稻草秸秆纤维素分解菌的分离筛选

本研究基于获得高效木质纤维素分解菌的目的,以刚果红纤维素琼脂和滤纸条培养基为初筛培养基,从分离获得的124株真菌中筛选出透明圈与菌落直径比值较大、滤纸条分解能力较强的11个菌株.经液体发酵,测定其酶活力,复筛得到羧甲基纤维素酶活和滤纸酶活均较高的4个菌株;并进行了不同碳源和不同pH对筛选菌株产酶能力的影响试验,发现不同菌株对不同纤维素物质的分解能力不一样,同一菌株对不同纤维素碳源的利用能力也不相同.     

秸秆纤维素分解菌的酶活力测定

目的:测定秸秆纤维素分解菌的酶活力。方法:从土壤中分离出具有分解纤维素能力的菌株,采用刚果红染色法进行粗选,得到7株透明圈较大的菌株。将这7株菌株液体发酵培养6d,再分别用滤纸分解度观察、羧甲基纤维素酶活法(CMC)、滤纸酶活法(FPA)和天然纤维素酶活法测定其酶活力。结果:在7株菌株中,F-1、F-2、F-3、F-5的酶活力测定结果与其溶解圈的测定结果、滤纸分解结果基本相同。且天然纤维素酶活力高的菌株,其CMC酶活、FPA酶活也高,滤纸分解效果也比较明显。结论:CMC法、FPA法和天然纤维素酶活法适于测定秸秆纤维素分解菌的酶活力。     

白蚁栖息环境中蜡状芽孢杆菌的分离及其纤维素酶活性分析

【目的】了解白蚁栖息环境中有无降解纤维素的微生物。【方法】以羧甲基纤维素钠为唯一碳源,利用刚果红染色,根据透明圈大小进行筛选。通过显微形态、革兰氏染色及16S rRNA基因序列分析对菌株进行鉴定。DNS法测定菌株产纤维素酶与生长周期的关系,并进一步分析纤维素酶性质。【结果】从台湾乳白蚁(Coptotermes formosanus Shiraki)栖息环境中筛选到一株具有较高纤维素酶活性,革兰氏阳性菌株TT15,16S rDNA序列分析鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus Gd2T)。菌株培养前12 h没有纤维素酶活性,随着培养时间的增加,纤维素酶活性逐渐增大;当生长达到稳定期(48 h),酶活性达到最大并保持稳定。菌株TT15纤维素酶活性的最适pH和最适反应温度分别为5.0和50°C。【结论】从白蚁栖息环境中分离到一株具有较高纤维素酶活的蜡状芽孢杆菌TT15,可作为产细菌纤维素酶的优良菌株。     

嗜热放线菌的分离及其产酶与抗菌活性调查

从云南、宁波、南京、山东、北京等地采集的土样,树叶中分离到68株嗜热放线菌,对它们产淀粉酶、纤维素酶,蛋白酶及抗生素的情况进行了调查。结果表明:88％的菌株能产生水解淀粉透明圈,97％的菌株能产生水解蛋白透明圈,37％的菌株能在纤维素培养基上生长,5株菌具有抑制金黄色葡萄球菌生长的能力,5株菌能抑制水稻纹枯病菌,仅检查出一株菌能抑制大肠杆菌的生长.令人感兴趣的是Ⅲ_3’菌株对金黄色葡萄球菌的抑制能力极强,并能分泌紫色色素。其中,V_4’菌株产β-淀粉酶,经鉴定属于高温放线菌属(Thermoactinomy(?)ete),并命名为高温放线菌菌株V_4’)(Thermoactinomyces sp.)。     

发酵床中纤维素降解菌的分离与鉴定

从发酵床垫料中初步分离出43株纤维素降解菌。采用刚果红鉴别培养基及滤纸条培养基初筛,得到5株透明圈较大且使滤纸条产生崩解的菌株,通过进一步液体发酵,测定其CMC酶活、FPA酶活和天然纤维素酶活,获得2株具有较高纤维素降解活性菌株,并分别命名为F7和F21。经16S rRNA基因序列分子生物学鉴定和系统发育分析表明,这2株纤维素降解菌分别归属为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和链霉菌(Streptomyces sp.)。     

一株耐高温纤维素酶产生菌的分离和鉴定

为获得耐高温的纤维素酶产生菌,从农田旁稻草堆底取样,采用液体滤纸条试管法和纤维素刚果红平板法,分离到6株能够在45℃生长良好且降解纤维素的耐高温菌株,分别标为A1-A6,其中菌株A1透明圈直径和菌落直径比值为4,DNS法测定还原糖浓度较高,确定为实验菌株。菌体呈短杆状,G+,易褪色,具有运动性,过氧化氢酶、淀粉水解、明胶液化、甲基红试验、硫化氢、葡萄糖氧化发酵、P HB类脂粒、异染粒、纤维素分解、反硝化试验呈阳性,乙酰甲基甲醇试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、卵磷脂酶实验呈阴性,以FP A酶活为主,羧甲基纤维素酶活为辅。根据细菌形态、生理生化特征,参照《伯杰氏细菌系统鉴定手册》初步鉴定为纤维单胞菌属,即Cellulomonas。     

一株纤维素降解真菌的筛选及鉴定

[目的]分离筛选高效降解纤维素的真菌菌株,并研究其产酶能力.[方法]利用刚果红染色法从甘蔗地土壤中分离纤维素降解真菌,再通过测定滤纸的降解率及发酵酶活复筛.[结果]综合考虑水解圈,水解圈和菌株直径的比值(HC值),滤纸的降解率和复筛酶活,对试验真菌降解纤维素的能力进行综合评价,筛选到具有较强纤维素降解能力的真菌菌株SJ1,经形态学观察及分子生物学鉴定,该菌属于草酸青霉.其滤纸酶活、内切葡聚糖酶酶活(CMC酶活)、β-葡聚糖苷酶酶活和外切葡聚糖酶酶活(CBH酶活)分别为25.15、740.42、58.03和2.442 U/mL.[结论]菌株SJ1是一株十分具有研究开发潜力的纤维素酶生产菌株.     

青海高原降解纤维素微生物的调查、分离、鉴定

从青海高原林区分离筛选 3 0 0余株分解纤维素的细菌及 3 1株降解纤维素的真菌。测定纤维素分解菌含量土样为 2 6× 1 0 5 g。对纤维素酶水解圈较大的 1 1株真菌 ,根据其滤纸酶活筛选出一株分离自互助北山森林的高产纤维素酶的真菌No 0 1 43菌株 ,根据其形态学及培养特征鉴定为康氏木霉 (TrichodermakoningiiQudem) ,该菌湿固体发酵物含滤纸酶活力(FPA)为 1 5u g。该菌无毒副作用 ,可用于饲料业     

纤维素降解真菌A25-2的分离、鉴定及其产纤维素酶的酶学特性

本研究以Avicel-刚果红选择培养基为初筛培养基,从云南哀牢山国家级自然保护区和广西猫儿山国家级自然保护区的土壤样品中分离筛选得到4200株真菌,从中筛选出透明圈与菌落直径比较大、透明程度较为清晰的12个菌株。通过液体培养发酵,测定其上清液中的羧甲基纤维素酶活力、滤纸酶活力和Avicel酶活力,最终筛选出一株产该三种酶且其活力均最高的真菌菌株A25-2。通过对菌株A25-2形态学观察和其内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列同源性比对分析,将菌株A25-2鉴定为哈茨木霉(Hypocrea lixii)。酶活测定结果表明菌株A25-2产纤维素酶的酶活力较高,在最适作用pH4.5和最适作用温度55℃下,其羧甲基纤维素酶活力为2.26IU/mL,滤纸酶活力为0.58IU/mL,Avicel酶活力为0.39IU/mL。薄层层析实验表明A25-2具有完整的纤维素酶系统。因此,真菌A25-2可作为饲料加工等生产和纤维素酶相关研究的备选菌株。     

纤维素分解菌的选育及酶活测定

纤维素是地球上最丰富的有机物质,这些丰富的宝贵资源大部分被浪费了,而且由于部分地区焚烧秸杆造成了严重的环境污染。为了充分利用纤维素,纤维素分解菌的筛选研究逐步展开。通过新华滤纸为唯一碳源的杜氏培养基和刚果红纤维素培养基,从堆肥、污泥、马粪和土壤中分离得到7株纤维素分解菌。以5号菌株为出发菌株,经过紫外线诱变,用刚果红纤维素平板透明圈选育法得到8号菌株。为了评价筛选工作,对8株纤维素分解菌进行酶活测定。结果表明,8号菌株具有最高的CMC酶活和FPA酶活。     

一株具有脱胶功能大麻内生真菌的分离和鉴定

采用组织块法对大麻(Cannabis sativa)根、茎、叶等组织中的内生真菌进行分离,利用平板透明圈法筛选具有脱胶功能的菌株,对获得的脱胶菌菌株进行形态学鉴定和分子生物学鉴定。结果表明:(1)从大麻根、茎、叶的组织部位共分离得到内生真菌16株,茎部分离到9株真菌,叶部5株,根部2株。(2)编号为DM6的内生真菌具有较强的果胶分解能力,其透明圈直径为2.49cm。(3)形态学鉴定发现,内生真菌DM6不能产生孢子,菌丝较为粗壮、分支较少、有明显的隔;分子学鉴定表明,内生真菌DM6与Phoma aliena(KC311486)序列的相似性最高,为99%,并且在系统发育树上位于同一分支上。因而内生真菌DM6可以鉴定为茎点霉属一种(Phomasp.)。     

红托竹荪菌种快速分离培养基优化

通过对红托竹荪快速分离培养基优化,提高红托竹荪菌种分离与评价效率。采用响应面分析法,以菌种生长速度为响应值拟合二次多元回归方程,确定培养基配方;测定优化培养基与PDA对照培养基菌丝生长速度和菌丝直径,以菌丝形态、锁状联合和菌落形态等指标评价优化培养基;测定优化培养基与PDA培养基培养菌丝在木屑培养基中菌丝生长速度,验证应用效果。通过试验,筛选出快速分离培养基配方为葡萄糖20.71 g/L、全麦粉8.36 g/L、玉米粉8.07 g/L、琼脂粉18.00 g/L、木屑水1.06 L。快速分离培养基与PDA培养基对比,培养的菌落直径平均增加66.25%,快速分离培养基菌丝日平均生长速度增加33.33%,木屑培养基菌丝日平均生长速度增加44.22%。由于优化培养基中含有淀粉、纤维素等有效成分,其刺激了菌种分泌淀粉酶、纤维素酶等,维持了胞外酶系的完整性。还可根据菌丝培养基过程形成的透明圈大小判定菌种胞外酶产生能力,达到快速评价菌种质量,保障菌种质量的目的。     

一株富含碳水化合物微藻的筛选和分子鉴定

微藻生长快,单位体积碳水化合物产率高,是发酵生产生物乙醇的理想原料。本研究采用通气培养系统,对初筛得到的10株微藻进行分批培养,以单位体积碳水化合物产率为主要指标,筛选富含碳水化合物的优良藻种。研究结果显示：10株微藻的生物质干重、可溶性糖含量、碳水化合物含量和碳水化合物产率变化范围分别在0.922~1.965 g/L、4.42%~19.23%、26.8%~60.9% 和36.17~149.67 mg·L-1·d-1之间,其中藻株GZ-57的碳水化合物产率和可溶糖含量最高,分别为149.67 mg·L-1·d-1 和19.23%,表明藻株GZ-57是一株具有培养潜力的高产碳水化合物微藻。进一步对其进行形态特征及基于18S rDNA、ITS序列的分子系统学分析,发现藻株GZ-57与栅藻科（Scenedesmaceae）链带藻属（Desmodesmus）的极大链带藻（Desmodesmus maximus）亲缘关系较近,因此将其鉴定为极大链带藻（Desmodesmus maximus）。     

一株产右旋糖苷酶海洋细菌的筛选鉴定

【目的】筛选鉴定产右旋糖苷酶的海洋细菌,并对其所产右旋糖苷酶的酶学性质及在变异链球菌牙菌斑生物膜中的应用进行初步研究。【方法】利用平板透明圈法从海洋环境中筛选产右旋糖苷酶的细菌,根据菌株形态特征、生理特征及16S rDNA序列确定其分类学地位,采用体外生物膜模型研究该酶对变异链球菌牙菌斑生物膜形成的抑制作用。【结果】从海泥中筛选出一株产右旋糖苷酶的细菌KQ11,初步鉴定为节杆菌(Arthrobacter sp.)。该菌株的最适生长温度为30°C,最适生长pH 7.5,最适生长NaCl浓度为0.4%。右旋糖苷酶的最适作用温度为45°C,最适作用pH为5.5。该酶能有效地抑制变异链球菌牙菌斑生物膜的形成。【结论】菌株KQ11右旋糖苷酶能够抑制变异链球菌牙菌斑生物膜的形成,可望用于漱口液等口腔护理产品中。     

Correlation of Lactobacillus rhamnosus Genotypes and Carbohydrate Utilization Signatures Determined by Phenotype Profiling

Lactobacillus rhamnosus is a bacterial species commonly colonizing the gastrointestinal (GI) tract of humans and also frequently used in food products. While some strains have been studied extensively, physiological variability among isolates of the species found in healthy humans or their diet is largely unexplored. The aim of this study was to characterize the diversity of carbohydrate utilization capabilities of human isolates and food-derived strains of L. rhamnosus in relation to their niche of isolation and genotype. We investigated the genotypic and phenotypic diversity of 25 out of 65 L. rhamnosus strains from various niches, mainly human feces and fermented dairy products. Genetic fingerprinting of the strains by amplified fragment length polymorphism (AFLP) identified 11 distinct subgroups at 70% similarity and suggested niche enrichment within particular genetic clades. High-resolution carbohydrate utilization profiling (OmniLog) identified 14 carbon sources that could be used by all of the strains tested for growth, while the utilization of 58 carbon sources differed significantly between strains, enabling the stratification of L. rhamnosus strains into three metabolic clusters that partially correlate with the genotypic clades but appear uncorrelated with the strain''s origin of isolation. Draft genome sequences of 8 strains were generated and employed in a gene-trait matching (GTM) analysis together with the publicly available genomes of L. rhamnosus GG (ATCC 53103) and HN001 for several carbohydrates that were distinct for the different metabolic clusters: l-rhamnose, cellobiose, l-sorbose, and α-methyl-d-glucoside. From the analysis, candidate genes were identified that correlate with l-sorbose and α-methyl-d-glucoside utilization, and the proposed function of these genes could be confirmed by heterologous expression in a strain lacking the genes. This study expands our insight into the phenotypic and genotypic diversity of the species L. rhamnosus and explores the relationships between specific carbohydrate utilization capacities and genotype and/or niche adaptation of this species.     

2010年深圳地区诺如病毒的基因分型

了解2010年深圳地区诺如病毒的基因型别及分子流行病学特点。 用诺如病毒特异性引物（GI-SKF/GI-SKR、COG2F/G2-SKR）,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法进行诺如病毒核酸扩增,阳性产物回收纯化并测序,用Clustal W和MEGA4.0生物软件对诺如病毒序列进行序列比对和系统进化分析。 85份阳性标本中有79株诺如GⅡ型和6株诺如GⅠ型,其中55株为GⅡ/4(2006b)型,16株为GⅡ/4(2008variant)型,2株为GⅡ/1型,4株为GⅡ/5型,2株为GⅡ/11型,1株为GI/4型,2株为GI/5型,3株为GI/6型。 2010年深圳地区诺如病毒的主要型别是GI和GⅡ,并且以GⅡ/4型为主,流行优势株为GⅡ/4（2006b）。     

Polyphasic characterization and identification of the bioremediation agent Bacillus sp. SFC 500-1E

Bacillus sp. SFC 500-1E is used for the effective treatment of tannery effluents since it consistently removes hexavalent chromium from diverse contaminated matrices. The aim of the present study was to complete identification of the strain through a polyphasic characterization, which included the pattern of carbohydrate utilization, fatty acids profile, multilocus sequence analysis, multiplex PCR profile and the analysis of the complete genome sequence. Morpho-physiological and biochemical characterization results and analysis of 16S rRNA sequences were not conclusive. The strain formed a monophyletic clade with B. toyonensis BCT-7112, B. thuringiensis MC28 and B. cereus Rock 1–3. However, genomic comparisons with type strains of B. cereus and B. thuringiensis showed that the isolated belonged to a different species. Results of this study highlight the relevance of the genome sequence of this strain, identified as Bacillus toyonensis SFC 500-1E, to expand knowledge of its bioremediation potential and to explore unknown decontamination activities.     

高产磷酯酶C菌株筛选及其抗血小板功能的研究

在湖北省、湖南省、江苏省、山东省、广东省156个点采土样1268份,利用卵黄琼脂的LB培养基初筛获得产生乳白色晕圈的菌株648株;再用卵黄琼脂滤纸圆片检测获得产生乳白色晕圈和透明圈菌株266株;这些菌株用卵黄琼脂杯蝶法筛选出产生大于13．0mm乳白色晕圈及少量透明圈共73株,经过菌生物量、卵黄杯碟法和抗兔血小板聚集率的测定,从73株菌中筛选出15株,菌号为：183,198,247,424,587,596,692,744,754—1,791—2,779,970,998,1107,1182;将此15菌株经菌生物量、卵黄琼脂杯碟法、NPPC法和抗人血小板聚集率的测定,从中选出754—1,779,970,1107四株菌进行分类鉴定和已知菌CW—W—90—3菌对照比较的研究。     

右旋磷霉素生物转化菌株的筛选和鉴定

以右旋磷霉素为唯一碳源进行固体初筛和液体复筛,获得生物转化能力较强的32株菌;再以杀卤虫模型筛选具有杀虫活性物质的菌株,得到一株具有较强杀虫活性的真菌FM94,通过对该菌的形态特征观察及ITS序列分析,鉴定为腾仓赤霉（Gibberella fujikuroi）;初步考察其生物转化条件,结果表明在以右旋磷霉素为唯一碳源,初始pH值为3.5,转化培养第4d时转化产物杀卤虫活性最高。     

PCR-based identification and characterization of Burkholderia cepacia complex bacteria from clinical and environmental sources

AIMS: To study the genotypic identification and characterization of the 119 Burkholderia cepacia complex (Bcc) strains recovered from clinical and environmental sources in Japan and Thailand. METHODS AND RESULTS: Based on the results of analysis by 16S rDNA RFLP generated after digestion with DdeI, the Bcc strains were differentiated into two patterns: pattern 1 (including Burkholderia vietnamiensis) and pattern 2 (including B. cepacia genomovar I, Burkholderia cenocepacia and Burkholderia stabilis). All strains belonged to pattern 2 except for one strain. In the RFLP analysis of the recA gene using HaeIII, strains were separated into eight patterns designated as A, D, E, G, H, I, J and K, of which pattern K was new. Burkholderia cepacia epidemic strain marker (BCESM) encoded by esmR [corrected] and the pyrrolnitrin biosynthetic locus encoded by prnC were present in 22 strains (18%) and 88 strains (74%) from all sources, respectively. All esmR-positive [corrected] strains belonged to B. cenocepacia, whereas most prnC-positive strains belonged to B. cepacia genomovar I. CONCLUSIONS: Strains derived from clinical sources were assigned to B. cepacia genomovar I, B. cenocepacia, B. stabilis and B. vietnamiensis. The majority of Bcc strains from environmental sources (77 of a total 95 strains) belonged to B. cepacia genomovar I, whereas the rest belonged to B. cenocepacia. On the basis of genomovar-specific PCR and prnC RFLP analysis, strains belonging to recA pattern K were identified as B. cepacia genomovar I. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: This work provides the genotypic identification of a collection of the Bcc strains from Japan and Thailand. RFLP analysis of the prnC gene promises to be a useful method for differentiating Burkholderia pyrrocinia from B. cepacia genomovar I strains.