分光光度法标定酵母超滤液浓度及其在脑膜炎球菌培养基优化过程中的应用

目的:建立检测酵母超滤液浓度的方法,并探索适合A、C群脑膜炎球菌生长的无动物源性培养基中酵母超滤液的浓度。方法:通过全波长扫描及不同波长吸光度值的比较确定检测酵母提取物浓度的最佳波长;用3000 Da超滤膜超滤酵母提取物溶液,制备酵母超滤液并检测其性质;观察脑膜炎球菌在含不同批次酵母超滤液的半综合培养基中的生长情况,验证不同批次标化的酵母超滤液的稳定性;配制含不同浓度酵母超滤液的半综合液体培养基,观察A、C群脑膜炎球菌的生长情况。结果:通过全波长扫描及不同波长吸光度值的比较,确定了检测酵母提取物浓度的最佳波长为405 nm;采用3000 Da超滤膜超滤后的酵母超滤液不与CTAB产生沉淀,通过检测其D_(405nm)值,可以确定酵母超滤液的浓度;从生长情况考虑,A、C群脑膜炎球菌半综合培养基中最优酵母超滤液浓度分别为4、2 mg/L。结论:建立了制备酵母超滤液及分光光度法标定酵母超滤液浓度的方法,确定了培养A、C群脑膜炎球菌半综合培养基中最优酵母超滤液浓度。     

乳杆菌对数生长期培养基滤液核酸组分分析

目的通过对乳杆菌对数生长期培养基滤液中核酸组分的分析,阐明乳杆菌DM9811对数生长期培养基滤液中核酸的性质。方法应用核酸的分离、纯化及电泳分析技术。结果乳杆菌对数生长期培养基滤液中核酸组分为RNA,其片段大小为100 bp左右。乳杆菌对数生长期培养基滤液中核酸组分为RNA,为对数期产生且呈时间依赖关系。结论核酸组分不仅仅是遗传信息的载体,还可能作为有效的信息分子。     

一种简易的小牛血清制备方法

小牛血清是细胞组织培养中常用的培养基成份。介绍一种简易、快捷的小牛血清制备方法,经该方法制备的血清质量稳定,其在实际应用中效果良好。     

成牛血清低分子量成分在杂交瘤细胞体外“无血清”培养中的利用

利用适量的(3．5～14％)成牛血清低分子成分超滤液(LMW－CS,排阻M=300 00)、10mg／L转铁蛋白(T)、10 mg／L胰岛素(I)、20μmol／L乙醇胺(E)、40 n mol／L硒酸钠(s,当以RPMll640为基础液时用)等诸补充成分替代胎牛血清加到基础液RPMll640或1：1(v／v)的IMDM与Ham’s F₁₂混合液中构成本实验性“无血清”培养基。培养在此种培养基中的杂交瘤细胞其最高细胞密度可以达到甚至超过培养在含胎牛血清的生长培养基中的最高细胞密度。对于杂交瘤细胞生长,4％的LMW－CS基本满足要求;T、I、E、S四种补充成分中乙醇胺(E)是首位影响因子; LMW－cs与TIES两部分之间的协同作用极为显著,两者缺一不可。     

酶工程

绳状青霉(Penicillium runiculosum)NRRL 13033在麦秆上生长时产生卜葡糖普酶和刀一木糖昔酶.测定了向发酵培养基中加人诱导物(草酸、唬拍酸和柠檬酸,单独或相互组合)对酶生产的影响,在含有草酸的培养基中得到培养滤液中最高的蛋白质含量.酶活性主要是在培养滤液中     

一种“无血清”培养基对肿瘤细胞生长的支持

本文报告一种为适于杂交瘤细胞生长“无血清”培养基－适量的成牛血清低分子成分超滤液、１０ｍｇ／Ｌ转铁蛋白（Ｔ）、１０ｍｇ／Ｌ胰岛素（Ｉ）、２０μｍｏｌ／Ｌ乙醇胺（Ｅ）、４０ｎｍｏｌ／Ｌ硒酸钠（Ｓ）等诸补充成分替代胎牛血清加到基础液中－也完全适用于培养肿瘤细胞,且观察到与之相似的规律性结果,癌细胞在本“无血清”培养若的生长水平达到在含胎牛血清培养基中生长的水平。对于癌细胞的生长,ＬＭＷ－ＣＳ与Ｔ、Ｉ、     

阿魏酸钠诱导分化的PC12细胞裂解液的无细胞滤液的抗抑郁样效果

阿魏酸(ferulic acid,FA)是一种广泛存在的低毒酚酸,阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)则是其钠盐。先前的研究已经证实,阿魏酸钠具有显著的神经保护和神经发生增强作用及抗抑郁效果。该研究的目的在于探讨阿魏酸钠诱导分化的PC12细胞裂解液的无细胞滤液可能的抗抑郁效果。PC12细胞在含80μmol/L阿魏酸钠的DMEM培养基中孵育6d,无菌条件下制备阿魏酸钠诱导分化的PC12细胞液的无细胞滤液,测定PC12细胞裂解液无细胞滤液中残留的阿魏酸钠量。以慢性不可预期的多种刺激制造大鼠抑郁模型,用行为学、形态学、免疫组织化学和BrdU掺入等方法观察并检测阿魏酸钠诱导分化的PC12细胞裂解液的无细胞滤液对慢性应激大鼠抑郁模型行为学、海马的组织病理学、海马和大脑皮质的神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达及神经发生的影响。实验证实,阿魏酸钠诱导分化的PC12细胞裂解液的无细胞滤液能改善抑郁症样模型大鼠的行为学障碍,上调其海马和大脑皮质NGF和BNDF的表达,增加海马神经干细...     

膜法提取L-丙氨酸工艺研究

本文研究针对发酵法生产的L-丙氨酸。首先将L-丙氨酸发酵液加热预处理,用陶瓷超滤膜除去发酵液中菌体、大分子蛋白等杂质得到超滤液,然后将超滤液经纳滤膜除去色素、小分子蛋白、无机盐得纳滤液,纳滤液再经过真空浓缩、结晶、离心、烘干、包装得到L-丙氨酸成品。L-丙氨酸离心母液返回至纳滤工序套用,最终总提取平均收率大于91%,产品质量符合日本味之素企业(AJI97)和中国企业(食品级)标准。     

金黄色葡萄球菌滤液制剂中肠毒素的检测研究

使用反向被动血凝试验(RPHA),对金黄色葡萄球菌滤液制剂中的肠毒素(SET)进行了检测研究.证明已生产和临床应用近10 a的金黄色葡萄球菌滤液制剂中检测到SET存在.其型别系属SET中的C型.按原生产工艺所生产的金黄色葡萄球菌滤液制剂原液中SET的含量在12.5～50 mg/L.生产时欲提高SET含量的条件试验中证实,使用葡萄球菌产毒的胰酪胨综合培养基,以摇瓶方式培养24～36 h,可使SET含量比用生产培养基培养提高16倍.金黄色萄萄球菌滤液制剂中SET的成分是极其稳定的,室温存放2 a未见该成分降低.其半衰期可达4 a.在采用RPHA和RPLA检测SET比较试验中证明:RPLA试剂的敏感性高于RPHA的4倍.但对于检测金黄色葡萄球菌滤液制剂中SET的实际含量几乎是相等的.     

封口方式对红曲产洛伐他汀的影响

目的：研究红曲发酵过程中通气性对洛伐他汀含量的影响。方法：通过对种子液培养基和固体培养基封口方式进行正交试验,利用HPLC方法测定发酵产物中洛伐他汀的含量,判断最适的封口组合方式。结果：当种子液培养基采用纱布或棉塞封口,固体培养基采用纱布封口,红曲中洛伐他汀的含量最高。所有处理条件下,无检出桔青霉素。结论：种子液培养基采用纱布或棉塞封口,固体培养基采用纱布封口时利于洛伐他汀的产生。     

B7-2小鼠胚胎癌细胞的无血清培养

本文报道以RPMI-1640,DMEM和HAM/F 12人工培养基做基础培液,加入牛血清白蛋白、胰岛素和转铁蛋白等物质,发展了一种无血清(B7-85)培液。在B7-85液中,B7—2EC细胞生长速率虽略低于含10％小牛血清常规培液,但细胞形态、生长行为和在同系宿主体内的长瘤率及分化潜能,均未发现存在区别。因此,B7-85液是适于B7-2EC细胞生长的无血清人工培液。这种人工培液中除胰岛素外,没有人为地增添外源性多肽生长因子,这将有利于分析B7-2EC细胞和其分化细胞产生的内源性生长因子。     

植物病原细菌中超氧阴离子释放及其释放位点的研究

实验发现很多植物病原细菌具有自身释放超氧阴离子的现象 ,其释放规律与菌株的致病性可能存在一定的关系。并且植物病原细菌超氧阴离子的释放是多位点的 ,在细胞膜、细胞壁及无菌滤液中用化学方法及电子自旋共振法 (Electronspinresonance ,ESR)都能够检测到超氧阴离子的释放。无论是自然生理状态下 ,还是SOD酶活性被抑制后 ,都显示各组分中无菌滤液的超氧阴离子浓度最高 ,可能是植物病原细菌超氧阴离子释放的主要位点。     

分泌重组抗体的CHO细胞体外培养条件的优化

目的：对生物反应器细胞培养时培养时培养基组成进行优化。方法：以稳定转染了抗CD3人源化抗体的CHO细胞为模型,以无血清培养基经生物反应器高密度细胞培养后分子量小于50kDR的超滤液为基础培养基,在细胞培养板中考察添加氨基酸、丁酸钠、柠檬酸铁等多种成分对细胞生长状态和蛋白表达量的影响、结果：2mmol/L丁酸钠可以有效地诱导蛋白的表达,丁酸钠和柠檬酸铁对于促蛋白表达有协同作用,适量添加培养过程中消耗较快的氨基酸可提高细胞数和蛋白的表达量。结论：利用所述方法可快速优化培养基成分,显著提高生物反应器中细胞的蛋白表达量。     

乳酸杆菌发酵滤液中核酸抗肿瘤效应及对荷瘤鼠免疫功能的影响

目的探讨乳酸杆菌DM9811培养基滤液中核酸在体外对肿瘤细胞生长及对荷瘤鼠免疫功能的影响。方法抽提乳酸杆菌DM9811对数生长期培养基滤液中核酸,进行琼脂糖电泳分析;MTT法体外观察其对于结肠癌HT-29细胞系生长的影响;动物实验观察不同组别小鼠生存期、瘤重体重比、NK细胞活性、T细胞亚群指标。结果乳酸杆菌DM9811滤液中核酸组分为RNA;在细胞浓度为1×106时,每孔加入RNA 100μg能够明显抑制结肠癌HT-29细胞系的生长;预防组荷瘤鼠除CD8＋T细胞比例之外各项指标与阴性对照组相比差异都有统计学意义（P〈0.05）,其中NK细胞杀伤活性（58.97±3.62）、CD4＋T细胞比例（27.77±5.40）和生存期（15.1±4.48）均高于阴性对照组（43.87±3.92）、（19.68±3.00）、（10.2±3.08）,瘤重体重比（0.029±0.017）低于阴性对照组（0.066±0.024）;治疗组生存期（11.8±3.12）与阴性对照组（10.2±3.08）相比差异有统计学意义（P〈0.05）,治疗组生存期长于阴性对照组。结论乳酸杆菌DM9811培养基滤液中存在核酸组分,为100200 bp的RNA片段。100μg/mL乳酸杆菌DM9811培养基滤液中RNA组分对结肠癌HT-29细胞系生长有明显抑制作用。RNA组分可以上调荷瘤鼠的细胞免疫水平,延长荷瘤鼠的生存期。     

食药用菌制作酸乳深层发酵培养基的比较

利用3种深层发酵培养基对灵芝和云芝进行深层发酵培养,所得的发酵滤液可以制成相应的灵芝和云芝酸乳.经测定采用这两种食药用真菌深层发酵滤液制成的酸乳营养丰富,并具有灵芝和云芝的药用价值;但使用不同的深层发酵培养基,酸乳的营养和理化特性有差异,通过比较可以选择出最佳深层发酵培养基.     

低氧环境对细胞培养基内氧浓度的影响

目的:测定不同氧环境下细胞培养基内的实际氧浓度,并探讨在细胞培养过程中,影响培养基内氧含量的因素。方法:利用光纤氧传感探头,对不同氧环境下、不同细胞培养容器中,以及常氧或低氧环境下换液前后RPMI1640培养基内的氧含量进行测定。结果:培养基中的氧含量可以随着外界氧环境的变化而改变;低氧环境下24孔板和35 mm皿中的氧含量要比25 cm2培养瓶稳定;常氧环境下换液使得培养基内的氧含量明显升高,而在低氧环境下换液则对培养基内的氧含量无明显影响。结论:在不同氧浓度下的细胞培养模型研究中,严格控制外界环境中的氧浓度,选用合适的细胞培养容器,并且在换液过程中尽量避免或减少培养基与常氧环境的接触,是维持培养基内氧含量稳定的重要因素。     

简讯

一种简易霉菌制片法在一张干净载玻片中央滴上一滴融化的霉菌琼脂培养基,倾斜玻片使其铺成一薄层。在培养基上滴一滴稀释的霉菌孢子悬液,然后把玻片放在湿盒中,或放在     

幽门螺杆菌L型培养基的研究

根据细菌Ｌ型的一般特点,以布氏肉汤为基础,利用正交试验方法和统计分析,研制出适合ＨＰ－Ｌ型生长的液体培养基,其成份包括：蛋白胨１％,胰蛋白陈１％,葡萄糖０．１％酵母粉０．２％,小牛血清１０％,Ｄ－蛋氨酸０．０２％,ＮａＣｌ１．５％,ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ１５ｍＭ,ＣａＣｌ２１０ｍＭ。ＨＰ－Ｌ型固体培养基则在此液体培养基的基础上,除去小牛血清另加０．８％琼脂和１５％羊血浆,ＨＰ－Ｌ型在此培养基上诱导成功,形成典型的“油煎蛋”菌落,在常规Ｓｋｉｒｒｏｗ平板上则不能生长。     

利用辣椒疫霉培养滤液体外筛选胡椒抗瘟病无性系研究

在胡椒（Piper nigrum Linn．)茎尖丛生增殖技术的基础上,以印尼大叶种“Lampong Type”无菌实生苗作外植体源,利用辣椒疫霉(Phytophthora capsici)培养滤液对胡椒茎尖及其增殖形成的丛生芽进行体外选择。辣椒疫霉培养滤液的不同灭菌方法对辣椒疫霉培养滤液的毒性影响显著,过滤灭菌方式可以保持辣椒疫霉培养滤液的毒性,而高温高压灭菌方式则不能。随着辣椒疫霉培养滤液浓度的增加,茎尖和丛生芽的存活率和增殖率都在下降。在存活的茎尖或丛生芽培养中,一部分可正常增殖,其余的形成愈伤组织,或者保持生长停滞的休眠状态。在选择性培养基上继代培养2次后进行生根和移栽,利用离体叶片针刺接种法对温室条件下生长的移栽植株进行抗瘟病测定。以3次抗病检测均无明显症状的植株作为抗病株。随着辣椒疫霉培养滤液浓度的增加,得到的再生植株数量降低,但其中抗病株的比例提高。利用过滤灭菌方式加入选择性培养基的处理中,25％、50％和75％的辣椒疫霉培养滤液分别获得1株、4株和3株抗病株,分别占各处理再生植株总数的1．54％、20．00％和42．86％,共获得8株,占该组处理再生植株总数的8．70％。     

食药用菌酸乳制作中深层发酵滤液添加量的比较

利用深层发酵培养基对两种食药用菌（香菇、猴头菌）进行深层发酵培养,然后分别将香菇（猴头菌）发酵滤液、奶粉、无菌水按不同比例配制成相应的复原奶,并接种乳酸菌制成酸乳。同时检测不同比例发酵滤液添加量所制得的酸乳的营养和理化特性,选择出了最佳比例的滤液添加量,即香菇滤液添加量以3份较好,而猴头菌则以4份滤液添加量最佳。