Cytochemische Lokalisation von Kalzium im Mantelepithel von Lymnaea stagnalis (Gastropoda)

Zusammenfassung Mit Oxalat wurde im äußeren Mantelepithel von Lymnaea stagnalis Kalzium gefällt und das Präzipitat im Elektronenmikroskop untersucht. Durch Kontroll- und Lösungsversuche wurde die Spezifität der Methode verdeutlicht.Im Drüsenpolster war äußerst wenig, im Manteldachepithel viel Niederschlag. Letzteres scheint demnach den Hauptanteil des Ca auszuscheiden.Kalziumoxalatkristalle fanden sich außerhalb der Zellen nur im extrapallealen Raum, nicht jedoch in den Interzellularen. Das Kalzium wird durch die Zellen transportiert; es tritt dort sowohl frei im Zellplasma, als auch in Vesikeln auf.

---

Cytochemical localization of calcium in the mantle epithelium of Lymnaea stagnalis

Summary Calcium was precipitated by the oxalate method and crystals were localized by electron microscopy in the outer mantle epithelium of Lymnaea stagnalis. The specificy of the method was demonstrated by controls and solubility tests.The supramarginal ridge contained extremely little precipitate in contrast to the epithelium of the mantle roof. Therefore it seems that this represents the major site of calcium secretion.Outside the cells crystals of calcium oxalate were found only in the extrapalleal space, not in the intercellular gaps. Calcium is transported through the cells, where it appears free in the cytoplasm as well as enclosed in vesicles.

     

Ist1 regulates Vps4 localization and assembly

The ESCRT protein complexes are recruited from the cytoplasm and assemble on the endosomal membrane into a protein network that functions in sorting of ubiquitinated transmembrane proteins into the multivesicular body (MVB) pathway. This transport pathway packages cargo proteins into vesicles that bud from the MVB limiting membrane into the lumen of the compartment and delivers these vesicles to the lysosome/vacuole for degradation. The dissociation of ESCRT machinery by the AAA-type ATPase Vps4 is a necessary late step in the formation of MVB vesicles. This ATP-consuming step is regulated by several Vps4-interacting proteins, including the newly identified regulator Ist1. Our data suggest that Ist1 has a dual role in the regulation of Vps4 activity: it localizes to the ESCRT machinery via Did2 where it positively regulates recruitment of Vps4 and it negatively regulates Vps4 by forming an Ist1-Vps4 heterodimer, in which Vps4 cannot bind to the ESCRT machinery. The activity of the MVB pathway might be in part determined by outcome of these two competing activities.     

Nicht typische Gestaltungsbewegungen,sondern Induktionsvorgänge bedingen medullare Entwicklung von Gastrulaektoderm

Zusammenfassung Die Arbeit stellt methodisch im wesentlichen eine Wiederholung der Transplantationsversuche vonGoerttler dar (1927 a, b), dessen Versuchsanbrdnung darin bestand, daß aus der frühen Gastrula von Urodelen ein Stück der seitlichen präsumptiven Medullarplatte oder der seitlichen präsumptiven Epidermis homöoplastisch in bestimmter günstiger oder ungünstiger Orientierung auf die Seite einer Neurula oder älterer Keime verpflanzt wurde. Methodisch hinzu kommen in dieser Arbeit (S. 594) die vorherige Vitalfärbung der meisten Spenderkeime, die Entnahme der Ektodermstücke nicht nur aus seitlichen, sondern auch aus medianen Bezirken und die Markierung der Entnahmestelle durch das aus dem Wirt stammende Epidermisstück, die Ausdehnung der Versuche auf noch ältere Wirtsstadien und auf die xenoplastische Kombination von Triton mit Amblystoma und endlich die Aufzucht der meisten Wirtskeime bis zur cytologischen Differenzierung der Transplantate.Es wird gezeigt, daß eine Differenzierung der präsumptiven Medullarplatte zu Medullarplatte und zu Neuralrohr nicht nur bei günstiger Orientierung in der Neurula erfolgt (S. 596, BestätigungGoerttlers), sondern, im Widerspruch zu den AngabenGoerttlers, in etwa demselben Prozentsatz der Fälle auch bei ungünstiger Orientierung (S. 598) und bei der Verwendung älterer Wirtskeime (S. 601). Auch bei der Transplantation von präsumptiver Epidermis verschiedener Herkunft auf dieselben seitlichen Bezirke der Neurula (S. 603) oder auf ältere Keime (S. 606) erhält man in unverminderter Häufigkeit medullare Differenzierung.Daraus folgt, daß weder die Orientierung der Transplantate, noch die prospektive Bedeutung des Ektoderms, noch die hier verwandten verschiedenen Wirtsstadien einen Einfluß auf die Häufigkeit einer medullaren Differenzierung der Transplantate haben. Das Gastrulaektoderm verhält sich im Hinblick auf die Potenz zur Neurahrohrbildung in allen seinen Bezirken übereinstimmend. Damit ist die Untauglichkeit der Versuchsanordnung zur Prüfung des Selbstdifferenzierungsvermögens von Gastrulaektoderm erwiesen. Die medullare Differenzierung ist in allen Fällen auf Induktionseinflüsse des Wirtes, speziell des dorsolateralen Mesoderms zurückzuführen. Eine herkunftsgemäße Gestaltungsbewegung (dynamische Determination) ist an den Implantaten weder nachweisbar, noch ließen sich durch ihr etwaiges Vorhandensein obige Befunde erklären.     

Recycling of cell surface membrane proteins from yeast endosomes is regulated by ubiquitinated Ist1

Upon internalization, many surface membrane proteins are recycled back to the plasma membrane. Although these endosomal trafficking pathways control surface protein activity, the precise regulatory features and division of labor between interconnected pathways are poorly defined. In yeast, we show recycling back to the surface occurs through distinct pathways. In addition to retrograde recycling pathways via the late Golgi, used by synaptobrevins and driven by cargo ubiquitination, we find nutrient transporter recycling bypasses the Golgi in a pathway driven by cargo deubiquitination. Nutrient transporters rapidly internalize to, and recycle from, endosomes marked by the ESCRT-III associated factor Ist1. This compartment serves as both “early” and “recycling” endosome. We show Ist1 is ubiquitinated and that this is required for proper endosomal recruitment and cargo recycling to the surface. Additionally, the essential ATPase Cdc48 and its adaptor Npl4 are required for recycling, potentially through regulation of ubiquitinated Ist1. This collectively suggests mechanistic features of recycling from endosomes to the plasma membrane are conserved.     

Novel Ist1-Did2 complex functions at a late step in multivesicular body sorting

In Saccharomyces cerevisiae, integral plasma membrane proteins destined for degradation and certain vacuolar membrane proteins are sorted into the lumen of the vacuole via the multivesicular body (MVB) sorting pathway, which depends on the sequential action of three endosomal sorting complexes required for transport. Here, we report the characterization of a new positive modulator of MVB sorting, Ist1. We show that endosomal recruitment of Ist1 depends on ESCRT-III. Deletion of IST1 alone does not cause cargo-sorting defects. However, synthetic genetic analysis of double mutants of IST1 and positive modulators of MVB sorting showed that ist1Delta is synthetic with vta1Delta and vps60Delta, indicating that Ist1 is also a positive component of the MVB-sorting pathway. Moreover, this approach revealed that Ist1-Did2 and Vta1-Vps60 compose two functional units. Ist1-Did2 and Vta1-Vps60 form specific physical complexes, and, like Did2 and Vta1, Ist1 binds to the AAA-ATPase Vps4. We provide evidence that the ist1Delta mutation exhibits a synthetic interaction with mutations in VPS2 (DID4) that compromise the Vps2-Vps4 interaction. We propose a model in which the Ist1-Did2 and Vta1-Vps60 complexes independently modulate late steps in the MVB-sorting pathway.     

Binding of Plasma Membrane Lipids Recruits the Yeast Integral Membrane Protein Ist2 to the Cortical ER

Recruitment of cytosolic proteins to individual membranes is governed by a combination of protein–protein and protein–membrane interactions. Many proteins recognize phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate [PI(4,5)P₂] at the cytosolic surface of the plasma membrane (PM). Here, we show that a protein–lipid interaction can also serve as a dominant signal for the sorting of integral membrane proteins. Interaction with phosphatidly-inositolphosphates (PIPs) at the PM is involved in the targeting of the polytopic yeast protein Ist2 to PM-associated domains of the cortical endoplasmic reticulum (ER). Moreover, binding of PI(4,5)P₂ at the PM functions as a dominant mechanism that targets other integral membrane proteins to PM-associated domains of the cortical ER. This sorting to a subdomain of the ER abolishes proteasomal degradation and trafficking along the classical secretory (sec) pathway. In combination with the localization of IST2 mRNA to the bud tip and other redundant signals in Ist2, binding of PIPs leads to efficient accumulation of Ist2 at domains of the cortical ER from where the protein may reach the PM independently of the function of the sec-pathway.     

Ist eine Unterscheidung der Genotypen der Blutgruppe A mit Hilfe eines thermodynamischen Effektes möglich?

Zusammenfassung Der Kern eines von Filitti-Wurmser u. Mitarb. seit 1946 veröffentlichten Verfahrens, das mit Hilfe eines thermodynamischen Effekts eine Differenzierung der Genotypen der Blutgruppe A erlauben soll, erwies sich bei Nachprüfung der wesentlichen Einzelschritte der Methode als ungeeignet: weder lassen sich A₁A₁-Seren von A₁O-Seren unterscheiden, noch sind die Resultate überhaupt reproduzierbar.

---

Summary The essentials of a method for the distinction of blood group A genotypes by their thermodynamic properties, published by Filitti-Wurmser and co-workers, were checked. By investigation of its chief details, this method was proven to be disappointing. Neither can A₁A₁ sera be distinguished from A₁O sera nor are the results reproducible at all.

---

Résumé La substance d'une méthode — publiée depuis 1946 de Filitti-Wurmser et coopérateurs — laquelle doit permettre une différenciation des génotypes du groupe sanguin A au moyen d'un effet thermodynamique, se montrait impropre quand les essentiels dégrés détaillés de la méthode furent verifiés. On ne peut pas distinguer les sérums A₁A₁ des sérums A₁O et les résultats sont pas du tout reproductibles.

---

---

Herrn Professor Dr. B. Mueller (Heidelberg) zur Vollendung des 70. Lebensjahres gewidmet.

---

Ein Auszug der Arbeit wurde anläßlich der 46. Tagung der Deutschen Gesellschaft für gerichtliche Medizin, Kiel 1967, vorgetragen.     

Yeast Ist2 recruits the endoplasmic reticulum to the plasma membrane and creates a ribosome-free membrane microcompartment

The endoplasmic reticulum (ER) forms contacts with the plasma membrane. These contacts are known to function in non-vesicular lipid transport and signaling. Ist2 resides in specific domains of the ER in Saccharomyces cerevisiae where it binds phosphoinositide lipids at the cytosolic face of the plasma membrane. Here, we report that Ist2 recruits domains of the yeast ER to the plasma membrane. Ist2 determines the amount of cortical ER present and the distance between the ER and the plasma membrane. Deletion of IST2 resulted in an increased distance between ER and plasma membrane and allowed access of ribosomes to the space between the two membranes. Cells that overexpress Ist2 showed an association of the nucleus with the plasma membrane. The morphology of the ER and yeast growth were sensitive to the abundance of Ist2. Moreover, Ist2-dependent effects on cytosolic pH and genetic interactions link Ist2 to the activity of the H(+) pump Pma1 in the plasma membrane during cellular adaptation to the growth phase of the culture. Consistently we found a partial colocalization of Ist2-containing cortical ER and Pma1-containing domains of the plasma membrane. Hence Ist2 may be critically positioned in domains that couple functions of the ER and the plasma membrane.