激光微束诱导pSV－β质粒导入Hela细胞的研究

本文报道了用一套Ｎｄ：ＹＡＧ紫外激光微束系统研究基因转移。我们以ｐＳＶ－β质粒（β─半乳糖苷酶基因）作为报道基因,利用紫外激光微束将其导入Ｈｅｌａ细胞中,通过组织化学染色检测到质粒在Ｈｅｌａ细胞中获得表达,在最佳的激光辎照条件下,Ｈｅｌａ细胞的导入表达成功率在８０％以上。本工作是国内首次报道激光微束诱导外源基因进入动物细胞中并获得表达,为激光微束技术在动、植物细胞高效率导入外源ＤＮＡ的研究中摸索到一套经验,也将有力地促进这一技术在细胞工程方面的应用。     

激光微束诱导pSV—β质粒导入Hela细胞的研究

本文报道了用一套Ｎｄ：ＹＡＧ紫外激光微束系统研究基因转移。我们以ｐＳＶ－β质粒（β－半乳糖甙酶基因）作为报道基因,利用外激光微束将其导入Ｈｅｌａ细胞中,通过组织化学染色检测到质粒在Ｈｅｌａ细胞中获得表达,在最佳的激光辐照条件下,Ｈｅｌａ细胞的导入表达成功率在８０％以上。本工作是国内首次报道激光微束诱导外源基因进入动物细胞中获得表达,为激光微束技术在动、植物细胞高效率导入外源ＤＮＡ的研究中摸索到一套     

微束激光转基因技术研究进展

本文叙述了激光微速穿刺法导入外源ＤＮＡ的基本原理及其有关影响因素等。利用该转化方法,现已成功地获得了多种动植物细胞外源基因的转化。实验证明,激光微束穿刺转化技术简便有效、重复性好、靶体选择性强,对靶体无损伤等优点。随着转化技术自动化水平的提高。光镊技术的渗透和结合,激光微束转化技术将会得到更广泛的应用     

激光微束在两种鱼受精卵上打孔技术研究

在埃及胡子鲶和苏氏芒鲶两种鱼受精卵上,用脉冲ＹＡＧ激光微束打孔技术,成功地导入了外源指示剂和用激光微束打过孔的受精卵孵化出了仔鱼,为今后激光微束打孔植入外源基因和针类转基因研究做了一些有意义的探索工作。     

利用微束激光穿刺法将抗真菌基因导入棉花的研究初报

以棉花感受态萌动种胚作为外源基因转化的受体,用激光微束穿刺法将β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶双价基因导入棉花,所构建的植物表达载体pB IBGC携带有筛选标记npt-Ⅱ(新霉素磷酸转移酶)基因。激光转化处理的种胚经卡那霉素筛选,已经获得抗性小植株。研究了微束激光转化法用于棉花感受态萌动胚转化预培养的时间、高渗液对材料的处理等。研究表明:用微束激光转化处理种胚是一种操作简便、重复性好的转化方法,用该法可将外源基因导入植物感受态萌动胚,避开植株离体再生的困难。     

发刊词

当代,科学技术迅猛发展,呈现出既高度分化又高度综合的特点。一大批新兴学科相继涌现,激光生物学正是在这个大潮中形成和发展起来的边缘学科。它是激光技术向生物学渗透,是激光医学、激光育种等应用学科的基础。它一经诞生,就得到了广泛的应用。目前,国内外利用激光研究生命物质运动,已进入细胞水平和分子水平,用激光微束技术实现了切割染色体、核仁组织者的定位、遗传缺失和动物卵细胞融合,诱发微核仁形成;用激光微束技术将外源基因导入小麦和水稻细胞以及向蚕卵细胞注入外源基因等方面都取得了进展。可以预见在生物工程技术领域中将会逐渐形成一个新的分支——激光生物工程,它的作用将与酶工程媲美。     

激光微束照射引起高等植物细胞的遗传变异

除少数植物的原生质体转化较容易外,高等植物的外源基因导入极为困难。特别是许多单子叶作物的原生质体培养和再生很困难,因此人们期望把克隆基因直接导入细胞来避免大量的组织培养,激光微束可穿透植物细胞壁因而能促进细胞对基因的吸收。     

利用激光微束穿刺法将外源基因导入小麦的研究

用激光微束穿刺法将携带有新霉素磷酸转移酶（ＮＰＴ－Ⅱ）基因的质粒ｐＪＩＴ１０１导入京花１号小麦幼胚细胞。方法是将小麦幼胚细胞进行高渗缓冲液预处理,用微米级的激光微束处理,然后在卡那霉素培养基上筛选出具抗性的愈伤组织及绿色小植株。第一年,从１５０个小麦幼胚中,在卡那霉素培养基上筛选出４株绿苗,取两株进行ＮＰＴ－Ⅱ酶活性分析,测到了ＮＰＴ－Ⅱ酶的活性。第二年重复实验,从２４５个小麦幼胚中,经筛选获得１株绿苗,进行了叶片ＤＮＡＰＣＲ扩增检测,转化的绿色小苗扩增出所导入的ＮＰＴ－Ⅱ基因编码的片段。结果表明,外源ＮＰＴ－Ⅱ基因已导入了小麦,并实现了整合表达。     

用微弹轰击法将GUS基因导入小麦的完整细胞

微弹轰击法将外源DNA导入小麦(Triticum,aestivum)未成熟胚和悬浮细胞系的完整细胞。用pCI GUS作报告基因,质粒DNA涂于钨粉微弹表层,用基因枪轰击使微弹穿透细胞壁进入小麦细胞。处理2天后,用x—glucuronide染色,对GUS基因产物的活性进行鉴定,GUS基因表达的细胞呈深蓝色的小点。小麦幼胚表面的蓝点最多可达40～50个,悬浮细胞系中GUS基因表达的细胞较少。试验表明微弹轰击法是小麦组织水平上进行外源基因导入的一个有效途径。试验对微弹轰击的有关参数及条件进行了讨论。     

利用激光微束将外源基因导入高等植物细胞的研究

基因工程这一生物高技术为改变生物性状和快速育种提供了有力工具。目前克隆目的基因已有一些较为有效的方法。而将外源基因有效地导入细胞,尤其是导入农作物细胞到目前为止还没有一种通用于各种植物的方法。因此从事生物工程的学者都在努力寻求建立一种有效的、完善的导入外源基因的转化方法。本实验室建立了激光微束向植物细胞导入外源基因的试验程序。用已建立的程序对各种经济作物和林木进行了外源基因导入的研究。所用植物材料：禾本科小麦幼胚、双子叶植物锦室科棉花胚状体、豆科植物的百脉根子叶、兰科花卉兰花小圆珠茎、木本植物大…     

用一种新型基因枪将外源基因转入水稻细胞(简报)(英文)

本文介绍了一种设计上改进的基因枪,用这种新型基因枪将外源基因转移到水稻细胞获得了表达。用包有pBI 121质粒DNA的钨微弹轰击水稻悬浮细胞以及成熟种子胚后,在悬浮细胞中检测到了外源基因(GUS)的表达。胚诱导的愈伤组织在无抗生素选择的条件下扩增并分化、再生,共获得30株绿色小植株。经DNA斑点杂交测得其中两株的植物总DNA中存在GUS基因。Southern杂交分析证实GUS基因整合到了水稻基因组.     

用Ti质粒DNA离体转化植物原生质体成功

基因工程包括把DNA引入寄主细胞,并和寄主基因组整合,以及外源基因在寄主中表达。这在植物细胞里尚未被证明。最近新西兰的几位科学家首次在植物细胞里证明了这一点。他们是用烟草原生质体为实验材料,用Ti质粒DNA进行转化取得成功的。可引起冠缨瘤病的根瘤农杆菌是一个把外源DNA引入植物中去的天然的实验体系。这种根瘤农杆菌能把     

利用微束激光将外源基因导入小麦幼胚并获得转基因植株的研究

近几年来,国内外学者在小麦遗传转化方面进行了大量研究。在我们实验室利用微束激光成功地将外源基因导入了小麦幼胚细胞并获得转基因植株。 选用小麦京花1号幼胚,PJIT_(101)质粒为实验材料,激光微束仪是中国科学院遗传研究所和重庆京渝激光生物所共同研制的Nd—YAG激光显微照射系统。 将京花1号开花后12—14天幼嫩种子,用0.1％的HgC_(12)灭菌10分钟用无菌水冲洗3—4次,剥取幼胚,用高渗缓冲液泡2—4小时。激光照射前洗去高渗液,加新鲜的Ms培养液,吸取0.5ml含幼胚细胞的悬浮培养液,加40—50ulPJIT_(101)质粒(50ug/ml),注入Rose小室,然后激光照射。     

向植物导入外源DNA方法的研究与发展

为满足人类对粮食和其它农产品的多种需求,利用现代生物技术手段培育高产,稳产、优质、抗病虫,抗逆植物新品种是农业生物技术研究的主要内容之一。对植物进行遗传改造的首要环节是,研究和开发向植物细胞导入外源基因的技术。近年来,向植物细胞导入外源DNA的方法在实践中不断创新发展。目前主要采用的方法有以下几种: 一、根癌土壤杆菌介导的外源基因转移 整合型的根癌土壤杆菌Ti质粒是最常用的一种载体。研究最多的是octopine(章鱼碱)型和nopaline(胭脂碱)型Ti质粒。在Ti质粒上有一段T-区,T-DNA能从该质粒转移到敏感植物的核基因组中。T-DNA边界有25bp正向重复序列可能接受某种酶识别切割,进而形成环状中间体。此外,Ti质粒上还有—个约50kb的Virulence区(简称Vir区),约有十几个基因。Vir区不在T-DNA内。Vir产物是一     

花粉介导法获得玉米转基因植株(英文)

利用花粉作为外源基因的载体进行遗传转化在玉米 (ZeamaysL .)上获得了成功。以玉米自交系太 910 1、综 31等为受体 ,以pGLⅡ_RC_1质粒为供体 ,在玉米开花期 ,用花粉与质粒DNA混合并附加超声波处理 ,然后辅以人工授粉的方法将外源基因导入到受体中。DNA斑点杂交和PCR扩增以及PCR_Southernblot杂交检测结果证明 ,几丁质酶基因确已导入玉米自交系中。所得结果表明 :玉米花粉可以介导外源基因的转化。利用花粉作为载体介导外源基因转化 ,避免了传统的基因枪法和土壤杆菌法转化所要求的组织培养技术 ,转化方法简单 ,易操作 ,具有很强的实用性     

将抗真菌病基因导入马铃薯的研究

实验采用微束激光穿刺技术和农杆菌介导方法,将携带有Ⅰ型烟草β－１,３－葡聚糖酶基因和Ⅰ型菜豆几丁质酶基因的ｐＢＬＧＣ质粒导入马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ Ｌ．）品种“津引８号”。微束激光穿刺技术转化中,获得了７株卡那霉素抗性再生苗,分子检测证明,其中有１株为菜豆几丁质酶基因单基因转化植株。在农杆菌介导方法中得到了１３株卡那霉素抗性再生苗,其中有３株为烟草β－１,３－葡聚糖酶基因单基因     

一种将外源基因导入植物的新方法：激光微束穿刺法

一种将外源基因导入植物的新方法──激光微束穿刺法王兰岚,周奕华,宋桂英,陈正华（中国科学院遗传所,北京,１００１０１）关键词转基因植物;转化作用;激光微束穿刺法ＡＮＥＷＷＡＹＯＦＦＯＲＥＩＧＮＧＥＮＥＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮＯＦＰＬＡＮＴ—ＬＡＳ...     

高等植物叶绿体的遗传转化

利用不同方法在两个大不相同的实验室里首次获得了高等植物细胞器的遗传转化.MaxPlanck细胞生物学研究所和Heidelberg大学的G.Weber及同事利用一紫外线激光微束把外源DNA组合到油菜叶绿体中.他们将携带敌菌灵抗性基因并用荧光染料标记的DNA注入油菜细胞的胞质中.然后用3毫微秒氮激光微束(接入一倒置显微镜的光径里)脉冲击穿细胞内的叶绿体.通过处理叶绿体的荧光性以及敌菌灵抗性在油菜细胞中的瞬时表达证实了DNA的摄取.处理细胞存活并再生成株.但是,在再生株里并未发现引入基因的表达.他们成功     

激光微束技术及其在基因转移研究中的应用

本文中介绍了我们设计和安装的一套激光微束系统,该系统分为二部份:激光源和显微镜.工作波长355nm是由电子调Q Nd:YAG激光经KDP倍频和混频后得到的.这束光从显微镜的左边引入45°反射,再经×100物镜聚焦.光束直径小于1μ.这束激光可给细胞打孔,约在1秒内小孔自行修复,在修复之前荧光物质和质粒可以扩散进细胞.我们成功地把GUS基因导入烟草花粉细胞中并得到瞬间表述,还把DAPI-λDNA导入M85胃癌细胞必观察到兰色荧光.从本工作初步表明这种导入方法很有发展前途.     

利用激光微束将外源基因导入高等植物细胞的研究

本实验室已建立了激光微束向植物细胞导入外源基因的试验程序。用已建立的程序对多种经济作物和林木进行外源基因导入的研究,均得到了GUS基因瞬时表达的结果,正在继续研究GUS基因的整合表达。 广泛地选用了不同科属的植物及不同外植体进行外源基因导入的研究,所用材料如下:在被子植物中选用单子叶无性繁殖的兰科花卉兰花(Dendrobium)小圆球茎为外植体;以双子叶植物中的草本植物锦葵科的棉花(G.hirsulum L.)再生胚状体为外植体;十字花科油菜,选用