骨髓增生异常综合征化疗的进展

骨髓增生异常综合征(MDS)是造血干细胞恶性克隆性疾病,分成RA(难治性贫血)、RAS(环状铁粒幼细胞增多的难治性贫血)、RAEB(原始细胞增多的难治性贫血)、RAEB—T(转变中的原始细胞增多的难治性贫血)、CMML(慢性粒—单核细胞白血病)等阶段,其中RAEB、RAEB—T和CMML极易转成白血病,被认为是高危MDS,由MDS转成急性白血病后,化疗效果欠佳,完全缓解率低,生存期短.因此,如何使MDS不发展成白血病,甚至让其逆转为正常,达到治愈目的,是近年来治疗MDS的重要课题,现将有关MDS化疗研究近况进行综     

华蟾素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞株凋亡和增殖的影响

目的：探讨华蟾素对体外培养子宫内膜癌HEC-1-B细胞凋亡、增殖以及侵袭能力的影响。方法：体外培养HEC-1-B细胞,经不同浓度华蟾素（0．2mg／ml、2mg／ml和20mg／m1）干预24h后,采用MTT法观察细胞生长情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell小室检测细胞体外侵袭能力。结果：华蟾素能有效抑制HEC．1．B细胞生长,诱导细胞凋亡。未经华蟾素处理的细胞凋亡率仅为2．5％,经0．2mg／ml、2mg／ml、20mg／ml的华蟾素作用24h后,细胞凋亡率分别为7．4％、44．3％和78．5％。趋势卡方检验x^2=165．4983,P〈0．0001。HEC-1-B细胞经华蟾素作用后,细胞侵袭能力降低。在高浓度时,华蟾素有可能存在细胞毒作用。结论：华蟾素能通过诱导HEC-1-B细胞凋亡,从而抑制HEC-1-B细胞生长,并且降低细胞的侵袭能力。     

miRNA调控骨髓增生异常综合征的发生发展

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组起源于造血干细胞(HSC)的异质性克隆性疾患,以形态学改变(病态造血)和造血功能异常(无效造血)为主要特征,然而其发生、发展及白血病转化的分子机制尚不明确。MicroRNA(miRNA)是一类重要的非编码小分子RNA,在调控造血干细胞发育进程中起着重要作用,其在MDS的发生发展及白血病转化中的作用也逐渐被认识,以miRNA为分子靶点诊治造血干细胞受损疾患的研究具有广阔的应用前景。     

microRNA-21对人舌鳞癌细胞的增殖和凋亡的影响

目的:探讨micro RNA-21(mi R-21)对人舌鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:选取8例舌鳞癌组织和4例癌旁组织为研究材料,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)法对舌鳞癌及癌旁组织中的mi R-21相对表达量进行检测,利用人工合成的mi R-21mimic对人舌鳞癌Tca8113细胞进行瞬时转染,采用q RT-PCR法对Tca8113细胞中mi R-21相对表达量进行检测,采用四唑盐比色法(MTT)法对Tca8113细胞增殖情况进行检测,采用流式细胞术对Tca8113细胞周期与凋亡情况进行检测。结果:舌鳞癌组织中mi R-21的相对表达量(3.502±0.674),高于癌旁组织(0.998±0.192),差异有统计学意义(P0.05)。mi R-21mimic导致了Tca8113细胞中的mi R-21相对表达量上调(6.864±1.324),明显高于对照scramble组[(0.997±0.187),P0.05],对Tca8113细胞的增殖发挥了促进作用(P0.05)。经mi R-21mimic转染之后,Tca8113细胞进入S期的细胞出现了明显的增加[(27.4±5.1)%vs(48.6±8.7)%,P0.05],处于G1期的细胞出现了显著的减少[(56.3±9.6)%vs(36.2±7.2)%,P0.05],细胞凋亡数量出现了显著减少[(9.4±2.3)%vs(18.6±3.9)%,P0.05]。结论:mi R-21在舌鳞癌组织中高表达,过表达mi R-21有效促进了Tca8113细胞的增殖,抑制细胞的凋亡,mi R-21在舌鳞癌诊断和治疗可能具有一定的新型靶点价值。     

荧光原位杂交技术检测骨髓增生异常综合征染色体异常的临床意义

目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测骨髓增生异常综合征(MDS)染色体异常的敏感性,特异性及临床意义。方法:采用细胞遗传学分析(CCA)和组合探针CSF1R/D5S23,D5S721(5q33),EGR1/D5S23,D5S721(5q31),D7S486/CSP7(7q31),D7S522/CSP7(7q31),D20S108/CSP8(20q12/CSP8)检测45例MDS患者骨髓细胞的染色体异常,并比较检测结果。结果:两种方法共检出染色体异常26例(58%),染色体数目异常9例,占34.6%;染色体结构异常13例,占50%;复杂核型4例。CCA检出+8和20q-各3例,7q-2例;FISH检出7号染色体异常8例占17.8%(8/45),两组间比较差异有统计学意义(P=0.0441713)。FISH检出+8和20q-各5例,5q-异常4例。7号染色体异常和复杂核型组与核型正常组比较转白率高。结论:组合探针检出MDS中5q-,-7/7q-,+8,20q-核型异常高于CCA,CCA结合FISH技术能提高MDS染色体异常的检出率,对于疾病诊断,判断预后具有重要价值。     

去甲基化药物治疗骨髓增生异常综合征的研究进展

近年来表观遗传学研究在恶性肿瘤分型以及临床治疗方面发挥了重要作用。表观遗传是一种不涉及DNA序列变化的、可以在细胞分裂中传递的基因表达调控机制, 主要包括DNA甲基化和组蛋白乙酰化。其中DNA甲基化是目前人们研究最为深入的一种表观遗传学修饰方式, 主要发生在CpG二核苷酸序列的胞嘧啶上, 已经证实其与多种肿瘤发生密切相关。DNA甲基化的可诱导性和可逆性特点也为肿瘤发生机制的探讨和肿瘤治疗提供了新的途径。大量证据表明DNA甲基化在骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic syndrome, MDS)的形成与发展中发挥作用。两个去甲基化药物(阿扎胞苷和地西他滨)在临床上应用治疗高危和中高危的MDS病人取得的成功, 为MDS的病因研究和临床治疗带来了新的思路。文章主要就这两种药物对MDS的作用机制、应用效果和新的临床问题等方面进行综述, 增加对药物作用的理解, 为临床治疗提供更好的手段。     

Survivin反义寡核苷酸对人胆管癌QBC939细胞株凋亡增殖及survivin和cyclinD1表达的影响

目的:观察survivin反义寡核苷酸(Antisensc Oligodeoxynuleotide,ASDON)对人胆管癌QBC939细胞株凋亡增殖及survivin和cyclinD1表达的影响.方法:合成特异性靶向survivin ASODN,并将其转染QBC939细胞,流式细胞术观察survivin ASODN对QBC939细胞凋亡和增殖的影响;同时,应用免疫组化检测survivin ASODN对QBC939细胞中survivin和细胞周期素D1(cyclinD1)蛋白表达的影响.结果:ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),ASODN转染组细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05).ASODN组survivin和cyclinD1的蛋白表达明显低于对照组(P<0.05).结论:SurvivinASODN转染能诱导胆管癌细胞QBC939凋亡,抑制细胞增殖,并可下调survivin和cyclin D1蛋白表达.     

刺参酸性粘多糖对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响

目的:研究刺参酸性粘多糖(SJAMP)对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养Hela细胞;采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定SJAMP对Hela细胞的增殖抑制率;免疫细胞化学法检测SJAMP对Hela细胞内突变型P53、细胞周期抑制蛋白P21表达的影响.结果:SJAMP在体外抑制Hela细胞生长呈时效和量效关系;与对照组比,各SJAMP浓度组均能影响细胞周期调控因子p53、p21蛋白的表达:降低p53蛋白的表达(p＜0.05),刺激p21蛋白的表达(p＜0.05).结论:SJAMP可能通过调整细胞周期调节蛋白而在体外对宫颈癌Hela细胞起到生长抑制作用.     

11例恶性肿瘤继发性骨髓增生异常综合征病例分析

目的:分析恶性肿瘤继发骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic Syndrome,MDS)病例资料,寻找肿瘤继发MDS关键致病因素,并为原发病治疗风险评估提供参考依据。方法:采用回顾性研究方法,查阅北京中医药大学东直门医院肿瘤血液科2007年1月-2012年4月MDS患者住院病例,区分原发、继发两种类型,并对继发性MDS病例资料进行综合分析。结果:按照MDS诊断标准,在明确诊断的75例患者中,原发性64例,肿瘤继发11例,占14.67%。11例患者均为中老年人群,其中,65岁以上老龄患者7例,占63.6%;70岁以上老龄患者5例,占45.45%。肿瘤继发MDS,尤其是老龄患者特征为严重合并症多,生存质量差,生存期短。致病原因有多方面因素,其中,放化疗联合应用可增加肿瘤继发MDS的风险性。结论:恶性肿瘤及其相关治疗易继发MDS,放化疗联合应用可增加其风险性;老龄患者继发MDS的机会明显增加,且预后不良。因此,对于老龄肿瘤患者要认真评估治疗受益和相关风险。     

11例恶性肿瘤继发性骨髓增生异常综合征病例分析

目的：分析恶性肿瘤继发骨髓增生异常综合征（MyelodysplasticSyndrome,MDS）病例资料,寻找肿瘤继发MDS关键致病因素,并为原发病治疗风险评估提供参考依据。方法：采用回顾性研究方法,查阅北京中医药大学东直门医院肿瘤血液科2007年1月．2012年4月MDS患者住院病例,区分原发、继发两种类型,并对继发性MDS病例资料进行综合分析。结果：按照MDS诊断标准,在明确诊断的75例患者中,原发性64例,肿瘤继发11例,占14．67％。11例患者均为中老年人群,其中,65岁以上老龄患者7例,占63．6％;70岁以上老龄患者5例,占45．45％。肿瘤继发MDS,尤其是老龄患者特征为严重合并症多,生存质量差,生存期短。致病原因有多方面因素,其中,放化疗联合应用可增加肿瘤继发MDS的风险性。结论：恶性肿瘤及其相关治疗易继发MDS,放化疗联合应用可增加其风险性;老龄患者继发MDS的机会明显增加,且预后不良。因此,对于老龄肿瘤患者要认真评估治疗受益和相关风险。     

Akt基因转染对骨髓间充质干细胞缺氧时凋亡和增殖的影响

目的采用Akt基因转染鼠骨髓MSCs探讨Akt基因是否减轻MSCs缺氧时的凋亡和提高缺氧时的增殖能力,即耐缺氧能力。方法将转染和未转染Akt基因的MSCs置于94%N2、1%O2和5%CO2缺氧箱中37℃孵育不同时间（常氧、缺氧0.5h、1h、2h、4h和8h）后,Annexin V/PI双染法行流式细胞仪分析凋亡率（apoptoticrate,AR）和死亡率（deadrate,DR）、MTT法分析细胞增殖状态、Rt-PCR和Western blot等检测Akt和p-Akt表达以及放射同位素法检测MSCs对氚标-葡萄糖（^3H-G）的摄取等。结果1.Akt基因显著降低MSCs缺氧时AR和DR（P〈0.01）,而各缺氧时间点没有统计学意义（P〉0.05）;2.Akt基因显著增高MSCs常氧和缺氧（与未转染Akt基因MSCs同等条件下比较）时增殖能力（P〈0.01）,缺氧时增殖能力显著低于常氧时（P〈0.01）;3.Akt基因显著增高常氧时MSCsAkt mRNA（P〈0.01）和蛋白（P〈0.01）表达,而不增高p-Akt蛋白（P〉0.05）表达;Akt基因显著提高缺氧时p-Akt蛋白（P〈0.01）表达,而不提高常氧时p-Akt蛋白（P〉0.05）表达;4.Akt基因显著增高MSCs常氧和缺氧（与未转染Akt基因MSCs同等条件下比较）时^3H-G的摄取（P〈0.01）,缺氧时^3H-G的摄取显著性低于常氧培养时（P〈0.01）;^3H-G的摄取与细胞增殖显著正相关（r=0.79,P=0.015）而与细胞凋亡显著负相关（r=-1.47,P=0.023）。结论Akt基因转染可显著提高MSCs耐缺氧能力,此可能与缺氧时改善MSCs葡萄糖摄取等有关。     

Bmi-1基因表达在骨髓增生异常综合征中的临床意义

目的:探讨Bmi-1基因表达在骨髓增生异常综合征(MDS)中的临床意义。方法:选择2011年1月~2012年12月我院收治的MDS患者41例为研究组,另选取非恶性血液病患者20例为对照组,检测Bmi-1的表达水平,并检测其骨髓白血病干细胞免疫表型(CD34+CD38-CD123+),然后分析患者Bmi-1的表达水平与骨髓原始细胞比例及骨髓染色体核型的关系。结果:Bmi-1表达水平研究组患者明显高于对照组,且研究组中RA患者明显低于RAEB患者,但RA患者及RAEB患者均高于对照组(P0.01);Bmi-1基因高表达组白血病干细胞免疫表型CD34+CD38-CD123+/CD34+明显高于Bmi-1基因低表达组患者(P0.01);Bmi-1基因高表达组中,骨髓原始细胞5%的病例数及染色体不良核型发生率均高于低表达组。结论:Bmi-1基因的表达可以作为MDS患者在分子水平上的恶性程度标志之一。     

绿茶提取物对人肝癌细胞株SMMC-7721体外凋亡的影响

从茶多酚中分离提纯表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)单体。体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响;免疫细胞化学法和RT-PCR检测EGCG作用于SMMC-7721细胞后对Survivin、突变型P53 mRNA和蛋白表达的影响。结果显示在EGCG的作用下,SMMC-7721凋亡明显增加(P0.05);Survivin和突变型P53蛋白和mRNA表达水平均下调(P0.05)。表明EGCG可能通过下调人肝癌细胞株Survivin和突变型p53的表达,进而促进人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡,以达到抗癌作用。     

白色念珠菌对人口腔黏膜上皮角质细胞凋亡和增殖的影响

目的:探索白色念珠菌对人口腔黏膜上皮角质细胞(KB细胞)凋亡和增殖的影响。方法:分别培养孢子型白色念珠菌和菌丝型白色念珠菌,取健康志愿者的颊粘膜制备KB细胞,分别加入孢子型白色念珠菌(孢子组)和菌丝型白色念珠菌(菌丝组),另外取单纯KB细胞作为对照组。对比分析各组细胞凋亡率及各个周期的细胞数,统计分析各组细胞增殖指数(PI)。结果:菌丝组凋亡率显著高于对照组及孢子组(P0.05);菌丝组在G0/G1期的细胞比例均显著低于对照组及孢子组(P0.05);菌丝组在S期和G2/M期的细胞比例均显著高于对照组及孢子组(P0.05);菌丝组的PI显著高于孢子组和对照组(P0.05)。结论:菌丝型白色念珠菌可诱导KB细胞凋亡率的上升及改变KB细胞周期变化,并引起KB细胞的PI升高,对于临床上治疗口腔念珠菌病具有重要的指导意义。     

RNA干扰Ezrin体外对肾癌细胞株786-0增殖、凋亡的影响

目的：构建膜- 细胞骨架联接蛋白Ezrin 基因特异性短发卡RAN 表达载体（small hairpin RNA,shRNA）,探讨其对肾癌细胞株786-0 细胞凋亡、增殖的影响。方法：以Ezrin 为靶基因,以Pgenesil-1 质粒为载体,设计和构建重组体,设计2 条发夹式RNA（shRNA）,合成后克隆入载体Pgenesil-1,扩增并中量提取质粒,应用脂质体Lipofectamine 2000 转染进786-0 细胞,重组质粒转染786-0 肾癌细胞株,用运实时荧光定量PCR 进行筛选鉴定,筛选出抑制率较高的重组质粒载体shRNA-Ezrin1,用shRNA-Ezrin1转染786-0 细胞,采用MTT、流式细胞仪、电镜检测,观察RNA干扰Ezrin 后肾癌细胞株786-0 细胞增殖能力的改变。结果：shRNA干扰后786-0 细胞增殖活性减弱,G0/G1时段明显延长（P〈0.01）,PI缩短（P〈0.01）,细胞凋亡率增加（P〈0.01）。结论：Ezrin与肾癌细胞凋亡、增殖有关,有望成为肾癌基因治疗的一个新靶点。     

雷公藤红素对非小细胞肺癌细胞株H1299增殖与凋亡的影响

目的：研究雷公藤红素对非小细胞肺癌细胞株H1299的杀伤作用及相关调控机制。方法：用细胞计数法测定不同浓度雷公藤红素对H1299细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测H1299细胞的细胞周期;用Western blotting检测剪切的（cleaved）聚ADP核糖聚合酶（PARP）、cleaved caspase-3和低氧诱导因子-1（HIF-1）的表达水平;用DCF-DA染色和荧光显微镜检测细胞内的活性氧（ROS）水平;用萤光素酶活性测定法检测NFκB的活性。结果：雷公藤红素以时间和剂量依赖性的方式抑制H1299细胞的增殖,并使细胞阻滞在G2/M期。同时,雷公藤红素显著上调cleaved PARP和cleaved caspase-3的表达,提高细胞内的ROS水平,并且抑制NFκB的活性。结论：雷公藤红素以时间和剂量依赖性的方式抑制H1299细胞的增殖,并诱导caspase依赖性的细胞凋亡,具体机制与细胞内ROS的积累和NFκB的活性抑制有关。     

乳酸杆菌发酵滤液对人宫颈癌细胞株Hela细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响

目的观察乳酸杆菌DM9811发酵滤液对宫颈癌细胞株Hela细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响,探索乳酸杆菌发酵滤液对宫颈癌细胞作用的可能机制。方法用光镜、电镜和流式细胞仪分析不同浓度乳酸杆菌DM9811发酵滤液对Hela细胞凋亡的诱导效果;用流式细胞仪分析不同浓度乳酸杆菌DM9811发酵滤液对Hela细胞细胞周期的影响。结果（1）乳酸杆菌DM9811发酵滤液可诱导宫颈癌Hela细胞凋亡。形态学观察处理后的Hela细胞,可见细胞变形,细胞皱缩,体积变小,细胞间隙增大,细胞核固缩。流式细胞仪分析,1%、2%的乳酸杆菌DM9811发酵滤液在48、72h可诱导Hela细胞凋亡;5%的乳酸杆菌发酵滤液在24、48和72h均可诱导Hela细胞凋亡。（2）乳酸杆菌DM9811发酵滤液阻滞宫颈癌Hela细胞于S期,不同浓度的乳酸杆菌发酵滤液作用24、48和72h均可使S期细胞比阴性对照组增多。结论乳酸杆菌DM9811发酵滤液可诱导部分Hela细胞凋亡,其对Hela细胞的生长抑制作用可能通过S期阻滞实现。     

大豆低聚糖对人胃癌细胞株BGC-823细胞的细胞凋亡和细胞周期的影响

目的通过观察大豆低聚糖对胃癌癌细胞株BGC-823细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响,探索乳酸杆菌发酵滤液对胃癌细胞作用的可能机制。方法用光镜和流式细胞仪分析不同浓度大豆低聚糖对BGC-823细胞的凋亡诱导效果;用流式细胞仪分析不同浓度大豆低聚糖对BGC-823细胞细胞周期的影响。结果大豆低聚糖可以诱导BGC-823细胞的凋亡。形态学观察处理后的BGC-823细胞,可见细胞变形,细胞皱缩,体积变小,细胞间隙增大,细胞核固缩。流式细胞仪分析50 mg/ml和100 mg/ml大豆低聚糖作用48 h和72 h BGC-823细胞的凋亡比例,分别为6.76%和7.93%。50 mg/ml大豆低聚糖作用48 h,引起BGC-823细胞G1期阻滞,100 mg/ml大豆低聚糖作用48 h,引起BGC-823细胞出现S期阻滞。结论大豆低聚糖可诱导部分BGC-823细胞凋亡。大豆低聚糖对BGC-823细胞的生长抑制作用在低浓度时可能通过G1期阻滞实现,在高浓度时可能通过S期阻滞实现。     

异甘草素对人肺癌细胞株H460增殖、凋亡及NF-κB信号通路的影响

研究异甘草素对人肺癌NCI-H460细胞增殖、周期及凋亡的影响,并探讨其相关分子机制为其治疗肺癌提供新的科学依据。取对数生长期人肺癌NCI-H460细胞,用不同浓度异甘草素处理,采用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡的变化;PCR array检测肺癌相关基因mRNA表达;Western-blot检测p-p65,IκBα、IκBβ、Bax、Bcl-2表达量变化;细胞免疫荧光实验观察异甘草素对NF-κB p65分布的影响;结果显示,异甘草素能有效抑制人肺癌H460细胞的增殖和诱导细胞周期阻滞,并促进其凋亡,其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的活化,抑制NF-κB p65入核使其不能发挥转录活性,最终影响其下游凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达来实现的。     

三七总皂甙对人急性髓系白血病细胞株U937 的抑制增殖及诱导凋亡作用

目的:观察三七总皂甙(panax notoginsenosides,PNS)对人急性髓系白血病细胞株U937凋亡的影响,并探讨PNS对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法:将处于对数生长期的U937细胞分为5组:正常对照组及PNS组(5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40mg/L),药物作用12 h、24 h、48 h后,CCK-8比色法检测PNS对肿瘤细胞的相对细胞活力的影响;流式细胞术检测PNS促进细胞凋亡的能力;RT-PCR和Western blot法分别检测不同浓度的PNS对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:CCK-8分析显示,PNS在低浓度(≤40 mg/L)能明显抑制肿瘤细胞的活力,40 mg/L处理组较正常对照组细胞活力在3个时间点分别下降47%、72%、85%;与对照组相比,处理组的凋亡率显著增加,10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L实验组凋亡率分别上升7%、10%、43%;PNS能明显增加细胞内Bax mRNA及蛋白的表达,抑制Bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结论:PNS具有抑制人急性髓系白血病细胞株U937的增殖抑制及凋亡诱导作用,并能影响Bax和Bcl-2蛋白的表达。文章探讨了PNS抑制肿瘤发展可能存在的作用机制,为将来进一步研发PNS作为白血病治疗药物奠定基础。