]高产菌株WSJ-1-7-49-133-82-43的摇瓶生物效价比出发菌株WSJ-1-7-49提高56％,500L中试发酵罐突变菌株效价较出发株高61％.[结论]说明多轮常规诱变育种结合高通量的筛选方法可以用于工业生产菌株的高效筛选.     

南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变筛选研究

通过对链霉素对南昌霉素（Nanchangmycin)产生菌NS－41－80菌株孢子的致死浓度测定基础上,采用诱变剂甲基磺酸乙酯（EMS）的不同诱发剂量对菌株孢子进行诱变处理,诱变处理的孢子涂布在含链霉素（10ug/mL)致死浓度的高氏平板上,获得了大量的链霉素抗性基因（str)突变株。然后从3,000株链霉素抗性基因（str)突变株中通过初筛获得比诱变出发菌株产素能力提高20％以上的菌株202株,再进一步通过摇瓶复筛,获得比出发菌株产素能力分别提高100％,200％,300％高产菌株为48株,7株和1株,分别为复筛菌和初筛菌株的23．76％和1．60％,3．46％和0．23％,0．5％和0．03％,将产素能力提高240％以上5个菌株连同出发菌株连续3批次进行摇瓶发酵结果,5个突变株的产素能力均比出发菌株的产素能力提高57％－96．4％,其中突变株80－5．3－165菌株摇瓶发酵单位达6,000ug/mL以上,3批次摇瓶平均发酵单位达5,855ug/mL,建立了南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变快速高效的筛选方法。     

UV与NTG复合诱变选育咪唑立宾高产菌

为选育咪唑立宾的高产菌株,对咪唑立宾产生菌Eupenicillum sp.E-0509-2的孢子分别进行了紫外线照射(UV)、亚硝基胍(NTG)和UV+NTG复合诱变处理筛选突变株。结果表明试验所确定的咪唑立宾产生菌的孢子诱变适宜条件为:将孢子悬液在电磁搅拌下,经紫外线照射处理60s后,以3.0g/L NTG处理20min。经发酵筛选试验,获得了一株遗传性状稳定、高产咪唑立宾的诱变菌株Eupenicillum sp.E-UN41,其咪唑立宾产量较出发菌株提高13倍。     

链霉菌LA5高产菌株诱变育种研究初报

抗生素LA5具有开发成抗真菌农用抗生素的广阔前景,但由于该菌株的野生型菌株发酵效价低,不能满足工业化开发的要求。通过以链霉菌LA5为出发菌株,采用紫外线(UV)、微波、亚硝基胍(NTG)、紫外线 亚硝基胍、亚硝基胍 紫外线等方法进行诱变筛选,结果表明,以紫外线照射80 s 亚硝基胍处理80 min的诱变的正突变率最高,为30%,其他依次为亚硝基胍处理80 min 紫外线照射40 s诱变和亚硝基胍处理60min 紫外线照射120 s诱变,正突变率均为26%。然后依次使用亚硝基胍处理80 min 紫外线照射80 s、亚硝基胍处理80 min 紫外线照射40 s、亚硝基胍处理60 min 紫外线照射120 s进行第2、第3、第4轮复合诱变筛选,最后选育出突变菌株U8-N8A-196,其产抗生素能力比链霉菌LA5出发菌株提高了34.5%,极显著高于LA5菌株。     

布雷菲尔德菌素A高产菌的选育和发酵条件优化

研究了选育布雷菲尔德茵素A(BFA)高产茵和优化发酵条件.采用紫外线照射(UV)、亚硝基胍(NTG)和UV+NTG复合诱变处理BFA产生茵Eupenicillum sp.E-0506筛选突变株后进一步发酵选育;采用单因素筛选结合正交试验考察摇瓶装液量、转速等因素的影响.试验所确定的BFA产生茵的孢子诱变适宜条件为:孢子...     

复合诱变选育林肯霉素高产菌株

以林肯链霉菌9502(Streptomyces lincolnensis9502)为出发菌株,进行NTG诱变处理,并用高效的琼脂块培养法对菌株进行筛选,得到产林肯霉素相对效价提高35.4%的变异株9502-7。对9502-7菌株孢子采用紫外线处理,得到变异高产菌株9502-7-12,其相对效价较出发菌株提高50%以上。     

E.aero高产1.3-丙二醇菌株选育及发酵培养基研究(Ⅰ)

以淡水湖泊泥土中分离出的300多株肠杆菌(Enterobacter)为出发菌株,利用常规筛选方法选出2株1．3-丙二醇产生菌(Enterobacter)。经UV、DES、NTG、EMS、LiCl单独及复合诱变,选育出一株(E．aero-N-56)1．3-PD高产突变株。通过单因素实验,确定了E．aero—N-56菌株1．3-PD发酵培养基为：甘油90g/L,NH4CL1．50g/L,Fe^2 0．005％,Co^2 0．004％。微量元素液12mL／L。该突变株1．3-PD产量为36．8g/L。     

定向选育衣康酸高产菌株的研究

以衣康酸生产菌土曲霉Ａ９００２为出发菌株,经紫外线及亚硝基胍复合诱变后再行定向选育,即在以衣康酸为唯一碳源的培养基中富集不能同化衣康酸的菌种,将将它们涂布在含乌头酸酶抑制剂（单氟醋酸）的高糖、高衣康酸平板培养基上,最后从中而筛选出一支衣康酸氧化酶弱,乌头酸酶活强,并耐自身代谢产物的高产突变株Ａ９００３。此菌株在摇瓶培养７２ｈ后,产酸为９．２％,转化率为５８．１％,在１００ｍ＾３发酵罐生产性试验中,     

Comparative analysis of deletion and base-change mutabilities of Escherichia coli B strains differing in DNA repair capacity (wild-type, uvrA-, polA-, recA-) by various mutagens.

Dose-response curves were compared for deletions [ColBR (resistant to colicin B) mutations being more than 80% deletions] and base changes (reversion of argFam to prototrophy argplus) induced in the same set of E. coli strains (wild-type for DNA repair, uvrA-, polA- and recA-) by N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG), ethyl methanesulfonate (EMS), hydroxylamine (HA), 4-nitroquinoline I-oxide (4NQO), mitomycin C (MTC, UV and X-rays. All these agents induced deletions as well as base changes in the wild-type strain. Thus chemical mutagenesis differed in E. coli and bacteriophages in vitro, for HA, NTG, EMS and perhaps UV produced only point mutations in phage Tr. The patterns of deletion and base-change mutability in E. coli were surprisingly similar. (I) The recombination less recA- strain was mutable by only three (NTG, EMS, HA) of the seven mutagens for either deletions or base changes. (2) The uvrA- strain, unable to excise pyrimidine dimers, was very highly mutable by 4NQO and UV but immutable by MTC for both deletions and base changes. (3) The polA- strain, defective in DNA polymerase I due to a non-suppressible mutation, was very highly mutable by HA and highly mutable by MTC and 4NQO for both deletions and base changes but was highly mutable only for deletions by UV and X-rays, remaining normally mutable by the other agents for both deletions and base changes despite its high sensitivity to their inactivating action. We conclude that errors in the recA-dependent repair of induced DNA damage (after 4NQO, MTC, UV and X-rays) or errors in replication enhanced by damage to the replication system or to the template strands (after NTG, EMS, and HA) give rise to deletions as well as to base changes. From a comparative analysis of 14 dose-response curves for deletions and base changes, we conclude that the order of mutagenic efficiency relative to killing is (EMS, NTG) greater than (UV, 4NQO) greater than HA greater than (X-rays, MTC), and that X-rays, 4NQO, HA and MTC induce more ColBR deletions than Argplus base changes, whereas UV and EMS induce ColBR deletions and Argplus base changes at nearly equal rates and the specificity of NTG is intermediate between these two types.     

十三碳二元羧酸发酵技术的研究

以一株热带假丝酵母菌(Candida tropicalis) SP1为出发菌株,经紫外线反复诱变获取一株难以同化烷烃的突变株SPUV56,摇瓶培养5d平均产酸量达72g/L,较出发菌株提高了1.25倍,并利用突变株SPUV56在137L自控罐上扩试,补加醋酸盐发酵,144h产酸量达153g/L,比不加醋酸盐发酵提高了29.7%。采用提 高搅拌混合效果和低溶解氧发酵过程控制方法,可有效地提高菌体的产酸能力,在20m3发酵罐中发酵生产十三碳二元羧酸,总培养时间144h,产酸量可达172g/L,放罐体积15.0m3,产量为2.25t。