快速显示血细胞及骨髓细胞DNA、RNA的方法

实验对传统的甲绿 派若宁法做了一定的改进 ,使染色时间缩短 ,步骤简化 ,效果良好。并对骨髓和脾造血细胞内ＤＮＡ、ＲＮＡ的定性和定量显示进行了一定的探讨。1.材料和方法1 1　材料 :派若宁Ｙ染液的配制 6%派若宁Ｙ(ＡＭＲＥＳＣＯ分装 ) 1ｍｌ,0 2Ｍ醋酸缓冲液(ｐＨ5 0 ) 8ｍｌ,蒸馏水 8ｍｌ ,优质甘油 1ｍｌ。此过程在磁力搅拌器上进行。 2 %甲绿用 0 1ＭＰＢＳｐＨ7 2溶液配制 ,经三氯甲烷洗脱去影响染色效果的甲紫成分 ,制得较纯的甲绿溶液。1 2　染色方法 :取小鼠股骨 (用ＲＰＭＩ 1640培养液将骨髓冲出 )和脾细胞 ,制成细胞悬液…     

微波在蛋白质电泳染色和脱色中的应用

经过实验摸索和实践 ,我们发现一种利用微波处理在10ｍｉｎ内可使聚丙烯酰胺凝胶染色及脱色完成的方法 .ａ 将电泳后的凝胶 (厚度 0 75ｍｍ)取出 ,置于培养皿中用蒸馏水冲去残留缓冲液 .ｂ 加入染色液将凝胶完全浸泡其中 ,放入微波炉内高火档照射 2 0ｓ,停留 1ｍｉｎ ,再照射 10ｓ.ｃ 取出染色液 (回收还可再用 2次 ) ,用蒸馏水冲去凝胶上残留染色液 .ｄ 加入脱色液 ,高火档照射 2 0ｓ ,取出脱色液 ,然后加入新鲜脱色液再照射 2 0ｓ,重复5～ 6次 ,直至背景清晰透明 .实践中我们认为应注意以下几点 :ａ 盛试剂的培养皿上面应盖一稍大的培养…     

牛乳碱性蛋白二维凝胶电泳条件的优化

为了在二维凝胶电泳(2-DE)中有效分离牛乳中的碱性蛋白,本试验在等电聚焦上样缓冲液中加入异丙醇和甘油,采用杯上样方式,比较了三丁基磷(TBP)和二硫苏糖醇(DTT)两种还原剂对碱性区域蛋白的分离效果。结果发现,等电聚焦上样缓冲液以TBP为还原剂的碱性蛋白分离图谱水平条纹少,优于以DTT为还原剂图谱。表明等电聚焦上样缓冲液以TBP为还原剂,采用杯上样的方法可以改善牛乳中碱性蛋白的分离效果。     

明胶酶谱实验方法的优化

目的:优化明胶酶谱实验方法,并检测不同浓度凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌的明胶酶B(MMP-9)活性的变化。方法:用含明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分开上清中各蛋白条带,经2.5%Triton X-100洗脱、明胶酶缓冲液孵育、考马斯亮蓝染色液染色及脱色液脱色后,经光密度扫描记录,应用ImageJ软件进行密度计量分析。结果:凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌MMP-9具有浓度依赖性。结论:利用优化的明胶酶谱实验方法可做出高质量的明胶酶谱图片,对检测明胶酶活性有重要意义。     

耳蜗琥珀酸脱氢酶显示方法的改进

在采用耳蜗顶部灌流方法测定琥珀酸脱氢酶的活性时,本文提出了两点改进,实验动物为豚鼠:(1)孵育前用2%戊二醛磷酸盐缓冲液(pH7.4,4℃)将耳蜗预固定30min,再冰凉(—20——40℃)约3min,以便消除血管纹屏障,使该部位和柯蒂氏器官的琥珀酸脱氢酶活性能同时被显示出来。(2)在孵育液中加入细胞呼吸抑制剂(阿密妥),可使耳蜗背景色变淡,从而减少假阳性现象。通过对一些豚鼠的实验观察,所得结果基本一致。     

小经验介绍——微波在蛋白质电泳染色和脱色中的应用

经过实验摸索和实践,我们发现一种利用微波处理在10 min内可使聚丙烯酰胺凝胶染色及脱色完成的方法.a 将电泳后的凝胶(厚度0 75 mm)取出,置于培养皿中用蒸馏水冲去残留缓冲液.b 加入染色液将凝胶完全浸泡其中,放入微波炉内高火档照射20 s,停留1 min,再照射10 s. c 取出染色液(回收还可再用2次),用蒸馏水冲去凝胶上残留染色液.d 加入脱色液,高火档照射20 s,取出脱色液,然后加入新鲜脱色液再照射20 s,重复 5～6次,直至背景清晰透明.     

网状纤维染色技术改进

目的探讨改进网状纤维染色氨银液配制方法与改进染色方法的可行性。方法改进网状纤维染色中氨银液的配制方法和染色方法,与传统染色方法比较其染色效果与脱片率。结果改进网状纤维染色方法切片背景清洁度、网状纤维清晰度、网状纤维与胶原纤维对比度3项指标的得分均显著高于传统方法;改进网状纤维染色方法切片脱片率低于传统方法。结论改进网状纤维染色氨银液配制方法、改进网状纤维染色方法,可提高氨银液配制的成功率,延长氨银液有效期,提高网状纤维的染色质量,减少网状纤维染色的脱片率。     

不同诱导剂定向诱导BMSCs分化为胰岛样结构的比较

为了探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)定向诱导分化成胰岛样结构的变化规律,本研究以胰腺组织裂解液为诱导剂,同时采用尼克酰胺诱导剂作为对照,以双硫腙染色筛选诱导所获得的细胞团,采用Mallory染色鉴别胰岛细胞,RT-PCR检测Insulin基因的表达。实验结果表明:诱导形成的胰岛样结构具有结缔组织样被膜包裹,Mallory染色可见胰岛样结构内有α、β样细胞,RT-PCR可检测到胰岛样结构内Insulin基因表达的阳性细胞。以上结果说明:胰腺组织裂解液能更好地模拟体内胰腺组织结构的微环境,诱导BMSCs分化为多种细胞,最终形成比较复杂的胰岛样结构。本研究结果为BMSCs定向诱导分化成胰腺细胞,提供了新的思路和方法。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳方法的一些改进

聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质时所使用的“高pH系统”的电极缓冲液,通常是Glycine-Tris缓冲液。这两种试剂比较贵,虽然可以重复使用,但消耗量大,不利于普及。此外凝胶的常规染色和脱色需要较长的时间。作者在研究天然橡胶蛋白质的分离分析时,对这些方法作了一些改进:使用“改进高pH系统”的电极缓冲液——硼酸、NaOH缓冲液、改进分离凝胶的制备,并采用了快速染色和脱色,缩短了试验的时间。本法应用于人血清蛋白的测定,亦得到满意的结果。材料与方法 1.天然橡胶的蛋白质新鲜天然胶乳用2％醋酸凝固(5∶1v/v),用压榨的方法取出天然橡胶乳清(乳清相当于人血清),可溶性蛋白质存在于乳清中。 2.正常人血清湛江医学院附属医院提供。     

北方常绿阔叶木本植物叶片蛋白质双向电泳技术体系优化

以北海道黄杨为模型植物,比较了3种不同叶片蛋白质提取方法,并优化了双向电泳各个环节技术体系,进一步用5种北方常绿阔叶木本植物进行验证,以建立适合北方常绿阔叶木本植物蛋白质分析的双向电泳技术体系.结果表明:(1)采用改进的酚/SDS方法提取叶片蛋白质,用添加硫脲和磺基三甲基胺乙内脂3～10的裂解液裂解蛋白,使用24 cm固相pH梯度胶条,考马斯亮蓝染色蛋白上样量800 μg,最多可得到分辨率高、重复性好的蛋白点912个;银染色蛋白上样量110 μg,最多可得到分辨率高、重复性好的蛋白点587个.(2)用优化的技术体系对5种北方常绿阔叶木本植物进行分析,结果显示5种植物叶片蛋白质2-DE图谱均背景清晰,分辨率好,重复性较好(重复组的相似系数平均为68.60%);5 种植物平均可得到约371个清晰可重复的蛋白点,其中大叶黄杨、扶芳藤、北海道黄杨、金心黄杨和小叶黄杨的2-DE重复组蛋白点数目分别为346、407、353、352和399个.表明本研究优化的蛋白质提取以及双向电泳技术体系适用于对北方常绿阔叶木本植物叶片的比较蛋白质组学分析.