二、核磁共振在膜研究中的应用(下)

3.细胞色素氧化酶细胞色素氧化酶位于线粒体内膜上,是呼吸链的最后一个成员。它催化如下反应,从而控制了电子由还原态的细胞色素C向氧化态细胞色素C的传递: 4 细胞色素C(还原态)+O_2+4H~+→ 4 细胞色素C(氧化态)+2H_2O 细胞色素氧化酶的分子量约156,000道尔顿,大小约为50A×50A×80A,形状象一颗牙齿。一般由七个亚基组成,不同来源的酶其亚基数目各不相同。最近对线粒体DNA的研究表明,其中三个最大的亚基在线粒体内部合成,而其余的亚基在细胞质内合成,然后再装配到一起。这是一个关系到膜组装机理的十     

约氏疟原虫红外期体外培养的研究

通过药物二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌，取肝癌白色结节用胶原酶消化，体外培养建立肝癌细胞系，筛选出对约氏疟原虫子孢子敏感的大鼠肝癌细胞系，建立了大鼠肝癌细胞－约氏疟原虫体外培养系统。纸氏疟原虫子孢子接种单层培养的肝癌细胞，４８ｈ可见红外期裂殖体，７２ｈ后培养细胞胰酶消化，消化下的细胞及培养上清一半离心，悬液接种健康小鼠，可使之感染疟疾。     

约氏疟原虫红外期成熟裂殖体的超微结构研究

用细胞色素氧化酶组织化学方法处理感染了约工疟原虫子孢子的大鼠肝脏,通过透射电镜研究红外期裂殖体的超微结构。在接种子孢子后４８小时的标本中发现一成熟裂殖体,外周仍由一寄生虫质膜包裹,膜下有许多小泡,粗面内质肉、圆形或蚕豆形具明显嵴的线粒体,以及大量成熟裂殖子。     

灵芝孢子和L-NNA对脊髓损伤后背核线粒体细胞色素氧化酶活性的影响

目的探讨灵芝孢子和一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂L-NNA联合应用对大鼠脊髓半横断后受损伤的背核线粒体细胞色素氧化酶活性的影响.方法将20只SD成年雌性大鼠(200-250g)行右侧T11脊髓半横断30d后,对受损伤脊髓做细胞色素氧化酶酶组化染色;用图像分析方法检测L1脊髓段背核线粒体细胞色素氧化酶活性的变化,用酶组化电镜技术观察L1脊髓段背核细胞色素氧化酶活性的分布位置.结果与对照组相比,L-NNA组和灵芝孢子组L1脊髓损伤侧背核线粒体细胞色素氧化酶活性有所提高,灵芝孢子 L-NNA组损伤侧背核线粒体细胞色素氧化酶活性最大.各组L1脊髓背核细胞色素氧化酶活性均出现在线粒体内,具有细胞色素氧化酶活性的线粒体存在所有神经元胞体及其树突和轴突内,也存在于神经胶质细胞胞体及其突起内.结论灵芝孢子和L-NNA均可提高大鼠脊髓半横断后受损伤的脊髓背核线粒体细胞色素氧化酶的活性,两者联合应用更能提高受损伤的背核线粒体细胞色素氧化酶的活性.     

约氏疟原虫蚊期体外培养：动合子和动合子形成的扫描电镜观察

为了开展疟疾防治以及疟原虫生物学的研究,进一步了解在体外培养中疟原虫的发育规律、形态结构等生物学特性,我们于1985年对离体培养的约氏疟原虫约氏亚种动合子和动合子形成进行了扫描电镜的观察。 材料和方法 约氏疟原虫约氏亚种(Plasmalium yoelii yoelii)用血传和蚊传保种。在昆明株小鼠(KM/AMS)体内多次血传做为供血鼠。C_(57)6JB/ax 小鼠保种。定期感染斯氏按蚊(Anpheles stephensis)MEM     

约氏疟原虫与伯氏疟原虫诱导感染小鼠产生保护性抗体的特点研究

比较约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)与伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)再次感染模型特异性抗体产生的差异,追溯相应虫体抗原的表达特点.建立约氏疟原虫与伯氏疟原虫再次感染鼠疟模型,ELISA检测特异性抗体水平;Western Blot检测血清中优势抗体反应特点;检测两种虫株的MSP-1重组...     

地塞米松对从江香猪细胞色素氧化酶P450 3A29 mRNA表达的影响

从江香猪是全国稀有的微型猪种,其细胞色素氧化酶P450基因纯合度较高,遗传稳定,具备开发药物代谢动物模型的良好基础。本研究旨在应用实时荧光定量方法研究从江香猪细胞色素氧化酶P450 3A29 mRNA的组织分布及地塞米松对其表达的影响,并比较与人细胞色素氧化酶P450 3A4的相似性。结果表明,从江香猪细胞色素氧化酶P450 3A29 m RNA的组织分布特征及地塞米松对其诱导作用总体上与人体相似,从江香猪可用于人细胞色素氧化酶P450 3A4的诱导研究。     

大鼠营养不良对约氏疟原虫子孢子侵入及其红外期发育的影响

人类的疟疾流行史表明,处于饥饿或营养不良状态下的人群,其疟疾发病率较低,临床症状较轻,动物实验证明,疟原虫红内期的发育对宿主饲料营养成份的依赖性非常明显。但宿主营养状态对子孢子侵入和红外期发育的影响尚未见有报道。本文观察了大鼠在营养不良条件下对约氏疟原虫子孢子侵入及红外期发育的影响。 将感染约氏疟原虫(Plasmodium y.yoelii)BY265 后14天的斯氏按蚊一批,剪去腹部,研磨,用     

脾细胞不同组分在鼠疟感染中相互作用的研究

探讨约氏疟原虫感染后脾细胞不同组分间相互作用对免疫分子分泌的影响。以约氏疟原虫腹腔感染DBA/2小鼠,采用ELISA和Griess实验分别检测感染后第3 d小鼠全脾细胞、巨噬细胞和悬浮细胞培养上清中IFN-γ和NO水平。在不同培养时间组,全脾细胞IFN-γ和NO分泌水平均明显高于单纯巨噬细胞或悬浮细胞;全脾细胞48 h和72 h培养组的IFN-γ水平明显高于24 h培养组,并且其NO的分泌水平随培养时间的延长而显著升高。脾细胞不同组分间的相互作用可明显促进其免疫分子的分泌;NO的分泌依赖于IFN-γ的诱导效应。     

西南地区首届动物学学术研讨会论文摘要汇编

１．细胞因子和活化枯氏细胞培养上清对约氏疟原虫红外期发育影响的研究郝宏兴黄复生况明书段建华（第三军医大学寄生虫学教研室）研究了重组人ＩＬ－１、ＩＬ－６和枯氏细胞（Ｋｃ）分泌物对约氏疟原虫红外期（ＥＥＦ）发育的影响。材料和方法：１．约氏疟原虫ＢＹ２６５...     

BALB/c小鼠感染不同疟原虫CD4＋ Th应答和凋亡特点的比较研究

探讨不同疟原虫感染BALB/c小鼠的免疫应答特点。BALB/c小鼠经腹腔注射致死型约氏疟原虫（P.y17XL）和夏氏疟原虫（P.cAS）感染的红细胞,计数红细胞感染率;ELISA动态检测感染小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平;流式细胞术检测脾中CD4＋T细胞凋亡数量。约氏疟原虫（P.y17XL）感染早期,小鼠原虫血症持续上升;IFN-γ和IL-4分泌水平仅在感染后第3天出现一过性有意义的升高,而且峰值较低;脾中CD4＋T细胞大量凋亡,小鼠全部死亡;而夏氏疟原虫（P.cAS）感染小鼠,原虫血症上升缓慢;IFN-γ分泌水平在感染后第5天达峰值;IL-4分泌水平在感染后第10天达峰值,且峰值较高维持时间较长;脾中CD4＋T细胞凋亡细胞于感染后8 d出现有意义升高,小鼠全部存活。抗疟保护性免疫有赖于Th1和Th2型免疫应答的有效建立和协调过渡,感染期间CD4＋T细胞凋亡的时相和数量可能是影响免疫应答的强度或引起宿主免疫抑制的原因,从而影响宿主疟原虫感染的结局。     

不同品系小鼠对约氏疟原虫-斯氏按蚊系统敏感性的观察

国外自60年代中期起重视疟疾病因性预防研究工作。但报道的多是伯氏疟原虫-斯氏按蚊系统方面的资料。约氏疟原虫1965年被发现、1974年被用于疟疾病因性预防药物筛选研究,关于各品系小鼠对约氏疟原     

Wistar大鼠鼠龄、性别和脾脏对约氏疟原虫子孢子入侵和红外期发育的影

Wistar大鼠对约氏疟原虫Plasmodiumyoeliiyoelii子孢子较为敏感,是研究约氏疟原虫红外期较为理想的动物模型(王兴相等,1985)。但有关该动物的一些生理因素对子孢子入侵和红外期的发育影响所知甚少。本文用对比研究的方法观察了鼠龄、性别和脾脏对于孢子入侵和红外期发育的影响,以便更好地利用该鼠疟模型进行红外期生物学特性的研究。材料和方法约氏疟原虫BY265株每周血传一次,每5周蚊传一次,保种于昆明株小鼠体内。斯氏按蚊(An.stephensi)成蚊羽化后3天用于吸血感染,感染后置于24±1℃、RH80±10%温室内饲养,第14天按Pachecoetal(1979)…     

共聚焦激光扫描显微镜对约氏疟原虫卵囊、子孢子胞内Ca^2＋的检测方法研究

本文报告建立用共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）观察约氏疟原虫卵囊,子孢子胞内游离Ca^2 的分布和实验检测方法,以荧光染料下Fluo-3作胞内Ca^2 指示剂,结果显示3u,4umol/L Fluo-3/Am同时加入1ul/ml25%PluronicF-127在37℃恒温下,分别孵育分离的约氏疟原虫子孢子,卵囊60min即可达到最佳的负载效果,子孢子胞内游离C^2 分布均匀,而卵囊内游离C^2 a分布不均匀,成块状分布,囊壁无效荧光,研究表明应用Fluo-3/AM和PluronicF-127结合CLSM技术是研究疟原虫卵囊,子孢子胞浆内游离Ca^2 的准确,灵敏的方法之一。     

大鼠心肌细胞色素氧化酶光镜和电镜定位观察

细胞色素氧化酶是线粒体呼吸链中的终末氧化酶,在电子传递过程中起着重要作用。以往有关细胞色素氧化酶的生物化学研究,为了解该酶在组织细胞的分布和活性提供了定量资料。1968年,Seligman等建立了以3,3′-二     

蛋氨酸脑啡肽对疟疾感染鼠一氧化氮产生的研究

探讨蛋氨酸-脑啡肽(M-ENK)对约氏疟原虫感染早期小鼠脾细胞分泌一氧化氮(NO)的免疫调节效应及相关机制。以不同浓度的M-ENK(单独或与LPS合用)与疟原虫感染后第3dBALB/c或DBA/2小鼠的脾细胞共同培养,通过Griess反应和ELISA法分别检测其上清中NO和IFN-γ的水平。脾细胞与浓度为10-10或10-11mol/L的M-ENK培养后,NO的分泌水平明显升高,并且与LPS联合刺激后其NO的产生进一步增强,但IFN-γ水平均未出现有意义的变化。提示浓度为10-10或10-11mol/L的M-ENK能够促进约氏疟原虫感染小鼠脾细胞NO的产生,该作用与IFN-γ活化巨噬细胞路径可能无关,同时M-ENK对LPS的刺激效应也具有强化作用。     

氮胁迫对雨生红球藻色素积累与抗氧化系统的影响

选用雨生红球藻CG-06为试验藻株,以BBM为基础培养基,分别设置了0、13.7、27.5、41.2mg·L-1四个硝态氮浓度梯度,分析并探讨在不同硝态氮浓度条件下雨生红球藻生长、生理特性、细胞内主要色素含量的变化以及抗氧化酶活性。结果表明：细胞中色素的积累量和积累速率与初始硝态氮浓度成反比,与抗氧化酶活性呈负相关。缺氮时,培养到第3天的藻细胞中虾青素含量达到4.95μg·mg-1,而对照组在培养到第9天的细胞中才开始产生虾青素,而且在整个培养周期内细胞中的虾青素最大含量仅为4.17μg·mg-1。酶活测定结果显示,虾青素含量较高的红色细胞中,超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性明显高于绿色细胞,且GSH-Px活性最高。研究表明,雨生红球藻可能有两种过氧化防御机制,绿色细胞阶段以抗氧化酶作用为主,在培养后期启动虾青素保护机制,两种机制具有协同作用。     

三株抗恶性疟单克隆抗体(M26-32，F5-3F9，F5-4E9)的鉴定

用约氏疟原虫和恶性疟原虫免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与sP2／o细胞融合,获得11株抗恶性疟原虫红内期的单克隆抗体(McAb)。以多种疟原虫(恶性疟,间日疟,卵圆疟,诺氏疟、食蟹猴疟和约氏疟)的感染血片为抗原,进行间接免疫荧光测定(IFA),发现有3株McAb(M26—32,F5—3F9,F5—4E9)与所试6种疟原虫均发生阳性荧光反应。其中M26—32除能与中国海南岛的2个恶性疟分离株结合外,与东南亚、非洲、拉丁美洲的6个恶性疟分离株及卢旺达临床病人周围血中的环状体亦呈阳性反应。在与我国不同地区的间日疟反应时,几株McAb的IFA结果不同,提示不同间日疟原虫株的抗原成分有所差异。这些McAb与马媾疫锥虫和弓浆虫均无交叉免疫荧光反应。因此可能用于检测病人血中的微量疟原虫抗原,为早期诊断疟疾提供有力的工具,并可能用于鉴定不同地区的间日疟原虫。恶性疟原虫体外生长抑制试验结果表明,McAb M26—32能部分抑制疟原虫对。H－亮氨酸的掺入,并能延缓原虫血症的上升,在疟疾保护性免疫中可能起一定作用。     

恶性疟原虫海南株(FCC1)翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的克隆及序列测定

为了获得翻译控制肿瘤蛋白 (TCTP)基因 ,提取恶性疟原虫海南株 (FCC1)总RNA ,直接用总RNA反转录成单链DNA ,再用长距PCR方法扩增出双链cDNA .根据小鼠约氏疟原虫TCTP基因序列设计引物 ,以cDNA为模板合成了恶性疟原虫海南株TCTP基因 .以pMD18 T为载体 ,用大肠杆菌XL1 blue对基因克隆 .测序结果表明 ,此基因序列与小鼠约氏疟原虫TCTP基因序列有 85 %同源性 .由此基因序列推导出的TCTP氨基酸序列 ,与小鼠约氏疟原虫TCTP氨基酸序列有 88%同源性 .进入GenBank国际基因库 (美国 )检索 ,所克隆的基因与基因库中恶性疟原虫基因同源性为 97% ;由所克隆的基因序列推导的TCTP氨基酸序列 ,与国际基因库恶性疟原虫TCTP基因推导的TCTP氨基酸序列仅有 1个氨基酸差异 .恶性疟原虫海南株TCTP基因克隆为进一步研究奠定了基础     

杂交水稻及其亲本幼苗的乙醇酸氧化酶与细胞色素氧化酶活性的研究(简报)

籼型杂交水稻不育系的乙醇酸氧化酶和细胞色素氧化酶比活差异较小,而恢复系之间则较明显,杂种优势越强的杂交种(F_1),其乙醇酸氧化酶的比活性越低,细胞色素氧化酶d值(杂种与父母本平均值之差)与乙醇酸氧化酶活性的d值总的变化趋势一致。F_1代的盐溶性蛋白质含量高于亲本。